用醛化猪红细胞进行犬细小病毒HA和HI试验

应用醛化猪红细胞替代新鲜猪红细胞进行犬细小病毒HA和HI试验表明,醛化红细胞在敏感性、特异性方面与新鲜红细胞相同,在4℃条件下至少可保存6个月,克服了新鲜红细胞不利因素对试验的影响,简化了犬细小病毒HA和HI试验程序。     

血凝试验和血凝抑制试验的影响因素及应对措施

介绍了血凝试验（HA）和血凝抑制试验（HI）中的常见问题,主要包括：对照孔凝集;全部凝集;红细胞全部下沉;标准阳性对照血清的抗体效价与原结果误差大于1个滴度;泪滴状流淌（完全血凝抑制）线细等;结果出现慢或结果出现快,并且整板无凝集现象等。分析了其影响因素,并提出了应对措施。     

草鱼出血病病毒血凝作用及影响因素

为了探明草鱼出血病病毒的血凝作用及其影响因素，应用血凝试验对此进行了测定，结果表明：病毒只对鸡红细胞引起高滴度凝集，这种凝集能被特异性抗血清所抑制；血凝的适宜pH为5.5-7.0,2%的氯化钠为较适宜的稀释液，血凝活性以在37℃温度条件下最好；出血病病鱼肠道的凝集价量高；醛化的鸡红细胞的4℃下保存一年多仍具有新鲜红细胞表面受体活性，从而使草鱼出血病的HA和HI试验更具有稳定性和广泛的实用性，建立了一种快速诊断草鱼出血病的方法。     

醛化红细胞在鸡新城疫血凝和血凝抑制试验中的应用

血凝试验（HA）和血凝抑制试验（HI）是疫情免疫监测及病毒鉴定的传统方法。然而此方法中一直使用的新鲜鸡红细胞由于性质不稳定,质脆易碎,保存稍久即可能污染细菌或溶血;应用时现采现配,麻烦费时,而且不同的鸡只或同一鸡只不同时期所采的红细胞的敏感性都可能存在差异。因此,试验重复性差、不易标准化,影响检测结果。本试验采用醛化红细胞作指示剂,对鸡新城疫病毒做了HA和HI平行比较试验,以检验醛化红细胞应用于病毒抗原和抗体检测的可行性。     

血凝和血凝抑制试验中的常见问题及解决方法

血凝和血凝抑制试验是用于检测受检血清抗体的试验。血凝（直接血凝）反应（HA）：某些病毒或病毒的血凝素,能选择性地使某种或某几种动物的红细胞发生凝集。血凝抑制反应（HI）：当病毒的悬液中先加入特异性抗体,且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时,则红细胞表面的受体就不能再与病毒颗粒或其血凝素直接接触,这时红细胞的凝集现象就被抑制。     

鸡新城疫血凝和血凝抑制试验实训实习效果分析

[目的]对某养鸡场的鸡新城疫抗体进行血清学检测,以有效评估鸡群的免疫状态,制定合理免疫程序。[方法]对永州市某养鸡场病鸡进行鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验,检测鸡新城疫抗体水平。[结果]在检测的60份血样中鸡新城疫抗体效价为1：8—1：4。鸡新城疫抗体效价≥1：16（410g2）的占13．3％,鸡新城疫抗体效价≥1：8（3lo2）的占21．7％,鸡新城疫抗体效价〈1：4（2log2）的占65％。[结论]该鸡场鸡群鸡瘟疫苗免疫失败。     

影响血凝抑制试验因素的研究进展

血凝抑制试验(HI)在畜牧业生产中应用非常广泛,但是影响其试验结果的因素较多.对红细胞、抗原、血清、稀释液、温度、作用时间及判定时间、试验器材、试验方法、判定方法和操作等因素对HI试验的影响进行了概述,以期能对生产应用提供参考.     

H1亚型猪流感病毒的分离鉴定

从山东、浙江、湖南、广西等地区各猪场采集30份疑似猪流感病猪的病料,通过鸡胚培养、血凝及血凝抑制试验、电镜观察、RT-PCR和测序分析进行了分离鉴定。结果从山东和湖南两地分离到4株有血凝活性的病毒,其中山东的2株病毒与新城疫病毒阳性血清的血凝抑制试验为阳性,通过电镜观察湖南的2株病毒具有猪流感病毒的特征,且与抗H1亚型猪流感病毒阳性血清的血凝抑制试验为阳性;根据H1亚型猪流感病毒HA基因设计引物,利用RT-PCR扩增出543bp片段,经序列分析证实该病毒为H1亚型猪流感病毒。     

新城疫抗体血凝抑制试验比对结果分析

为掌握某兽医实验室新城疫抗体血凝抑制(HI)试验能力,用新城疫标准阳性血清和阴性血清制备52份盲样,由6名检测技术员同时进行HI抗体检测。将检测结果与参考值进行比较,计算阳性、阴性一致性以及符合率,并用Win Episcope 2.0软件进行Kappa一致性检验,计算二者差值并进行统计描述。结果表明,312个检测值阳性率为13.5%,低于参考值15.4%的阳性率(p<0.01);二者阳性结果的一致性为68.8%(33/48),阴性结果一致性为96.6%(255/264),符合率为92.3%(288/312),Kappa值为0.69(95%置信区间0.58～0.80);检测值与参考值差值在2个滴度范围内浮动(95%置信区间-2.2～1.8),完全符合的占70.5%(220/312)。由此可知,该兽医实验室新城疫抗体HI试验定性结果与参考值一致性强度为高度,但在定量结果方面仍有进一步提升的空间。     

鸽新城疫病毒及鸽痘病毒血凝特性及HA试验技术参数研究

为研究鸽新城疫病毒(PNDV)和鸽痘病毒(PPV)的血凝特性,同时为2种病毒的血凝试验(HA试验)提出技术参数,分别采用鸡和鸽红血细胞(RBC),在不同反应介质和条件下进行病毒血凝试验。结果表明:①PNDV既能凝集鸡RBC,又能凝集鸽RBC,而PPV只凝集鸡RBC;②PNDV对0.5%鸡RBC血凝价比对1%鸡RBC血凝价高1~2个稀释度,而PPV对0.5%鸡RBC血凝价比对1%鸡RBC血凝价高5个稀释度;③PNDV和PPV对鸡RBC的HA凝集强度呈线性变化,而PNDV对鸽RBC的HA凝集强度呈非线性变化;④进行PNDV和PPV的HA试验的理想技术参数为:用0.5%鸡RBC,以0.89%生理盐水或pH 7.4 PBS为反应介质,PNDV于37℃作用30 m in时转至室温观察,重复观察应于35 m in内结束,而PPV应于37℃作用30 m in观察,观察后迅速放回37℃,重复观察应于10 m in内结束。     

兔瘟快速诊断的试验研究

使用醛化人“O”型红细胞和白瓷板进行血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验诊断兔瘟,1～2分钟即可判定结果,反应时间比常规法缩短60倍。具有快速定性、定量检测的特点。同时该法特异、快速、简易、经济,是一种易于在基层推广应用的新方法。     

浅谈血凝和血凝抑制试验操作要点

血凝和血凝抑制(HA-HI)试验是目前禽流感监测普遍采用的试验方法,用来鉴定流感病毒分离株,检测禽血清中的感染抗体或免疫抗体,为免疫效果评估和疫情监测提供科学依据.本文就HA-HI试验操作提出几点建议,供化验室工作人员参考.     

应用正向间接血凝试验检测山羊痘抗体

采用硫酸铵盐析、Sephadex G-200柱层析的方法纯化山羊痘病毒,以病毒抗原致敏绵羊红细胞建立了山羊痘正向间接血凝试验,并进行了最佳试验条件的摸索.结果表明,试验所制备的诊断液能与山羊痘参考阳性血清发生特异性凝集,其凝集现象能被山羊痘阳性抗原特异性抑制,与其它常见的动物病阳性血清无交叉反应.用本方法及琼脂扩散试验对山羊痘血清进行检测,IHA阳性检出率为89.1%（41/46）;而AGP阳性检出率为34.8%（16/46）.表明正向间接血凝试验比琼脂扩散试验敏感性高.本次试验制备的正向间接血凝试验诊断液可用于兽医临床上进行快速诊断.     

伪狂犬病毒血凝及血凝抑制试验

对两株伪狂犬病毒在４、２８、３７℃下进行血凝试验（ＨＡ）和血凝抑制试验（ＨＩ）。试验结果表明，伪狂犬病毒能够凝集小白鼠红血球，ＨＡ可被抗伪狂犬病毒的高免血清特异性抑制（１：６４）。并不受温度的影响。因此，该方法是诊断伪犬病的一种快速、简便、易于推广的方法。     

犬细小病毒AT-7株的分离与鉴定

通过采集疑似感染细小病毒(CPV)犬粪便,采用同步培养法接种胎猫肾细胞(FK81)进行病毒分离鉴定.通过PCR检测、HA试验、电镜观察、PEG纯化,获得1株犬细小病毒,并命名为AT-7株.感染的F81细胞48 h后出现明显的细胞病变;在感染的F81细胞中扩增出CPV基因的特异性片段;病毒液可凝集猪红细胞,血凝价为1:128,血凝性能被特异性抗体抑制.     

应用间接血凝试验检测牛肺疫抗体

自制1.5％绵羊红细胞诊断液并用于检测牛肺疫抗体,结果如下:(一)三批标准阳性血清(批号为8601、8301、8001)凝集价均在160倍以上,标准阴性血清(批号为8601)凝集度仅为10倍。15份被检血清IHA的阳性检出率(8/15)高于补体结合反应(CF,6/15)且凝集价均在40倍以上。(二)用牛肝片吸虫病、布氏杆菌病和附红细胞体病阳性血清作类症鉴别诊断,凝集度仅为10倍。(三)把牛肺疫CF8502抗原作倍比稀释,加2个凝集单位牛肺疫阳性血清8601和8301进行间接血凝抑制试验,分别被32倍和16倍稀释的抗原所抑制,本项试验结果表明IHA用于检测牛肺疫,具有检出率高、特异性强、设备要求简单、容易操作等特点,适于在现地推广应用。     

间接血凝试验检测鸡传染性法氏囊病抗体研究

本试验用鸡传染性法氏囊病(IBD)弱毒抗原致敏绵羊红细胞(SRBC),通过间接血凝试验(IHA)检测了10份接种 IBD 疫苗后第35日龄鸡的血清,10份高免血清,10份未免疫健康鸡血清,并辅以对流免疫电泳(CIEP)相对照。结果 IHA 与 CIEP 的阳性符合率为94.7％,并通过鉴别试验和间接血凝抑制试验,证明此法具有很高的特异性。     

应用反向间接血凝试验检测山羊痘病毒抗原

以兔抗山羊痘病毒IgG致敏绵羊红细胞，采用反向间接血凝试验(RPHA)检测山羊痘病毒抗原。该诊断试剂与山羊痘病毒抗原发生特异性的凝集反应；在PBS中不自凝；与其它动物病病毒抗原无交叉反应。对贵州省8个疫区现场采集山羊痘待检抗原检测结果表明，该方法阳性检出率为87．5％(7／8)。与琼脂扩散试验(AGP)阳性检出率为50％(4／8)相比较，RPHA敏感性比AGP高；同时对山羊痘野生强毒H—GZ株F1～F5代细胞培养物进行检测，F1代就可检出RPHA效价，而AGP则不能检测。该诊断试剂可用于兽医临床上山羊痘的快速诊断及作为病毒分离培养的检测指标。     

不同条件对ND、EDS—76病毒血凝性影响的观察

分别观察了不同稀释液、不同感作温度、不同红细胞浓度及不同感作时间对ND、EDS－76病毒HA效价、血凝特性及血凝解脱现象的影响。结果表明，在进行HA试验时，以PH7．2的PBS液为稀释液、0．5％鸡红细胞为指示系统、在37℃下感作20min或室温下感作30min为最适试验条件。各样品在0．5％红细胞下测得的HA效价比0．8％红细胞时平均高0．25－0．5个滴度，其它情况下测得的HA效价基本相同，但红细胞的凝集状态及观察结果的时间有所不同。其中，感作温度越高（37℃），出现结果越早，且凝集现象越明显，但解脱作用发生得也越快。ND病毒所引起的血凝现象仅可持续2h左右，而EDS－76病毒引起的血凝现象可持续至24h不发生解脱，这一特性可作为鉴别2种病毒的1个指标。     

鸡传染性支气管炎病毒血凝及血凝抑制试验的研究

鸡传染性支气管炎病毒血凝及血凝抑制试验的研究张秀美，艾武，王莉莉，宋敏训，牟建青（山东省农业科学院家禽研究所济南２５００２３）鸡传染性支气管炎是鸡的重要传染病之一。雏鸡接种后以气喘、气管罗音和咳嗽为主要特征。成鸡除呼吸道症状外，主要表现为产蛋减少，产...