玉米纹枯病拮抗内生细菌的筛选

从玉米成株期根、茎组织中分离获得232株内生细菌,在离体条件下筛选获得20株对玉米纹枯病菌具有显著拮抗作用的内生细菌,其中7株为枯草芽孢杆菌,占拮抗菌株的35%.B20-120、B20-006、B20-122、B21-072、B21-016、B20-070等6株拮抗细菌的发酵液对玉米种子萌发没有影响,进一步对其内生性(以抗利福平120 mg·mL-1为标记)及其对玉米的促生作用和玉米纹枯病的防治效果进行了研究.结果表明,供试6个拮抗菌株对玉米生长没有抑制作用,有的甚至有促进作用,并且能在体内繁殖,具可转移性.拮抗菌株B20-006和B20-120对纹枯病的防治效果最好,菌液浸种处理苗期防治效果分别为67.9%和62.3%,成株期分别为40.2%和39.1%.     

抗玉米蚜玉米内生菌的筛选

为探索防治玉米蚜的新方法,从山东省玉米主产区玉米植株上分离获得61株内生菌菌株,室内测定了对玉米蚜的防治效果,筛选出高效菌株,并测定了菌株对玉米生长的影响及在玉米植株内的定殖率。结果显示,白僵菌属菌株YC1和链格孢属菌株GX5对玉米蚜的防治效果最好,均为74.80%,无虫株率分别为32.22%和55.64%;接入菌株YC1和GX5后玉米各组织的生物量均大于对照,菌株YC1处理组的根、茎、叶干重分别增长了9.64%、15.71%和20.51%,菌株GX5处理组的根、茎、叶干重分别增长了3.88%、8.16%和9.14%;菌株GX5在玉米根、茎、叶中的定殖率可以达到44.23%以上,菌株YC1在玉米茎中的定殖率可以达到63.44%,有较大的应用价值。     

玉米自交系纹枯病抗性鉴定及抗病资源筛选

连续 2年以土壤接菌的方式对 45个玉米自交系进行田间纹枯病抗病性鉴定 ,同时对自交系R15和R0 9盆栽于玉米第 6叶鞘接种纹枯病菌进行抗病性比较。结果表明 :自交系间抗感性存在明显差异 ,抗感性在两年度间的表现也存在明显差异 ,但单个自交系在两年度的抗感性表现具有相对稳定性 ,自交系R15的抗性强于R0 9。 45份材料中没有发现对纹枯病菌表现免疫的自交系 ,其中 ,高抗材料占所鉴定总数的2.2% ,中抗占 17.8% ,中感占55.6% ,高感24.4%。依相对抗病性指数 ,从中选出最抗的和最感的自交系各 3个 ,以利于今后做玉米抗纹枯病基因的遗传分析     

温度对玉米纹枯病菌生长与发病的影响

室内控制性测定结果表明,玉米纹枯病菌(RhizoctoniasolaniAG1鄄IA)菌丝生长的温度10～35℃,最适温度25～30℃;菌核萌发温度18～35℃,最适温度25～30℃。在幼苗和离体叶鞘上由菌丝引起侵染和发病的温度15～35℃,以25～30℃最适宜,潜育期最短,病斑较大。田间分期播种观察分析,气温和地面温度与病害始见的历期(播种期至病害初见期)分别呈显著负相关和极显著负相关。在田间自然条件下,始病的温度为20℃左右。这些结果为了解玉米纹枯病的发生规律,开展预测预报提供了科学依据。     

玉米纹枯病研究进展

玉米纹枯病已成为我国玉米生产上一种重要病害,且有逐年加重的趋势。本文系统介绍了玉米纹枯病症状、病原菌、致病机理、发病规律、防治措施以及玉米纹枯病抗性遗传等方面的研究进展,并从实际出发,提出了抗玉米纹枯病育种的分子标记辅助选择策略。     

抗玉米纹枯病材料的鉴定及抗性遗传研究

 通过1997~2000年抗性鉴定,获得CML270为高抗玉米纹枯病且抗性稳定的抗性材料。该自交系在不同年份,对不同地理来源的玉米纹枯病强致病菌丝融合群AG 1 IA表现高抗(病情指数10左右),抗性表现明显优于国内玉米骨干自交系478和48-2。抗性遗传初步分析表明,玉米纹枯病抗性表现为质量-数量性状,抗性遗传受主效基因控制,同时受微效多基因修饰,最少基因数目4~7对。玉米纹枯病抗原的获得为最终解决玉米纹枯病危害提供了技术和材料支撑。     

内生真菌紫杉木霉ZJUF0986菌株及其活性代谢产物防治水稻纹枯病的效果

从南方红豆杉分离到的一种新内生真菌紫杉木霉Trichoderma taxi菌株ZJUF0986,与水稻纹枯病菌对峙培养。结果发现,该内生真菌通过菌丝缠绕附着等重寄生方式,导致纹枯病菌菌丝断裂或其内含物降解直至死亡。其产生的活性代谢产物也能强烈抑制纹枯病菌菌丝的生长,显著降低病原菌的菌核萌发率;对病原菌菌丝生长和菌核萌发的有效中浓度EC50分别为1．08和3．59μg／ml。盆栽试验结果表明,菌株ZJUF0986浓度80μg／ml的活性代谢产物对水稻纹枯病的防效达63．82％,与50μg／ml井冈霉素A的防治效果相当。     

玉米纹枯病菌细胞核纯化与原生质体转化的探讨

 引起玉米纹枯病的立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kühn)多为多核杂核真菌,也难以通过有性态使其细胞核进行单一化。利用原生质体再生的方法对单核玉米纹枯病菌JN的细胞核进行同核纯化,比较从单个原生质体再生菌获得的rDNA\|ITS序列,发现序列间存在差异,说明其细胞核没有达到预期纯化的效果。继而扩增了双核和多核玉米纹枯病菌的rDNA\|ITS序列,发现它们自身的rDNA\|ITS序列也存在差异,因此认为立枯丝核菌的这种rDNA\|ITS序列的差异可能是长期未经过有性阶段的结果且与其细胞核数目无关。使用转化丝状真菌的载体转化纹枯菌未获得稳定的转化子,进而对载体进行了改造,用纹枯菌(AG\|3)actin基因的启动子和终止子控制潮霉素基因构建了载体pRsA。利用PEG介导的原生质体转化方法,实现了对单核纹枯菌的转化,PCR验证得到3个转化子。但在PDA培养基连续继代5代后,转化子的潮霉素抗性消失。结果对改进纹枯菌的转化方法有借鉴意义。     

玉米纹枯病菌生物学特性初步研究

经对玉米纹枯病菌生物学特性初步测定表明，该菌丝体生长温度范围为７～４０℃，适宜温度２６～３２℃；菌核在２６～３２℃和ＲＨ９５％以上时，１０～１２ｈ就可萌发产生菌丝；病菌生长适宜的ｐＨ值为５．４～７．３；ＲＨ在８５％以上时菌丝才能侵入寄主，日光对菌核形成有刺激作用，但也抑制菌丝生长，菌核对紫外线有极强的抗性，２０Ｗ紫外灯连续照射６ｄ，对其萌发无影响。     

使君子内生真菌杀线虫活性菌株的筛选及其培养条件的研究

以松材线虫Bursaphelenchus xylophilus为靶标,从249株使君子Quisqualis indica内生真菌中筛选到活性较强的菌株10个,其中菌株FDYS-1活性最高,培养滤液对线虫的致死率达99%;培养滤液杀线活性热稳定性好,121℃处理20min仍不失活,而且活性物质的产生能力遗传稳定,连续继代6代后致死率仍达90.43%。单因子试验和正交试验结果表明,在PD培养液、初始pH5~8、150r/min、装液量100ml/500ml、接种7块菌饼（φ=5mm）的条件下培养3d,菌株FDYS-1生长最好,滤液杀线活性最强,稀释3倍后对松材线虫的致死率仍高达96.45%。正交试验极差分析表明,培养时间是影响培养滤液杀线活性的关键因子。形态学观察和ITS序列分析初步确定菌株FDYS-1为炭角菌属Xylaria sp.真菌。     

芝麻立枯病内生生防细菌的筛选

利用表面消毒涂布平板的方法从大田健康芝麻根内分离芝麻内生细菌399株。平板对峙试验结果显示,176株细菌对立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)有不同程度的拮抗能力,其中编号为B16、b10、D31、e23、G10、I10的6个菌株在PDA平板上对于立枯丝核菌具有极强的抑制作用,对西瓜枯萎病菌、西瓜炭疽病菌、小麦全蚀病菌和油菜菌核病菌也表现出广谱的抑菌作用。利用胶体几丁质和胶体壳聚糖作为唯一碳源,测定了上述6株细菌产生几丁质酶和壳聚糖酶的能力,发现b10和G10具有产壳聚糖酶的能力,I10有产几丁质酶的能力。活体盆栽试验测定了上述6株细菌对芝麻立枯病的生防效果,结果显示测定的6株细菌均具有一定的防治效果,其中G10的生防效果最好,可达到52%。利用胶体壳聚糖作为唯一碳源的选择性培养基测定了G10菌株在芝麻根系内部的定殖动态,发现G10在芝麻根部可以长期定殖。     

马铃薯立枯丝核菌生物学特性研究

采用生长速率法研究了黑龙江省马铃薯立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kühn)菌丝生长的条件。结果表明病菌菌丝在10~35℃均能生长,适宜温度是25~30℃,30℃菌丝生长最快。在pH为3~12的范围内病菌菌丝均能生长,以pH 5~7菌丝生长速度较快。黑暗对菌丝生长有促进作用,光照可促进菌核的形成。不同碳源、氮源对立枯丝核菌菌丝生长的影响均较明显,可溶性淀粉和酵母粉对菌丝生长有显著的促进作用。立枯丝核菌菌丝体及菌核的致死温度分别为49℃和51℃。明确了黑龙江省马铃薯立枯丝核菌生长的环境条件,可为病害防治提供理论依据。     

水稻纹枯病生防内生菌糖蜜草固氮螺菌的分离与鉴定

 本文首先对砂仁内生细菌进行分离,以水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)为靶标菌对获得菌株进行离体拮抗活性、盆栽及田间试验测定。结果表明：获得的27株内生细菌中有4株具有较好的离体抑菌活性,其中SRJ2-4抑菌效果最好,抑菌带达到18 mm;SRJ2-4的盆栽防效及田间防效分别为80.7%与79.4%,与其它菌株相比达极显著水平。SRJ2-4处理的亩产量为488.79 kg,高于其他药剂处理。对该菌株形态、生理生化及16S rDNA序列进行分析,将该内生菌鉴定为糖蜜草固氮螺菌(Azospirillum melinis)。     

鸭粪中1株水稻纹枯病菌拮抗细菌的鉴定

为探索稻鸭复合生态系统抑制水稻纹枯病发生的作用机理,以从鸭粪中分离到的1株拮抗细菌A168对水稻纹枯病菌的拮抗效果进行了研究。测定了其对水稻纹枯病菌的拮抗作用及其抑菌谱;根据培养性状、形态特征、生理生化测定、扫描电镜观察及16S rDNA序列分析对其进行了鉴定;构建了包括其在内的13株相关种属菌株的系统发育树。A168菌株对水稻纹枯病有明显的拮抗作用,且对小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)和油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)有抑制作用,抑菌谱广;A168菌体杆状,革兰氏染色阳性、芽孢中生、周生鞭毛、16S rDNA分析与其亲缘关系较近菌株Bacillus cereus(AJ577288.1)的同源性达99%,结合形态和生理生化特征,鉴定A168菌株为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus),其16S rDNA序列已在GenBank中注册,登录号为GQ118339。A168为开发防治水稻纹枯病生防制剂提供了依据。     

水稻纹枯病菌菌核上的真菌和细菌种类及其对水稻纹枯病菌生长的影响

 A total of 136 fungal and 86 bacterial isolates were isolated from the sclerotia of Rhizoctonia solani,collected from three different sources.These fungal isolates were identified as the following 12 genera:Alternaria,Aspergillus,Cladosporium,Coniothyrium,Curvularia,Gliocladium,Fusarium,Metarhizium,Peni-cillium,Phoma,Phytophthora and Trichoderma.Some isolates of Trichoderma and Gliocladium were found to inhibit the growth of R.solani strongly in vitro.Among the 86 bacterial isolates,20 of them could inhibit the growth of R.solani,whereas 5 isolates were found to promote the growth of mycelia and the formation of sclerotia of R.solani.These bacterial isolates with antagonistic actives to R.solani were identified as Bacillus and Pseudomonas.     

南方红豆杉内生真菌的抗菌活性

从南方红豆杉中分离到549株内生真菌,以终极腐霉Pythiumultimum、立枯丝核菌Rhizocto-niasolani为靶标菌进行抗菌活性的筛选。结果表明,对终极腐霉、立枯丝核菌的半抑制稀释倍数(ID50)在10以上的活性菌株分别为20株(占总菌株的3.6%)和15株(占总菌株的2.8%)。其中矮棒曲霉Aspergillusclavatonanicus菌株F0028对这两种病原菌的活性最高(对终极腐霉、立枯丝核菌的ID50分别为278±15.0、108±18.6)。进一步研究表明,F0028发酵液在pH值为1.0~7.0之间均有较强的抑菌活性;经高温高压处理后抑菌活性仍达到了对照的(65±3.8)%。发酵液经高效液相色谱纯化得到5种化合物,活性测定表明,5种化合物对终极腐霉、立枯丝核菌均有不同程度的抑制作用,半抑制浓度(EC50)在7.0~45μg/mL之间。     

茄科蔬菜立枯丝核菌的融合群鉴定

 Sixty-five samples were collected from rhizosphere soil, hot pepper and tomato plants showing damping-off, root rot and stem rot in Taian, Shouguang of Shandong province and Zhouzhi, Taibai of Shaanxi province. Thirty-nine Rhizoctonia solani isolates were obtained from these samples. The results of anastomosis group (AG) identification and sequence analysis of 5.8S rDNA-ITS of the isolates showed that thirty-six isolates (92.3%) belonged to AG-4, while only three (7.7%) belonged to AG-5. The isolates of AG4 could further be divided into two subgroups of AG4-HG-Ⅰ and AG4-HG-Ⅲ. The 5.8S rDNA-ITS sequences of the selected isolates of the two subgroups had the 99%-100% identity with standard isolates of AG4-HG-Ⅰ and AG4-HG-Ⅲ (from GenBank). Among the analyzed isolates, AG4-HG-Ⅰ subgroup was the dominant with the frequency of 79.5%. Subgroup AG-4-HG-Ⅲ with the frequency of 12.8% was the second. This is the first report that subgroup AG4-HG-Ⅲ of R. solani isolated from Solanaceae vegetable crops in China.     

细胞微丝骨架在玉米抗纹枯病菌Rhizoctonia solani 侵染中的作用

为探究细胞微丝骨架在玉米抗纹枯病侵染过程中的作用,采用微丝骨架解聚剂LatB预处理玉米离体叶片后接种立枯丝核菌Rhizoctonia solani AG1-IA,显微观察病原菌的侵染过程,并检测活性氧(ROS)、细胞坏死及抗病基因(PR1、ZmDREB2A)表达等抗病反应情况。结果显示,与未经LatB预处理相比,LatB预处理加快了R.solani侵染后玉米病斑的形成,并影响了侵染结构的发育;在侵染后期,LatB促进了R.solani诱导的玉米叶片中ROS积累、细胞坏死反应和PR1基因表达;溶剂DMSO预处理与未经LatB预处理的结果类似,表明DMSO对本试验的影响较小。研究表明,细胞微丝骨架不仅参与玉米抗R.solani的侵入,而且通过调控ROS、PR1基因表达,细胞死亡等抗病信号提高玉米抗病防御能力。本研究为进一步研究细胞微丝骨架在玉米对纹枯病的抗病机理中的作用提供了重要参考。     

啶酰菌胺与氟啶胺复配物对水稻纹枯病菌和草莓灰霉病菌的增效作用研究

为探明啶酰菌胺与氟啶胺复配物对水稻纹枯病菌和草莓灰霉病菌的增效潜力,采用菌丝生长速率法测定啶酰菌胺和氟啶胺复配物对水稻纹枯病菌和草莓灰霉病菌的抑制效果,并根据Wadley方法评价复配物增效作用。结果表明:啶酰菌胺和氟啶胺对水稻纹枯病菌均具有抑制作用,其EC50分别为0.483 6μg/mL和0.054 1μg/mL。将啶酰菌胺和氟啶胺按照1∶5、1∶4、1∶3、1∶2、1∶1、2∶3、3∶2、5∶1、4∶1、3∶1和2∶1的比例进行复配,结果表明:按照1∶2、3∶2、5∶1、4∶1、3∶1和2∶1复配对水稻纹枯病菌均具有增效作用,其中以3∶1和3∶2比例复配增效最佳,增效系数分别为7.7和5.46;以1∶1、1∶3、1∶4、1∶5和2∶3复配对水稻纹枯病菌具有相加作用。啶酰菌胺和氟啶胺对草莓灰霉病菌也具有抑制作用,其EC50分别为1.637 1μg/mL和0.028 3μg/mL。将啶酰菌胺和氟啶胺按照上述相同11种比例进行复配,结果显示比例为1∶5、1∶4、1∶1、5∶1、4∶1等8种复配物对草莓灰霉病菌具有相加作用,其中以2∶1和1∶2比例复配相加效果最佳,增效系数分别为1.30和1.00,但比例为3∶2等其他比例复配则对草莓灰霉病菌表现出拮抗作用。     

水稻纹枯病菌毒素致病机理研究

 Crude toxin of Rhizoctonia solani(RS-toxin) caused obvious damage to the cell of rice.The permeability of cell membrane changed and phosphorous permeated exterior when the sheath and leaves were treated with RS-toxin.After 12 hours treated with RS-toxin,chloroplast membrane was damaged and lamella was relaxed and swollen,with some cavities in the chloroplast.Treated with RS-toxin for 36 hours,the chloroplast was disassembled,other organelles became unclear and disappeared such as mitochondria,and some parts of the cell wall thinned and loosed.Treated with 10 times diluted RS-toxin,the chlorophyll content in the rice plants was reduced over 85%.With higher RS-toxin concentration and longer treatment time,the lower the chlorophyll content became.