小麦幼胚愈伤组织的遗传转化

将从水稻中提取的抗性调节转录因子OsDREB2.2基因,通过农杆菌介导进入小麦组织细胞内的方法,培育筛选稳定遗传的植株,使小麦中的一系列抗性基因得以表达,从而培育出抗逆性强的小麦新品种。采用河北农业大学自主培育的小麦新品种河农825、河农827、河农831等为试验材料,以各自幼胚为外植体,诱导的愈伤侵染农杆菌后,获得的抗性愈伤组织数平均为170.44、分化愈伤数平均为24.56、抗性芽与转化幼胚总数的比例平均为0.96%。表明本研究中采用的愈伤组织诱导、农杆菌侵染和植株再生条件是适宜的。     

小麦幼胚愈伤组织的诱导

为建立小麦(Triticum aestivum Linn.)幼胚的转化体系,获得转基因的小麦再生植株,对小麦幼胚进行愈伤组织诱导。以新春6号和新春9号小麦幼胚为试验材料,选择不同诱导培养基对幼胚进行愈伤组织诱导。结果表明,4种培养基诱导的愈伤组织质量和诱导率有明显的差异,其中MCIMA+KT高于其他3种培养基,新春6号和新春9号诱导率分别为53.80%和52.25%,愈伤组织的质量级别为A级,属于极适宜进行遗传转化状态。SD2培养基上诱导出的2个小麦品种愈伤组织分别为0.002%和0.59%,是不适宜进行遗传转化的培养基。新春6号和新春9号2个基因型诱导的愈伤组织数量和质量之间没有明显差异,适于进行遗传转化。     

小麦幼胚胚性愈伤组织诱导和再分化研究

以4个小麦品种的幼胚为外植体,通过脱分化和再分化培养,研究了影响小麦幼胚愈伤组织诱导和再分化的因素。结果表明:小麦幼胚胚性愈伤组织的诱导和再分化主要受基因型的限制,同时也受培养基组成的影响;培养基中添加0.5mg/L的ABA不利于胚性愈伤组织的诱导和分化;胚性愈伤组织诱导率和幼苗分化率之间呈极显著正相关,提高胚性愈伤组织的诱导率和形成量是建立小麦植株再生体系的关键。     

影响玉米幼胚愈伤组织诱导及植株再生因素的研究

玉米是世界第三大粮食作物和重要的饲料作物,也是现代食品、化学工业的重要原料。玉米的胚性愈伤组织普遍作为转基因过程中外源基因的直接受体,利用玉米幼胚进行组织培养是高效获得胚性愈伤组织的主要途径。选用抗性好、适宜本地种植的玉米自交系幼胚进行了外植体的愈伤组织诱导研究,建立了具有胚性的愈伤组织培养体系,为玉米遗传转化提供了受体材料。     

影响小麦成熟胚愈伤组织诱导因素的研究

采用河南的5种不同品种小麦成熟胚为外植体进行愈伤组织的诱导,采用不同质量浓度梯度的5种诱导培养基和3种继代培养基,着重研究影响愈伤组织及胚性愈伤组织诱导的一些因素,以挑选出较好的愈伤组织,为进一步的遗传转化研究奠定基础。结果表明：不同品种间出愈率及植株再生率差异显著,周麦18号在5个小麦品种中表现最佳,郑麦9023次之。同时还发现培养基的成份也起着重要作用,2,4-D是诱导必需的生长素,使用浓度的范围为2.0～4.0 mg/L,浓度太低时愈伤组织质量差,颜色泛白,水浸状严重,但浓度太高会降低愈伤组织的生长速度,并明显抑制器官分化;另外VB1和脯氨酸在愈伤组织诱导时也起到不可忽视作用;继代培养中ABA明显改善了愈伤组织的状态,最佳使用浓度为0.3 mg/L。     

幼胚胚性愈伤组织诱导的研究

试验以油幼胚为材料,研究外植体大小、低温处理、基本培养基类型、碳源、培养基中的2,4-D浓度、AgNO3的添加与否对胚性愈伤组织诱导的影响,结果表明,长轴为5~7.9 mm低温处理18 h的幼胚,诱导胚性愈伤组织的效果最好;使用山梨醇(浓度为3%)为碳源、含氮量低的WPM培养基,胚性愈伤组织的诱导效果优于蔗糖为碳源、含氮量高的MS培养基;幼胚胚性愈伤组织诱导的最适2,4-D浓度为2.0 mg/L,培养基中附加5.0 mg/L AgNO3有助于提高胚性愈伤组织的诱导率。     

小麦幼胚愈伤组织辐照后代的遗传变异分析

以３个普通小麦品种为材料，用＾６０Ｃｏγ射线辐照小麦幼胚愈伤组织，在ＭＲ１、ＭＲ２代中才观察到广泛变异，其后代在育性、株高、抽穗期、千粒重、株型、蛋白质含量等方面者发生了明显变异，这些变异较单纯用组织培养得到的无性系的后代的变异频率更大，变异范围也更为广泛，并且从ＭＲ２中得到了几个有较高利用价值的变异株系。     

小麦胚愈伤组织的诱导和植株再生

对3个小麦品种的成熟胚及幼胚进行培养，研究不同基因型、培养基对愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明，不同培养基对小麦愈伤组织诱导有一定影响；不同基因型的小麦愈伤组织诱导、分化及生根的能力有一定差别。陕280愈伤组织诱导率及分化率最高。同一品种不同外植体经诱导后愈伤组织产生的能力有所不同，同一品种愈伤组织的诱导率幼胚比成熟胚愈伤组织的高。     

小麦胚性愈伤组织诱导研究

研究了不同基因型、低温处理时间、激素和蔗糖浓度及生根条件等对小麦幼胚培养再分化能力的影响。结果表明:在该体系优化的条件下,诱导胚性愈伤组织的频率为80.88 %,胚性愈伤组织分化的频率为97.30 %,分化芽的生根率为90.00 % 以上;筛选出栽培品种(系)6-90可以作为遗传转化的良好受体。     

玉米幼胚愈伤组织的诱导和继代

用玉米未成熟幼胚作为外植体，以N6培养基为基本培养基。将套袋授粉后11～14d的幼胚进行离体组织培养，诱导愈伤组织和胚状体，幼胚在培养基上7～15d时逐渐增殖愈伤组织和胚状体。2，4-D是愈伤组织诱导的重要因素。试验表明：幼胚长度、基因型、培养基成分的变化对愈伤组织的诱导有一定影响。     

胚龄对小麦盾片组织培养的影响

研究了播种时间、取材时间和盾片大小对小麦愈伤组织诱导、器官分化和植株再生的影响。结果表明,元月初播种的材料具备很好的盾片组织培养效果,生根和绿点率都可达100%,植株再生频率平均为46％,开花后第16d取材,生根和绿点率都达100％,植株再生频率平均达80％,达到最佳组织培养效果的的盾片大小为0．15～0.20cm。     

平阳霉素对小麦幼胚愈伤组织发生及其植株再生的影响

本试验研究了不同浓度的平阳霉素对小麦幼胚离体培养条件下愈伤组织发生及植株再生的影响。结果表明:1.0～1.5mm长的幼胚,在MS+2,4—D2mg/L+NAAO.5mg/L+CH200mg/L固体培养基上,10～40μg/ml的平阳霉素可作为对小麦幼胚外植体离体培养时的适宜诱变浓度。     

应用正交试验法优化玉米幼胚诱导胚性愈伤的研究

[目的]为提高不同玉米自交系幼胚胚性愈伤组织诱导提供参考。[方法]以玉米幼胚为外植体,对其进行诱导和继代,通过正交试验设计L16（4^5）,研究不同品种、蔗糖浓度、pH值、2,4-D浓度4个因素及水平对非胚性愈伤组织转化为胚性愈伤组织的影响。[结果]各因素对诱导胚性愈伤组织的影响次序是：品种〉pH值〉2,4-D浓度〉蔗糖浓度,其中品种和pH值均达到极显著水平。各品种产生胚性愈伤由易到难的顺序依次是：H99〉D988〉7922〉D598。诱导产生胚性愈伤组织的最优组合为A1B4C4D1,即玉米自交系H99、蔗糖浓度35.0 g/L、pH值5.8、2,4-D浓度1.0 mg/L。[结论]基因型是影响胚性愈伤组织产生的最主要因素,培养基酸碱度对胚性愈伤组织的产生影响较大。     

黑龙江7个春麦小麦品种幼胚愈伤诱导和植株再生研究

选用来自黑龙江的7个不同基因型小麦品种,以幼胚为外植体,MS为基本培养基,通过选用不同浓度的激素和有机物,设计了4种诱导培养基和10种分化培养基,研究不同基因型在不同培养基上愈伤诱导及植株再生能力。结果显示,7个不同基因型小麦在MS4诱导培养基上均具有较高的愈伤诱导率,平均达92.7%,其中“农麦30”愈伤平均诱导率高达94.4%。不同分化培养基下出芽率与基因型显著相关,不同基因型有不同的最适分化培养基。农麦30和农麦12受激素的种类和量影响较小,10种分化培养基上的出芽率都在较高的水平上,是良好的转基因材料。     

赤皮青冈幼胚愈伤组织诱导的研究

以赤皮青冈幼胚为外植体,以MS为基本培养基,探讨了2,4-D和6-BA两种激素共同作用下对赤皮青冈幼胚诱导的影响,以及在4℃条件下不同冷藏天数(5、15、30 d)和不同激素(6-BA和2,4-D)浓度组合对赤皮青冈幼胚诱导的影响。结果表明:6-BA对愈伤组织诱导的影响较大;接种在MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+0.1g/L肌醇+1.0g/L水解酪蛋白培养基上的幼胚,以4℃冰箱中冷藏15d的幼胚愈伤组织诱导率最高(41.1%)。在此基础上,选取冷藏15 d的赤皮青冈幼胚,探究了不同基本培养基种类(MS、1/2MS和WPM)和不同激素(6-BA和2,4-D)浓度组合对赤皮青冈幼胚诱导的影响。结果表明:3种培养基对愈伤组织诱导的影响没有显著差异,但是每一种培养基中诱导率最高的激素组合各不相同。     

大麦幼胚离体培养研究初报

本试验以10个大麦基因型3种大小不同的幼胚为材料,研究了它们在含有3、4、5毫克2,4-D的培养基上的培养反应.结果发现:1.不同基因型的出愈率,愈伤组织平均鲜重以及直接出苗和直接出芽的频率都有一定的差异.2.所有基因型的出愈率都是随着幼胚的增大而提高,除个别基因型例外,大多数基因型的愈伤组织平均鲜重、直接出苗和直接出芽的频率也随幼胚的增大而提高.3.2,4-D浓度对出愈和直接出芽的影响较少,但2,4-D浓度增加有抑制愈伤组织增重,促进直接出苗的作用,4.盾片与培养基接触能促进出愈和抑制直接出苗,本试验共获得三大类愈伤组织,综上所述,大胚、低2,4-D浓度、盾片与培养基接触是大麦幼胚培养中获得愈伤组织高产的关键.     

Dicamba and Sugar Effects on Callus Induction and Plant Regeneration from Mature Embryo Culture of Wheat

To establish a highly efficient plant regeneration system for wheat genetic transformation, the effects of three different concentrations of dicamba and two different sugar types on callus induction and plant regeneration from mature embryo cultures were evaluated. Callus induction and plant regeneration were obtained from mature embryos of two commercial cultivars Zhoumai 18 and Yumai 34 （Triticum aestivum L.） cultured on L3 basal medium. The results showed that the efficiency of mature embryo culture was significantly influenced by the genotypes, sugar types and dicamba concentrations. 4 mg L^-1 dicamba proved the best effective for inducing embryogenic callus and also gave the highest proportion of plants regenerated across the two cultivars. Substitution of maltose by sucrose significantly improved the plant regeneration efficiency in both cultivars. There was a significant interaction between genotype-by-sugar types, and sugar types-bydicamba concentrations. Overall, Zhoumai 18 gave the highest frequency of plant regeneration （82.65%） when dicamba concentration was 4.0 mg L^-1 and with sucrose in initial callus induction. These results will facilitate genetic transformation work with elite wheat.     

玉米幼胚组织培养褐化发生因素的研究

以5个不同基因型玉米为材料,对影响玉米幼胚组织培养褐化发生的因素进行了初步研究。结果表明,基因型不同的材料发生褐化的程度不同。参试材料以沈农糯玉米和白糯1号褐化率较低;培养基添加20 g/L甘露醇后褐化率由高于30%降到10%以下;培养温度为24~25℃时,幼胚褐化率最低。