猪血免疫球蛋白G提取及分子量测定

[目的]纯化猪血免疫球蛋白IgG,并测定其轻链与重链的分子量。[方法]采用分步硫酸铵盐析法粗提猪血浆中的免疫球蛋白G,透析袋脱盐后用DEAE-SephadexAS0对IgG进行纯化,对纯化后的免疫球蛋白进行SDS-PAGE电泳,采用AlphaEaseFC凝胶分析软件对凝胶图像进行分析。[结果]3份样品中免疫球蛋白的浓度分别为2．712、2．679、2．489mg／ml;电泳后每泳道均出现2条蛋白带,说明所提免疫球蛋白的纯度较高;2条蛋白带分别为IgG的重链（H链）与轻链（L链）,与标准蛋白Marker进行比较可知,H链的分子量约为57KDa,L链的分子量约为26KDa。[结论]得到了高纯度的猪IgG,并进一步确定了IgG轻链与重链的分子量。     

盐析法提取鹅血清中G型免疫球蛋白工艺条件的优化

利用盐析法对鹅血清中的免疫球蛋白进行分离提取,得到免疫球蛋白的粗提物。根据单因素的实验结果,通过四因素五水平二次旋转正交组合实验设计,鹅血清中免疫球蛋白的最佳提取工艺条件为：提取温度34℃,静止时间58min,血清-PBS比例2∶1,缓冲溶液pH7.2,此时的IgG提取量达到0.681mg·mL^-1。通过方差分析和验证实验,数学模型可靠并且拟和较好。     

鸡IgG几种不同纯化方法的比较研究

试用三种不同的方法纯化鸡免疫球蛋白Ｇ（ＩｇＧ），其中硫酸葡聚糖钠法虽好，但因其价格昂贵，不易推广；氯仿法是一种简便、快速而又经济的好方法，它的产率高，且不影响ＩｇＧ的活性。     

大豆异黄酮四种不同提取方法的比较

本试验采用乙醇浸提、甲醇提取、酸水解提取和丙酮酸性溶液浸提4种方法,提取运城当地的中黄13和诱变30两个大豆品种的异黄酮,并对提取率进行了分析。结果表明,使用甲醇提取时提取率最高,乙醇浸提、酸水解提取和丙酮酸性溶液浸提3种方法的提取率差异不大。     

精液中猪细小病毒DNA三种提取方法效果比较

猪精液中含有高浓度的蛋白质,因此提取高纯度DNA较为困难;试验分别用水煮法、异硫氰酸胍法和Trizol法三种方法对连续稀释梯度猪精液提取猪细小病毒DNA,应用Taqman荧光定量PCR技术评价提取效果并加以对比。结果发现Trizol法可以提取出高纯度的DNA,但因Trizol试剂价格昂贵,不适用临床检测;比较另外两种方法,水煮法较异硫氰酸胍抽提法更为有效,是一种迅速、简便、经济、高效的DNA提取方法,适合于临床大量样品的检测。     

喜树总黄酮提取方法比较

建立了喜树(Camptotheca acuminatd Decne)根、茎、叶、果实中总黄酮含量的测定方法,并进行总黄酮含量测定.采用超声波乙醇浸提法、水提取法、70％乙醇提取法3种方法提取总黄酮,以芸香苷标准品为对照,以可见分光光度计于510 nm分别测定吸光度,根据标准曲线计算得总黄酮含量.超声波乙醇浸提法提取的喜树茎、根、叶、果实总黄酮含量分别为4.335 8％、1.576 3％、5.964 3％、6.222 9％,水提取法提取的总黄酮含量分别为1.995 9％、0.378 0％、2.878 0％、3.559 5％,传统乙醇提取法提取的总黄酮含量分别为3.996 2％、1.385 8％、5.767 6％、6.011 8％.3种方法中超声波乙醇提取法提取的效率较高;喜树根、茎、叶、果实中总黄酮含量最高的是果实,最低的是茎.     

几种提纯鸭病毒性肝炎血清免疫球蛋白G方法的比较

用辛酸-硫酸铵法、硫酸铵法、硫酸钠法和聚乙二醇沉淀法分别提纯鸭抗DHV血清中免疫球蛋白G(IgG),经SDS-PAGE电泳、蛋白含量及生物活性测定分析表明,先用辛酸澄清,再用50%饱和硫酸铵粗提,最后用35%饱和硫酸铵重复两次提取的IgG纯度和生物活性均较其它方法高。此法操作简便,便于推广应用。     

大豆异花黄酮四种不同提取方法的比较

本试验采用乙醇浸提、甲醇提取、酸水解提取和丙酮酸性溶液浸提4种方法,提取运城当地的中黄13和诱变30两个大豆品种的异黄酮,并对提取率进行了分析.结果表明,使用甲醇提取时提取率最高,乙醇浸提、酸水解提取和丙酮酸性溶液浸提3种方法的提取率差异不大.     

几种橡胶基因组DNA提取方法的比较

[目的]比较4种提取橡胶叶基因组DNA方法,为后续研究根据需要采用不同的DNA提取方法提供依据。[方法]分别采用TIANGEN新型植物基因组DNA提取试剂盒提取法、E.Z.N.A.TMHigh Performance（HP）Plant DNA Kit提取法、CTAB法、改良的CTAB法提取橡胶基因组DNA,通过紫外分光光度计测定不同方法所提取DNA的纯度和浓度,并通过电泳和酶切检测。[结果]采用改良的CTAB法提取的橡胶基因组DNA纯度最高,质量最好;采用其他方法所得的基因组DNA均有不同程度的多糖多酚以及蛋白的污染。[结论]采用改良的CTAB法所提取的橡胶基因组DNA因其完整性好、浓度高、纯度高可用于对DNA质量要求高的试验中。若是后续研究对DNA质量要求不高,则可以选择试剂盒,省时省力。     

三种提取XJT-9503菌染色体方法的比较

提取染色体是分子生物学研究中的基础实验之一 ,染色体提取的成功与否对构建基因组DNA文库、鸟枪法克隆未知基因及其他后续工作都有重要意义。在实验中分别采用传统方法、CTAB法、试剂盒法等三种方法提取XJT - 95 0 3芽孢杆菌染色体 ,发现三种方法各有优缺点 ,可根据实验室条件及实验目的采用不同方法 ,同时总结了一些工作经验 ,供分子生物学领域的学者参考     

三种魔芋精粉提纯方法的比较

在魔芋葡甘聚糖提纯过程中使用磷酸,从产品得率、溶胶性能、工艺难易等方面与其他提纯方式进行比较.结果表明,磷酸工艺能显著提高产品得率,而对产品的水溶胶粘性等性状影响不大,工艺也较简单.     

三种寡核苷酸纯化方法的比较

分别采用固相萃取法、电泳法、色谱法纯化寡核苷酸,色谱分析结果表明产物纯度高,固相萃取法纯化后的产物纯度低于电泳法与色谱法,但产量相对较大,PCR检测结果证明3种方法纯化的寡核苷酸具有良好的检测性能.在建立的固相萃取纯化试验条件下,对3种填料纯化寡核苷酸的效果、产量、成本进行了比较分析,结果表明,使用硅胶C绣和聚苯乙烯-二乙烯基苯填料(PS/DVB)填充的萃取小柱既能达到良好的纯化效果又可降低成本.     

犬血清IgG的纯化、抗体制备及其鉴定

[目的]探讨犬血清IgG的纯化方法。[方法]采用硫酸铵盐析法结合SephadexG-200凝胶柱层析提取纯化犬血清IgG,利用SDS-PAGE电泳和免疫印迹法鉴定所得产品的纯度和免疫活性。[结果]获得的纯化犬血清IgG的SDS-PAGE图谱中存在2条蛋白条带,表明获得了高纯度的犬血清IgG;重链分子量为58kD,轻链分子量为27kD,IgG分子量为170kD。特异性检测发现犬血清IgG重链和轻链都能与鼠抗犬血清IgG抗体结合,表明纯化犬血清IgG具有免疫原性和反应原性。[结论]硫酸铵盐析法结合SephadexG-200凝胶柱层析可获得纯度高、活性好的纯化犬血清IgG,为犬血清IgG相关的免疫学试验提供了高质量的免疫材料。     

鸡血清IgG纯化方法研究

[目的]为了获得高纯度鸡免疫球蛋白(Ig),并保持其生物学活性。[方法]比较几种纯化鸡血清免疫球蛋白(IgG)的方法。用饱和硫酸铵(NH4)2SO4沉淀法或乙醇沉淀法提取鸡血清IgG,经透析除盐,将初提物过sephadexG-200柱进一步分离IgG,经免疫电泳和SDS-PAGE电泳进行纯度鉴定。[结果]结果表明:在该试验条件下,(NH4)2SO4盐析和乙醇沉淀法获得的鸡IgG经sephadexG200柱分离获得高纯度的鸡IgG。[结论]该研究为找到较好的纯化鸡血清IgG方法提供了试验依据。     

猪毛干部位基因组DNA的三种提取方法比较

通过比较三种猪毛干基因组DNA提取方法,改进了提取猪毛干基因组DNA的技术方法。将DNA提取物进行琼脂糖凝胶电泳、紫外可见分光光度计及PCR扩增分析,结果表明,在毛干中能成功提取到基因组DNA,其浓度和纯度足以满足分子生物学技术试验的要求,该技术还可以减少对动物的伤害,在样品不易获得的濒危动物研究中尤为适用。     

不同个体牛的血清IgG水平的差异分析

研究了仔牛哺乳期血清IgG水平的变化及血清IgG含量与牛龄、性别的关系。结果表明:仔牛吃完母乳24h后血清中的IgG达到峰值(65.58±9.87)mg.mL-1,提取免疫球蛋白的原料血液应选择的牛龄在8年以下为宜;当以6￣8年的牛血液作为原料时,母牛血液IgG含量比公牛血液IgG含量高1%。     

哺乳仔猪血清中IgG的动态变化

选择３２头自然分娩、初生重１ｋｇ～１．５ｋｇ的大白猪×内蒙黑猪杂交Ｆ１代新生仔猪，研究２８ｄ产后期内血清中ＩｇＧ的动态变化。结果表明，仔猪出生后没吃母乳以前血清中的ＩｇＧ甚微（０．１２±０．０５８ｍｇ／ｍｌ），吃完初乳后血清中ＩｇＧ含量迅速升高，到２４ｈ达到峰值（６０．１０±１１．１８ｍｇ／ｍｌ），随后缓慢下降，到２１ｄ（２０．５３±６．４６ｍｇ／ｍｌ），随后又开始上升。     

寒冷地区封闭式猪舍与传统猪舍投资效益比较与分析

通过对现代化封闭式猪舍与传统的开敞式猪舍在基建投资、生产工艺与指标、经济效益诸方面的对比与分析,得出了在我国寒冷地区兴建现代化封闭式猪舍,是养猪业实现高产、优质、高效的基本条件。     

北京长白杂交猪IgG H链基因CH2-CH3的克隆、序列分析及表达质粒构建

根据GenBank中注册的猪IgG H链基因cDNA CH2 CH3序列(SSU03780),设计了含KpnⅠ和HindⅢ酶切位点的一对引物,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法从北京长白杂交猪肠系膜淋巴结细胞扩增猪IgG H链基因CH2 CH3序列.将PCR产物纯化回收后,插入到含LacZ基因的克隆载体pGEM-T Easy中,转化大肠杆菌JM 109感受态细胞,经KpnⅠ和HindⅢ双酶切及PCR鉴定,筛选出阳性克隆.将所克隆的目的片断亚克隆到原核表达载体pQE 30,构建重组质粒pQE 30/PIgG CH2 CH3.将重组表达质粒转化大肠杆菌JM 109感受态细胞,筛选阳性克隆,经IPTG诱导表达后,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析.结果表明,本研究克隆了猪IgG H链基因CH2 CH3序列,全长663 bp,编码221个氨基酸,利用Gentyx version 6.0软件将CH2 CH3基因的核苷酸序列与GenBank中的参考序列比较,其核苷酸序列同源率为99.551%,推导的氨基酸序列同源率为100%.将pQE 30/PIgG CH2 CH3转化JM 109感受态细胞,表达的融合蛋白相对分子质量约为26.95 ku,经IPTG诱导2 h,表达量约占菌体总蛋白41.5%.     

血清钙不同测定方法的比较

[目的]建立一种成本低、准确性高、操作简便、适合临床兽医的疾病诊断和实验室检测的血清钙测定方法。[方法]根据精密度分析、回收试验、稳定性分析、线性范围确定、干扰试验等,比较了乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）滴定法、偶氮氯膦I法、偶氮胂Ⅲ法和偶氮氯膦-mA法检测血清钙离子浓度的准确性和可操作性。[结果]偶氮氯膦I测定法空白值低,随机误差小,精密度最高。偶氮氯膦-mA法的相关系数最大,但4种方法在浓度0．1～6．0mmol／L都具有良好的线性关系,无明显差异。回收试验中EDTA-2Na滴定法回收率为97．1％;偶氮氯膦I法回收率为98．5％;偶氮氯膦-mA法回收率97．6％;偶氮肿Ⅲ法回收率为100．7％。[结论]偶氮氯膦I法具有精密度高、回收率高、稳定性高、空白值低和变异系数低等特点。是一种值得推广的血清钙测定方法。