甘草酸微生物转化菌的筛选鉴定及发酵条件优化

首先,采用单因素方法对碳源、氮源、发酵接种量、初始p H、发酵时间、发酵温度等因素进行考查,在此基础上进行4因素3水平的正交试验优化。得到的优化发酵条件是甘草浸出液10%,发酵温度40℃,p H 5.0,接种量10%,装液量75 m L/250 m L,发酵时间为6.5 d,180 r/min。在最优条件下,甘草次酸的量达到7.67 mg/m L。     

黄芩苷制备工艺的优化

采用单因素试验,对醇提酸沉法制备黄芩苷工艺的影响因素进行了考察.当温度为80℃,并保温时间为60 min,酸沉pH值为2时,黄芩苷产率及黄芩苷纯度均较高,分别为18.39%和39.98%.同时,比较了一次酸沉、二次酸沉以及三次酸沉粗粉中黄芩苷的纯度.结果表明,一次酸沉粗粉的黄芩苷纯度与二次、三次酸沉产品没有明显区别,此时通过重结晶可以得到纯度高达86.14%的黄芩苷产品.     

黄芩中黄芩苷常规回流浸提工艺优化研究

采用常规回流浸提法,以50%乙醇水溶液提取黄芩,研究了浸提时间、浸提温度、液固比和颗粒粒度对黄芩苷的得率和含量的影响。采用四因素二次回归正交旋转组合设计对工艺参数进行了优化,建立了黄芩苷得率与浸提时间、浸提温度、颗粒粒度及液固比之间关系的回归方程。优化工艺为:浸提时间为2.0 h、浸提温度为62.3℃、颗粒粒度为80目、液固比为27.3 mL.g-1时,黄芩苷得率的理论最大值为8.88%。     

黄芩苷-Nisin复合保鲜液制备及在香蕉保鲜中的应用

以黄芩中黄芩苷为主要保鲜成分制备复合保鲜液并用于香蕉防腐保鲜。在黄芩苷、柠檬酸、乳酸链球菌素和氯化钙等单因素实验的基础上,通过响应面实验得出复合保鲜液优化配方:0.2%黄芩苷+0.03%Nisin+2.11%柠檬酸+1.5%氯化钙。该保鲜液用于香蕉贮藏保鲜试验表明:与对照组相比,在25℃、相对湿度65%的条件下,贮藏期为12 d,复合保鲜液喷洒在香蕉上,能显著降低失重率、褐变程度,增强硬度,保持外观品质,使用复合保鲜液可延长香蕉贮藏时间达7 d。研究结果将为黄芩中以黄芩苷为代表的有效抑菌成分在果蔬类食品贮藏保鲜中的应用提供技术参考。     

虎杖苷转化菌的筛选及所产酶的性质研究

利用专一性底物法,以虎杖水提液为初始培养基,经过初筛复筛获得转化菌。根据菌落形态特征对菌株进行初步鉴定,对转化菌产酶的酶学性质进行研究。结果表明,通过筛选得到1株特异性转化虎杖苷为白藜芦醇的菌株,经形态学鉴定为青霉菌。该菌产的酶最适p H值为5. 0,最适温度为60℃; Fe2+、Na+和Ca2+对酶活力有激活作用;虎杖苷是该酶理想的水解作用底物。利用该菌产的酶液转化虎杖原料,虎杖苷的转化率最高可达到100%。     

柴油降解酵母复合菌的筛选、鉴定及培养条件优化

以柴油为惟一碳源,用富集、驯化培养基从舟山港口柴油污染海水和海泥中筛选得到4株高效柴油降解酵母菌(Yeast)C_1、C_2、D_1、D_3,其柴油降解率为(70.49±2.50)%~(78.76±1.24)%。对4株菌进行3菌和4菌的相同比例的随机组合构建混合菌群,从中筛选得到最佳柴油降解复合酵母菌S1-5(C_2+D_1+D_3),降解率达到(85.30±1.29)%。再通过形态学观察、生理生化特征分析及16S rDNA、26S rDNA测序等方法对构成最佳降解复合菌的3株单菌进行鉴定。通过分子鉴定,得到酵母菌C_2、D_1、D_3都是耶罗维亚酵母属(Yarrowia),其中C_2和D_3是解脂耶罗维亚酵母(Yarrowia lipolytica)。在模拟污染水域实际物化条件的基础上优化培养条件,优化试验获得酵母复合菌S1-5的最佳培养条件为盐度30‰,NH_4NO_31.5 g/L,MgSO_4·7H_2O 0.3 g/L,KCl 1 g/L,FeCl_3·6H_2O 50 mg/L,在该条件下其降解率达到(82.79±1.38)%。     

一株碱性果胶酶产生菌的筛选、鉴定及发酵条件优化

采用平板分离结合刚果红染色法从野生苎麻土壤中分离得到1株果胶酶产生菌Lys-5304。经形态观察和16S r DNA测序鉴定,该菌株鉴定为欧文氏菌(Erwinia amylovora)。通过单因素试验和响应面分析,该菌产果胶酶的最优条件为:葡萄糖3.0 g/100 m L,菜子粕0.2 g/100 m L,接种量1.5 m L,培养基起始p H 8.0,摇床转速180 r/min,发酵周期为72 h,培养温度为37℃。在此条件下,该菌的果胶酶活力达到1 021.33 U/m L,具有一定应用潜力。     

黄芩悬浮细胞培养过程中黄芩苷含量与POD活性的相关性分析

以黄芩悬浮细胞为材料,研究其生长过程中过氧化物酶(POD)活性变化规律及其与黄芩苷次生合成之间的关系。结果表明,在黄芩悬浮细胞生长周期(21 d)内,POD活性与黄芩苷的积累呈正相关。在黄芩悬浮细胞生长周期的前6 d,悬浮细胞处于适应期,POD低水平表达,黄芩苷合成缓慢;6~15 d,悬浮细胞处于增长期,POD高水平表达,并到达最大值,期间黄芩苷迅速合成;15~21 d,悬浮细胞进入饱和期,此时POD活性降低,黄芩苷合成几乎停止。采用L9(34)正交表优化培养基中6-BA、碳源、氮源、p H的配比,筛选POD活性表达最优的培养条件为:6-BA 3 mg/L、碳源15 g/L蔗糖+15 g/L葡萄糖、氮源(NH4+)30 mmol/L、p H 5.6。     

黄芩毛状根的诱导及响应面法优化培养条件

[目的]应用响应面法优化黄芩毛状根的培养条件。[方法]利用发根农杆菌1.2556感染黄芩获得毛状根,在单因素试验的基础上,利用Box-Benhnkcn设计和响应面分析法对影响黄芩毛状根生长的培养条件(培养时间、温度、摇床转速和接种量)进行分析,优选最佳培养条件。[结果]毛状根在无外源激素的MS培养基上自主生长,表现出典型的发根特征。毛状根的最优培养条件为:培养时间24.95 d、温度27.4℃、摇床转速123.69 r/min、接种量0.500 g;在此条件下,黄芩毛状根的生长量为(fm)9.271 28 g/瓶。[结论]该研究优化了黄芩毛状根的培养条件,为黄芩的进一步开发利用提供了依据。     

微生物转化人参皂苷Rc和Rd的研究

人参皂苷尤其是稀有人参皂苷具有重要的药理活性,但在人参中含量极其稀少.通过运用薄层层析和高效液相色谱分析技术,对4种真菌转化人参皂苷Rc和Rd生成稀有皂苷的代谢作用进行分析,结果显示4种真菌均具有较强转化人参皂苷Rc和Rd的能力.其中,转化人参皂苷Rc的主要代谢途径推测为Rc→Mc1→Mc→CK→PPD;而在转化人参皂苷Rd的过程中可能存在2条代谢途径,其中主要途径推测为Rd→F2→CK→PPD,而另一条途径则由人参皂苷Rd直接转化为Rg3.试验结果为进一步通过优化试验条件积累代谢产物Rg3或CK,以及分离纯化相应的人参皂苷糖苷酶提供了良好基础.     

沼气发酵复合菌系的筛选及培养条件优化

利用限制性培养技术,构建了1组35℃下遗传稳定的、产甲烷量高的沼气发酵复合菌系。采用单因素及正交试验分析方法,研究了pH、接种量、底物浓度三个因素的培养条件对沼气复合菌系甲烷产率的影响。试验结果表明,在单一因素的影响下,发酵初始的pH值为7.0,接种量为10%,底物浓度为8%时产甲烷效果最好。采用正交试验进行培养条件的优化组合试验分析,确定最佳的沼气复合菌系发酵条件为:以牛粪为底物,复合菌系接种量5%,底物浓度为10%,pH自然,培养温度为35℃。     

林生毛霉对孕甾烯醇酮的生物转化研究

利用林生毛霉对孕甾烯醇酮进行生物转化,得到了三个转化产物。经波谱学方法(IR、MS和2D NMR)分别鉴定为3β,7α-二羟基孕甾-5-烯-20-酮(2)、3β,7α,11α-三羟基孕甾-5-烯-20-酮(3)和3β,7α,9α-三羟基孕甾-5-烯-20-酮(4)。通过2D NMR技术对产物13C NMR数据进行了全归属,详细地解析了化合物4的结构。     

硝基苯好氧降解细菌的筛选和降解活性研究

以长期受硝基苯污染的土壤和某化工厂污水处理厂曝气池活性污泥、排污口底泥为混合菌源,采用硝基苯浓度梯度增加的好氧振荡瓶法进行降解菌的驯化与富集培养,分离和纯化出1株能以硝基苯为惟一碳源、氮源和能源的细菌,初步鉴定为芽孢杆菌属。该菌株降解的最适温度为30~35℃,pH值7.5~8.0,摇床速度为150 r/min。硝基苯在营养盐液体培养基中的最高降解允许浓度为1 000 mg/L。菌株在硝基苯初始浓度为100 mg/L的营养盐液体培养基中培养6 d后,硝基苯被完全降解。降解过程中无苯胺的积累。降解动力学分析表明,在硝基苯浓度低于1 000 mg/L条件下降解过程为零级反应关系。     

产脂肪酶细菌的筛选及发酵培养条件的优化

为给扩大脂肪酶的生产源提供基础资料,对富含油脂的67份土壤样品进行了产脂肪酶细菌的筛选及目标菌株发酵培养条件的优化试验。结果表明:筛选分离出15株脂肪酶产生菌,经过对其发酵液脂肪酶活力的比较,菌株D9-1发酵液脂肪酶活力最高。目标菌株D9-1产脂肪酶最佳培养条件:最适氮源为1%蛋白胨,最适碳源为1%橄榄油,表面活性剂为1%OP-10,最适发酵温度30℃,摇床转速为170 r/min,发酵培养时间为24 h。     

农杆菌介导法转化大豆最佳条件的研究

以球形期的大豆体细胞胚为转基因受体,以抗性体细胞胚筛选率为转化率指标,用农杆菌介导法进行遗传转化,对转化的最佳条件进行了初步研究.结果表明:大豆体细胞胚预培养2 d,菌液浓度OD600=0.5～0.7,S浓度为50～100 μmol/L,侵染时间10 min,共培养时间2～3 d有利于提高转化率;对不同筛选代数观察结果表明,转化率在3个月以前较低,而在3个月以后则基本稳定在8%.     

木聚糖酶微生物发酵生产的研究进展

木聚糖酶是一种重要的工业用酶制剂,广泛应用于造纸、食品、饲料、医药及生物转化等领域。木聚糖酶最主要的来源是通过微生物发酵而成。该文综述了木聚糖酶高产菌株的选育和微生物发酵生产等方面的研究进展,并展望了木聚糖酶微生物发酵生产的研究方向及前景。     

曲酸高产菌株的选育及发酵培养基的优化

以米曲霉为出发菌株,通过物理、化学及复合诱变得到一株曲酸高产菌株ENTG-206,并对该菌株的发酵条件进行了初步研究。结果表明:该菌株的最佳发酵培养基配方为玉米水解糖12%,麦根-豆饼粉0.6%,MgSO4.7H2O 0.05%,KH2PO40.2%,pH值6.0。以优化后的培养基进行30L摇瓶发酵,发酵4d产酸可达49.8mg.mL-1。     

白酒丢糟发酵生产蛋白质饲料的菌种筛选

研究了产朊假丝酵母、热带假丝酵母、白地霉、酿酒酵母、绿色木霉、黑曲霉与米曲霉发酵白酒丢糟生产蛋白质饲料的效果.结果表明:白地霉、黑曲霉、绿色木霉和热带假丝酵母效果最好,发酵后白酒丢糟的蛋白质质量分数提高了6.49%以上;对这4种菌进行组合筛选,发现由黑曲霉、绿色木霉和白地霉组合发酵,能将白酒丢糟的蛋白质质量分数提高9.96%.     

农杆菌介导的基因转化辣椒条件的优化

对农杆菌GV3101介导转化保加利亚尖椒过程中的条件进行了探讨,得出以下优化的条件：卡那霉素（Kan）浓度35 mg/L、预培养2 d、侵染时间7-8 m in、共培养3 d、乙酰丁香酮（AS）浓度100μmol/L。