桃蚜抗性品系选育及其3种解毒酶活性研究

对桃蚜进行室内高效氯氰菊酯抗药性筛选,选育至10代后抗性倍数增长到49.9倍.生化分析表明,抗性品系酸性磷酸酯酶(ACP)、碱性磷酸酯酶(ALP)及多功能氧化酶(MFO)活性均显著高于敏感品系.磷酸酯酶酶动力学测定结果表明,与敏感品系相比,抗性桃蚜酸性磷酸酯酶对底物的Km,Vmax差异都不显著;碱性磷酸酯酶Km差异不显著而Vmax则显著大于敏感品系.     

桃蚜抗性品系选育及其3种解毒酶活性研究

对桃蚜进行室内高效氯氰菊酯抗药性筛选,选育至10代后抗性倍数增长到49．9倍。生化分析表明,抗性品系酸性磷酸酯酶(ACP)、碱性磷酸酯酶(ALP)及多功能氧化酶(MFO)活性均显著高于敏感品系。磷酸酯酶酶动力学测定结果表明,与敏感品系相比,抗性桃蚜酸性磷酸酯酶对底物的km,kmax差异都不显著;碱性磷酸酯酶Km差异不显著而Vmax则显著大于敏感品系。     

木薯朱砂叶螨抗阿维菌素品系选育及其解毒酶活性变化

采用室内喷药继代汰选法和生化分析法,以广西南亚热带农业科学研究所木薯种质资源圃采集的朱砂叶螨为敏感品系(SS),用阿维菌素对朱砂叶螨进行15代抗性选育,获得抗性倍数为3. 25的抗阿维菌素品系(Ab-R)。经室内选育后,对Ab-R和SS解毒酶活性的测定表明,随着选育代数的增加,Ab-R15体内羧酸酯酶(carboxylesterases,简称Car E)、谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-s-transferase,简称GSTs)、多功能氧化酶(multi-functional oxidase,简称MFO)的比活力分别为SS的1. 27、1. 69、1. 92倍。此外,Ab-R5、Ab-R10、Ab-R15体内的MFO比活力与SS相比差异均达显著性水平;筛选至10代时,Car E比活力与SS相比无显著性差异;筛选至5代时,GSTs比活力与SS相比无显著性差异。结果说明,MFO比活力显著上升是朱砂叶螨对阿维菌素产生抗药性的重要原因,同时Car E和GSTs也参与了阿维菌素抗性品系的形成。     

番石榴实蝇对阿维菌素的抗性选育及解毒酶活力变化

为了解阿维菌素对番石榴实蝇[Bactrocera correcta(Bezzi)]解毒酶及抗性的变化,在室内测定了不同增效剂对阿维菌素的影响及解毒酶活性。结果表明:药剂连续选育15代后,种群抗性倍数达到8.17。3种增效剂对敏感、抗性种群均有一定的增效作用,其中抗性种群中增效醚(PBO)、磷酸三苯酯(TPP)的增效作用显著,增效倍数分别为2.34、1.94。3种解毒酶的测定表明阿维菌素对多功能氧化酶(MFO)、羧酸酯酶(CarE)有显著提升作用,说明MFO、CarE的增强可能是番石榴实蝇对阿维菌素产生抗性的主要原因。     

土耳其斯坦叶螨对阿维菌素和哒螨灵抗药性机理及抗性适合度研究

[目的]明确土耳其斯坦叶螨对阿维菌素和哒螨灵的抗药性机理和抗性适合度.[方法]在28℃条件下对土耳其斯坦叶螨敏感品系进行室内抗药性选育,选育出对阿维菌素和哒螨灵的抗性品系,组建生命表进行抗性适合度研究.并比较抗性品系和敏感品系的几种常见解毒酶的活性测定来进行抗性机理研究.[结果]土耳其斯坦叶螨对阿维菌素的抗性发展比较慢.在抗性适合度的研究中发现土耳其斯坦叶螨的两种抗性品系在发育历期、产卵量等指标跟敏感品系相比均存在不利性.并发现羟酸酯酶在两种抗性品系和敏感品系中比活力表现不明显,在抗阿维菌品系和敏感系中碱性磷酸酯酶存在差异性,这说明这种酶在解毒阿维菌素过程中起作用.谷胱甘肽S-转移酶、多功能氧化酶、酸性磷酸酯酶和碱性磷酸酯酶在抗哒螨灵品系和敏感品系中均表现差异.说明这些酶在解毒哒螨灵的过程中起作用.[结论]阿维菌素和哒螨灵的抗性与解毒酶活性的变化有关,并且在产生抗性后存在适合度不利性.     

灰飞虱对氟虫腈的抗性及其机制研究

通过室内抗性品系筛选、现实遗传力分析、离体酶活力测定,对灰飞虱对氟虫腈抗性及其机制进行了研究.结果 发现:灰飞虱对氟虫腈的抗性发展较慢,利用田间低抗种群(RR 6.9倍)进行室内筛选,24代后抗性仅增加到21.2倍,其抗性现实遗传力较小,仅为0.041.利用室内筛选的氟虫腈抗性和敏感性品系进行解毒酶活力的对比研究发现:抗性灰飞虱体内的酯酶和谷胱甘肽转移酶活力与敏感品系没有显著差异,但P450单加氧酶活力是敏感品系的1.58倍.增效试验表明:在敏感品系中3种增效剂对氟虫腈均没有明显增效,但在抗性品系中,PBO对氟虫腈的增效比达到13.68,TPP和DEM的增效比仅分别为1.39和1.35.表明:灰飞虱对氟虫腈的抗性主要是由多功能氧化酶活力升高所致.     

二斑叶螨抗四螨嗪品系筛选及其解毒酶活力变化

【目的】筛选二斑叶螨对四螨嗪的抗性,并明确其解毒酶的变化。【方法】采用室内生物测定和生化分析方法,研究二斑叶螨对四螨嗪的抗性发展趋势及其解毒酶活力变化。【结果】室内用四螨嗪筛选二斑叶螨21代（Clo-R21品系）,抗性倍数（RR）为122.26;Clo-R21品系对哒螨•四螨嗪和浏阳霉素具有较高的交互抗性,RR分别为21.80和10.66;对阿维菌素、甲氰菊酯、三氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、三唑锡和苦皮藤生物碱具有低水平的交互抗性,RR分别为6.85、5.45、5.02、3.88、3.48、1.68;对苯丁锡、唑螨酯、噻螨酮具有负交互抗性,RR分别为0.72、0.65、0.55;增效剂磷酸三苯酯（TPP）、顺丁烯二酸二乙酯（DEM）、胡椒基丁醚（PBO）、增效磷（SV1）对抗Clo-R21品系的增效比值分别为1.39、1.70、6.78、1.64;Clo-R21品系体内羧酸酯酶（CarE）、酸性磷酸酯酶（ACP）、碱性磷酸酯酶（ALP）、谷胱甘肽-S-转移酶（GSTs）和多功能氧化酶（MFO）分别是敏感品系的2.25、2.04、1.91、1.98和26.68倍。【结论】二斑叶螨对四螨嗪的抗性主要受MFO介导,而CarE、ACP、ALP和GSTs也参与四螨嗪抗性的形成。     

二斑叶螨多重抗性品系的选育及其解毒酶活力分析

【目的】明确二斑叶螨对杀虫杀螨剂的多重抗性机制,为延缓二斑叶螨抗性发展及其抗性治理提供依据。【方法】以螺螨酯、甲氰菊酯和阿维菌素为靶标,通过室内抗性汰选获得二斑叶螨多重抗性品系(Mp-R),采用生化分析方法研究了Mp-R和敏感品系(SS)羧酸酯酶(CarEs)、谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)和多功能氧化酶(MFOs)的活性差异,并估计了其抗性遗传力及相对适合度。【结果】经过连续50代室内抗性选育,二斑叶螨对阿维菌素、甲氰菊酯和螺螨酯的抗性倍数分别为603.03,167.65和51.77倍,其抗性发展趋势分别呈"慢-快-慢","慢-快"及缓慢上升趋势;与敏感品系相比,3大解毒酶活力在二斑叶螨各发育阶段均未见大幅度上升,仅Mp-R品系卵中MFOs比活力上升幅度最大,为SS品系的1.8倍;二斑叶螨对螺螨酯、甲氰菊酯和阿维菌素的抗性遗传力分别为0.020 3,0.038 7和0.064 2;Mp-R品系相对适合度为0.381 8(Rf1),存在一定程度的生殖不利性。【结论】阿维菌素的抗性遗传力最大,具有较高的抗性风险;甲氰菊酯次之;螺螨酯的抗性遗传力最小,抗性风险较低;阿维菌素、甲氰菊脂和螺螨酯混用有利于二斑叶螨抗性治理。     

氰戊菊酯、辛硫磷及其混剂对棉铃虫解毒代谢酶的影响

采用点滴法，筛选出对抗性棉铃虫具有明显增效作用的氰戊菊酯、辛硫磷杀虫剂混剂。用氰戊菊酯、辛硫磷及其混剂的亚致死剂量分别对棉铃虫幼虫进行处理，以丙酮处理为对照，24h后测定其代谢酶活性。结果表明：①多功能氧化酶催化的环氧化酶活性和O-脱甲基酶活性在棉铃虫敏感(S)品系中易被诱导，尤以前者最明显，而在抗性(R)品系中在一定程度上被抑制。②药剂对非特异性酯酶产生不同程度的抑制现象，尤以辛硫磷抑制最明显，对羧酸酯酶的抑制作用强于对非特异性酯酶的抑制作用，对R品系的抑制作用强于对S品系的抑制作用。③药剂对谷胱甘肽S-转移酶活性的影响与对谷胱甘肽含量的影响趋势相一致，在S品系中均产生抑制作用，以混剂最明显，而在R品系中只有氰戊菊酯产生抑制作用，辛硫磷和混剂却表现出诱导作用。     

小菜蛾对辛硫磷的抗性选育及其乙酰胆碱酯酶和羧酸酯酶活力变化

在室内模拟田间药剂的选择压力,用辛硫磷对小菜蛾（Plutella xylostella）逐代处理,以选育其抗性种群,并测定乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase,AChE）和羧酸酯酶（carboxylesterase,CarE）的活性变化。选育至12代,对辛硫磷抗性增长到4.524倍。生化分析表明,抗性品系AChE和CarE活性均显著高于敏感品系。在抗性选育过程中,小菜蛾AChE酶活性增长迅速,其比活力由F0的0.035μmol/L·mg·min上升为F12的0.209μmol/L·mg·min;小菜蛾不同选育世代CarE酶活性差异显著,F12比活力增长到F0的12.944倍。     

不同柑桔种质资源对桔全爪螨酶活性及其对药剂敏感性的影响

采用生物测定和微量滴度酶标板法,研究了7种柑桔种质资源上桔全爪螨种群对炔螨特的敏感性及其体内羧酸酯酶(CarE)活性的变化。结果表明取食不同柑桔种质资源的桔全爪螨对炔螨特的敏感性不同,按其LC50从小到大依次排列为大浦、太田柑、天草、纽荷尔、枳壳、德尔塔和北碚447。其中在北碚447上种群的LC50是大浦上种群的6.96倍。生化分析表明,取食不同柑桔种质资源的桔全爪螨体内的羧酸酯酶活性不同,从低到高依次为大浦、太田柑、天草、纽荷尔、枳壳、德尔塔和北碚447。比较7个种群羧酸酯酶活性个体频率分布发现,北碚447和德尔塔种群中有更多的桔全爪螨个体向酶活性高的区域分布,且对药剂的敏感性与酯酶活性间存在显著的相关关系。     

二化螟对杀虫单等4种杀虫剂的抗药性

以安徽太湖县敏感地区二化螟（Chilo suppressalis Wallker)自然种群为敏感种群，根据用药水平差异，有代表性地选用浙江，江苏和安徽3地区田间种群，监测了二化螟对杀虫单等4种杀虫剂的抗性水平，结果表明：（1）浙江慈溪二化螟3幼译杀虫单已产生高水平抗性（RR＝54．6），对杀螟松产生了中等水平抗性（RR＝13．9），对敌敌 氰戊菊酯仍较敏感；（2）安徽安庆二化螟3龄幼虫对杀虫单处于中抗水平（RR＝10．8），对杀螟松，敌短短 畏和氰戊菊酯仍较敏感。（3）江苏兴化二化螟3龄幼虫与安庆相似，对杀虫单中抗（RR＝12．6），对其它被试药剂仍较敏感；（4）不同地区用3龄和6龄幼虫测定的抗药性水平相近，同时用太湖敏感种群和慈溪高抗种群进行的增效试验表明，TPP 对杀虫单无增效作用，但PBO在抗性种群中对杀虫单有 一定的增效作用，说明该种群对杀蝗抗性与多功能氧化酶有一定的关系。     

小菜蛾对杀螟丹抗药性的生化遗传研究

采用室内选育的小菜蛾对杀螟丹的抗性品系和敏感品系,研究了各杂交世代小菜蛾多功能氧化酶（ＭＦＯ）,乙酰胆碱酯酶（ＡｃｈＥ）和羧酸酯酶活性。结果表明：（１）抗性品系（抗性提高３５．５倍）多功能氧化酶环氧化活性比敏感品系高（１．８３倍）,并随着杂交后代中对杀螟丹抗性水平的下降而降低;（２）抗药性品系和敏感品系的ＡｃｈＥ和ＣａｒＥ活性没有明显差异。     

德国小蠊的抗药性及多功能氧化酶在抗性中的作用

通过敏感性测定、增效作用试验和酶活力测定,分析了德国小蠊对拟除虫菊酯类药剂的抗药性 以及多功能氧化酶在抗药性中的作用,结果表明采自杭州的德国小蠊品系对二氯苯醚菊酯、溴氰菊酯和 氯氰菊酯的抗性系数分别是敏感品系的６７．１倍, １８．１倍和１１．８倍,利用多功能氧化酶的抑制剂── 氧化胡椒基丁醚作为增效剂测定抗性品系对二氯苯醚菊酯的增效作用,增效３．６９倍,离体酶活力测定 的结果表明,抗性品系中多功能氧化酶活力明显高于敏感品系,由此认为,德国小蠊的杭州品系已对拟 除虫菊酯药剂产生了抗药性,多功能氧化酶活力增强是导致德国小蠊抗药性产生和发展的重要原因。     

对久效磷抗性棉铃虫品系的选育及其乙酰胆碱酯酶的研究

用久效磷对采集于山东聊城抗性地区的棉铃虫Helicoverpa armigera (Huebner)进行抗性品系选育，经过10代的室内选育，抗性倍数达211．88倍，为选育前的6．67倍，发现筛选后对氰戊菊酯，氯氰菊酯和灭多威的抗生分别下降了8．13，7．44和13．36倍，对甲基对硫磷和辛硫酸的抗性基本保持不变，这说明久效磷与其他5种被试药剂之间没有明显的交互抗性，还对抗，感棉铃虫体内AChE进行了研究，对久效磷抑制粗酶液的实验表明，抗性品系锦铃虫体内AChE的交互抗笥，还原抗，感棉铃虫体内AChE进行研究，对久效磷抑制粗酶液的实验表明，抗性品系棉铃虫体内AChE的I50是敏感品系的3．18倍，酶液纯化使抗，感品系AChE的I50分别下降6．69和3．49倍，说明粗提液中存在AChE保护因子，且这种保护因子在抗性品系中更有效，但纯化后，抗，感品系的AChE敏感性之间仍存在1．66倍的差异，此外，两品系AChE的动力学参数也存在显差异，由此认为AChE敏感性降低与其它因子共同组成了棉铃虫对久效磷的抗性机制。     

Biochemical Mechanism of Chlorantraniliprole Resistance in the Diamondback Moth,Plutella xylostella Linnaeus

The insecticide chlorantraniliprole exhibits good efficacy and plays an important role in controlling the diamondback moth, Plutella xylostella Linnaeus. However, resistance to chlorantraniliprole has been observed recently in some field populations. At present study, diamondback moths with resistance to chlorantraniliprole (resistant ratio (RR) was 82.18) for biochemical assays were selected. The assays were performed to determine potential resistance mechanisms. The results showed that the selected resistant moths (GDLZ-R) and susceptible moth could be synergized by known metabolic inhibitors such as piperonyl butoxide (PBO), triphenyl phosphate (TPP) and diethyl-maleate (DEM) at different levels (1.68–5.50-fold and 2.20–2.89-fold, respectively), and DEM showed the maximum synergism in both strains. In enzymes assays, a high level of glutathione-S-transferase (GST) was observed in the resistant moth, in contrast, moths that are susceptible to the insecticide had only 1/3 the GST activity of the resistant moths. The analysis of short-term exposure of chlorantraniliprole on biochemical response in the resistant strain also showed that GST activity was significantly elevated after exposure to a sub-lethal concentration of chlorantraniliprole (about 1/3 LC₅₀, 12 mg L⁻¹) 12 and 24 h, respectively. The results show that there is a strong correlation between the enzyme activity and resistance, and GST is likely the main detoxification mechanism responsible for resistance to chlorantraniliprole in P. xylostella L., cytochrome P450 monooxygenase (P450) and carboxy-lesterase (CarE) are involved in to some extent.     

抗马拉硫磷褐飞虱品系的交互抗性及其生化分析

用马拉硫磷筛选的褐飞虱抗性品系(R)对马拉硫磷的抗性达到184．4倍，对作用于乙酰胆碱酯酶的二嗪磷、异丙威和仲丁威有一定的交互抗性，而对氰戊菊酯不表现显的交互抗性。进一步研究显示：在抗性品系中，磷酸三苯酯对马拉硫磷和仲丁威的增效作用分别达到9．15和2．38倍，顺丁烯二酸二乙酯对这两个药剂也有一定的增效作用(2．32和1．42倍)。抗性品系的酯酶、谷胱甘肽-S-转移酶(以2，4二硝基氯苯为底物)和多功能氧化酶活力分别为敏感品系(S)的14．67、1．52和1．11倍。在抗性品系中，磷酸三苯酯对酯酶活力抑制作用很强，顺丁烯二酸二乙酯对谷胱甘肽-S-转移酶活力也存在一定的抑制作用。实验结果显示，酯酶和谷胱甘肽-S-转移酶在抗性品系对马拉硫磷抗性和对其他药剂的交互抗性中起到不同程度的重要作用。