农杆菌介导的菜薹遗传转化

以菜薹的子叶、下胚轴、子叶柄为外植体进行遗传转化,先在农杆菌中侵染不同的时间,然后转入2种筛选培养基(加AgNO3、不加AgNO3)中,研究了农杆菌介导的菜薹遗传转化最适外植体、最适侵染时间以及AgNO3对外植体的芽诱导的影响。结果表明:子叶柄是最适外植体;15 min侵染时间整体上优于10 min侵染时间;AgNO3可以促进农杆菌侵染后外植体的愈伤组织的诱导。     

农杆菌培养方式和预培养基激素配比对甘蓝型油菜下胚轴转化效应分析

利用根癌农杆菌共培养法转化甘蓝型油菜“华双4号”下胚轴,通过组织化学染色法检测报告基因gus的表达情况,研究了农杆菌培养方式和预培养基激素配比对转化效果的影响.结果表明,用LB培养基活化后的农杆菌再用添加AS的MS培养液继续培养6～30h对转化有明显的促进作用;不同的农杆菌培养方式对转化的影响有明显的差异,在试验的6种农杆菌培养方式中s2-5的转化效果最好,即收集活化后的农杆菌用MS＋AS＋抗生素重悬培养24h,再用MS＋AS培养6h;2,4-D与6BA之间的相互作用对转化有重要影响,在试验的预培养基激素组合中,2,4-D2.00mg/L6BA0.25mg/L的组合转化效率最高;抗性愈伤率与转化效率之间不一定具有相关关系.     

农杆菌介导的番茄遗传转化体系优化

以番茄自交系AC++和番茄母本材料1448的子叶为外植体,采用农杆菌介导的方式接种于含有不同浓度玉米素(ZT)、吲哚-3-乙酸(IAA)和硝酸银(AgNO_3)的MS培养基上,以筛选适合番茄自交系AC++和1448的最佳遗传转化体系。结果显示,诱导愈伤组织及不定芽分化的最适培养基为MS+2.0 mg/L ZT+0.5 mg/L IAA+3 mg/L AgNO_3;诱导生根的最适培养基为1/2 MS+0.3 mg/L IAA。     

农杆菌介导的小麦转化体系的优化

为建立农杆菌介导的高效小麦遗传转化体系,分析比较了不同小麦栽培品种、不同培养处理条件下的愈伤诱导、分化及转化效率。结果表明:2个长江中下游主推小麦品种扬麦158和华麦13的幼胚愈伤诱导没有差异,但扬麦158形成的胚性愈伤多、分化率及转化率高于华麦13,是优良的农杆菌介导的遗传转化受体基因型。预培养20d的愈伤转化率最高,高渗处理可进一步提高转化率。获得的T0、T1代转基因植株,经PCR分析鉴定,表明外源基因已经整合到小麦基因组中。     

农杆菌介导的冷诱导基因水稻遗传转化体系的建立

利用农杆菌介导技术,以Bar基因为筛选标记,用高山离子芥的冷诱导基因Cbcor15a侵染水稻品种日本晴的愈伤组织,经分化诱导后获得了再生植株。经Cef和PPT筛选,共获得转化Cbcor15a基因的日本晴再生苗9株;经PCR检测和Basta涂抹实验,结果证明有6株再生苗呈阳性。本遗传转化体系的建立可为利用转Cbcor15a基因选育具有耐冷性的水稻新品种提供参考。     

农杆菌介导的冷诱导基因水稻遗传转化体系的建立

利用农杆菌介导技术,以Bar基因为筛选标记,用高山离子芥的冷诱导基因Cbcor15a侵染水稻品种日本晴的愈伤组织,经分化诱导后获得了再生植株。经Cef和PPT筛选,共获得转化Cbcor15a基因的日本晴再生苗9株;经PCR检测和Basta涂抹实验,结果证明有6株再生苗呈阳性。本遗传转化体系的建立可为利用转Cbcor15a基因选育具有耐冷性的水稻新品种提供参考。     

农杆菌介导水稻转化条件的优化

应用TAC（transformation-competition artificial chromosome)载体和pCAMBIA1300分别与农杆菌LBA4404组合转化水稻成熟胚愈伤组织，探索了农杆菌转化的有关因素。结果表明：共培养培养基上铺上1张滤纸有利于控制农杆菌的过度生长；粳稻品种转化率明显高于籼稻；干燥处理能有效杀死农杆菌，并有利于提高转化率，预再生可提高抗性愈伤组织的再生率而提高转化率。     

农杆菌培养方式和预培养基激素配比对甘蓝型油菜下胚轴转化效应分析

利用根癌农杆菌共培养法转化甘蓝型油菜"华双4号"下胚轴, 通过组织化学染色法检测报告基因gus的表达情况, 研究了农杆菌培养方式和预培养基激素配比对转化效果的影响. 结果表明, 用LB培养基活化后的农杆菌再用添加AS的MS培养液继续培养6～30 h对转化有明显的促进作用; 不同的农杆菌培养方式对转化的影响有明显的差异, 在试验的6种农杆菌培养方式中s2-5的转化效果最好, 即收集活化后的农杆菌用MS+AS+抗生素重悬培养24 h, 再用MS+AS培养6 h; 2,4-D与6BA之间的相互作用对转化有重要影响, 在试验的预培养基激素组合中, 2,4-D 2.00 mg/L 6BA 0.25 mg/L的组合转化效率最高; 抗性愈伤率与转化效率之间不一定具有相关关系.     

农杆菌介导的花魔芋遗传转化体系的优化

[目的]探讨魔芋愈伤组织培养基、不同转化条件(菌液浓度、侵染时间、预培养时间及共培养时间)及转化植株的筛选条件(抗生素浓度和乙酰丁香酮(AS)浓度)等因素对转化效率的影响。[方法]采用卡那霉素抗性基因为选择标记,对农杆菌介导的花魔芋遗传转化体系进行优化。[结果]在预培养2 d,用OD600为0.6的菌液侵染30 min、共培养3 d,卡那霉素100 mg/L,羧苄青霉素250 mg/L,AS浓度100μmol/L的条件下能有效提高转化效率。再生花魔芋植株经GUS染色及PCR检测,结果表明外源目的基因已经整合到花魔芋基因组中。[结论]为魔芋抗病品种的转基因培育,丰富其种质资源,寻找抗病新途径提供理论依据和试验基础。     

农杆菌介导的几个甘蓝型油菜下胚轴转化体系研究

选择四川目前推广的中双9号等8个甘蓝型双低常规油菜品种,以5~6 d无菌苗下胚轴为外植体,MS培养基为基本培养基,设置了8组激素配比组合,探讨其对植株再生的影响,初步建立了不同油菜品种下胚轴的高效再生体系。选择其中再生频率较高的4个品种:中双9号、中双7号,中双6号,川油18号下胚轴作为农杆菌转化材料,对影响转化的相关因素进行研究,建立了4个品种下胚轴的遗传转化体系,并运用该转化体系将pta与sb401融合基因导入,成功获取了一批经PCR检测的转基因植株。     

胡萝卜(Daucus carota L.)有丝分裂核型及减数分裂观察

用对二氯苯(饱和)和放线菌酮(40×10-6g*L-1)的混合药剂对胡萝卜根尖进行预处理,通过压片获得了分散良好、形态清晰的有丝分裂中期染色体.核型分析结果表明,胡萝卜染色体平均长度为2.34μm,在4号染色体上发现一对随体.臂比＞2的染色体占22.2%,最长染色体与最短染色体的比值为2.17,核型类型为2B型,核型公式为2n=2x=18=8sm(2SAT)+10m.通过观察胡萝卜花粉母细胞的减数分裂过程,发现其行为正常,是同时型胞质分裂,中期I有9个二价体(9II),为典型的二倍体物种.     

Early Identification of Stable Transformation Events by Combined Use of Antibiotic Selection and Vital Detection of Green Fluorescent Protein (GFP) in Carrot (Daucus carota L.) Callus

Genetic transformation is a useful technique to complement conventional breeding in crop improvement. Although carrot has been a model organism for in vitro embryogenesis study, genetic transformation of carrot is still lengthy and labor intensive. An efficient transformation and detection system is desirable. Direct infection of Agrobacterium to carrot calli has provided an easy way for carrot genetic transformation. To improve the efficiency of antibiotic selection in this method, we report the combined use of an improved green-fluorescent protein, referred to as smGFP, to establish a versatile selection method for carrot callus transformation system. By combining antibiotic selection with the bright fluorescence observed in the callus tissue, we were able to easily identify stable transformants in early stage of the transformation process. In addition to the GFP expression of the callus cells, the transgenic nature of callus cells was confirmed with Southern and Western analysis. We found we can link the simplicity of carrot-callus-cell transformation, early detection of stable transformants with antibiotic selection, visualization of GFP fluorescence, and molecular analysis (Southern and Western) of callus tissue (non-photosynthetic tissue) to provide a more efficient way in identifying stable transformants at early stage of carrot transformation.     

红参胡萝卜杂交一代及双亲的酯酶同工酶比较分析

以红参胡萝卜杂交一代及其双亲为材料,采用聚丙烯酰胺凝胶不连续电泳技术,在生殖生长期分别对其吸收根、叶片、花蕾,进行了酯酶同工酶(EST)分析.结果表明,红参胡萝卜及双亲酯酶同工酶随着种株生长时间的推移而发生变化.不同阶段、不同器官的EST酶带按Rf值大小排列,共出现15条酶带,其中有4条保守酶带.红参胡萝卜酶带表现为双亲互补型,有1条在不同时期不同器官均有表达的杂种酶带,酶带清晰,与双亲不同.     

胡萝卜游离小孢子培养研究初报

采用游离小孢子培养技术,获得了胡萝卜再生植株,并对培养基添加物质等相关技术进行了探讨。     

胡萝卜采种技术研究

结果表明，胡萝卜种子产量主要来自主花盘和一级侧花盘，采用留一主盘３个一级侧盘的整枝方式可以获得整齐一致的高产优质种子。用成株、半成株采种效果比小株采种效果好。     

胡萝卜ISSR反应体系优化的研究

以改良CTAB法提取胡萝卜基因组DNA作为ISSR-PCR模板,通过单因素试验建立了一套适合胡萝卜ISSR-PCR的优化的反应体系,即25μL反应液中含10×buffer2.5μL,2.0mmol.L-1Mg2＋,200μmol·L-1dNTPs,Taq酶1.5U,引物0.5μmol·L-1,DNA模板20ng。PCR扩增程序为：94℃预变性4min,94℃变性40s,48～58℃退火45s,72℃延伸2min,进行35个循环,72℃延伸8min,在16℃保存。应用该优化反应体系筛选出了24条有效引物。     

胡萝卜肉质直根的发育形态解剖学研究

胡萝卜肉质直根的形成是由下胚轴和根的上部形成的，在肉质直根增粗过程中，没有异常结构，但在初生木质部中央有由管胞和薄壁组织细胞构成的－“混生髓”。     

多年生水稻籼、粳分类及其胚性愈伤诱导培养基优化

多年生水稻因具有多种优良生物学特性而极具研究价值,而水稻基因工程遗传改良则多以粳稻作为遗传受体。本研究旨在用InDel分子标记对多年生水稻品种PHR-1进行籼、粳分类鉴定,再设计正交试验L16（45）,通过胚性愈伤诱导率及愈伤质量的评价,对其愈伤诱导培养基进行优化,为未来多年生水稻遗传改良及相关基因功能研究提供技术支持。InDel分子标记结果显示：PHR-1是典型的粳稻类型。正交试验结果表明：PHR-1胚性愈伤诱导的最适培养基为30 g/L蔗糖+N6大量元素+N6微量元素+N6有机物+铁盐+0.5 g/L酪蛋白水解物+2 g/L脯氨酸+3 mg/L 2,4-D。     

磁处理对胡萝卜催化乙酰乙酸甲酯的效应研究

[目的]筛选合适的磁处理条件,为磁处理在胡萝卜催化乙酰乙酸甲酯中的应用提供理论依据。[方法]以乙酰乙酸甲酯为底物,用胡萝卜组织做生物催化剂,研究4个磁感应强度（6、12、17和25mT）与5个处理时间（5、10、15、20和25min）的磁处理条件对胡萝卜生物转化反应的生物学效应。[结果]不同磁处理条件对胡萝卜催化乙酰乙酸甲酯的生物学效应不同。[结论]有利于胡萝卜催化底物乙酰乙酸甲酯还原为具有光学活性的手性化合物（S）-3-羟基丁酸甲酯的磁处理条件是17mT/15min;有利于提高（S）-3-羟基丁酸甲酯光学纯度的磁处理条件是12mT/25min。     

植物细胞生长周期中内外源细胞激动素的变化

应用细胞同步培养技术、高压液相色谱分析（ＨＰＬＣ）和酶偶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）分析了胡萝卜细胞在悬浮培养时生长分裂周期的变化并对内源激动素类物质（玉米素Ｚ－Ｚｅａｔｉｎ、核糖基玉米素ＺＲ－ｚｅａｔｉｎｒｉｂｏｓｉｄｅ、二氢玉米素ＤＨＺ－ｄｉｈｙｄｒｏｚｅａｔｉｎ、核糖二氢玉米素ＤＨＺＲ－ｄｉｈｙｄｒｏｚｅａｔｉｎｒｉｂｏｓｉｄｅ、异戊烯基核糖基腺嘌呤ＩＰ－ｉｓｏｐｅｎｔｅｎｙｌａｄｅｎｉｎｅ和核糖基异戊烯基腺苷ＩＰＲ－ｉｓｏｐｅｎｔｅｎｙｌａｄｅｎｉｎｅｒｉｂｏｓｉｄｅ）含量进行定量分析．从用荧光显微技术分析ＤＮＡ含量变化结果看出，附加有激动素０．１×１０－６·Ｌ－１的悬浮液中，胡萝卜细胞的分裂周期为８．５ｈ，比不加外源激素的处理短１ｈ．在无外源激素存在的情况下，细胞分裂期中内源细胞分裂素类物质除ＺＲ之外，其余的Ｚ、ＤＨＺ、ＤＨＺＲ、ＩＰ和ＩＰＲ的含量在分裂的第６．５ｈ均有一个峰值出现，ＺＲ在第４．５和８．５ｈ有峰值出现．外加细胞分裂素的处理中．Ｚ、ｉＰ和ｉＰＲ整个周期无明显含量变化，ＤＨＺ和ＤＨＺＲ在第６．５ｈ出现峰值．ＺＲ在第８．５ｈ时也出现峰值．说明附加细胞激动素可协调Ｚ．ｉＰ和ｉＰＲ的积累，加速利用?