影响外源基因在鱼染色体中整合因素的研究

通过微注射法将不同构型和不同剂量的全鱼基因（ｃＭＴｓＧＨ，鲤鱼ＭＴ启动子与大麻哈鱼ＧＨ基因）导入不同发育时期的鲫鱼受精卵，研究其孵化率；孵出鱼苗后．通过斑点杂交、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，研究其整合率；并对受精卵去壳与未去壳导入全鱼基因后比较其整合率。结果表明：１显微注射外源基因后以单细胞前、中期孵化率最高．与对照组比差异不显著（Ｐ＞０．０５）．与其它组比较差异极显著（Ｐ＜０．０１）；２．综合孵化率与整合率．外源基因导入的最佳时期是受精卵单细胞后期；３．去壳卵与非去壳卵注射外源基因后整合率差异不显著．但孵化率有显著差异（０．０１＜Ｐ＜０．０５）；４、外源基因整合率随着注射ＤＮＡ拷贝数的增加而增大．孵化率则相反：５．线性ＤＮＡ整合率高于环形ＤＮＡ整合率。     

几种鱼类的受精卵注射外源基因后孵化率的比较研究

用显微注射方法，将融合基因(鲤MT启动子基因与大麻哈鱼生长激素基因)分别导入虹鳟Oncorhynchus mykiss、鲤Cyprinus(cyprinus)carpio haematopterus和鲫Carassius aurautus gibelio的受精卵中，注射外源基因后受精卵的孵化率分别平均为6．4％、34．0％和35．70％，按孵出的鱼苗数计算成活率，分别研究了各实验中注射后3种鱼受精卵孵化率的差异及影响因素。经t值检验，鲤与鲫注射后的孵化率无显著差异，而与虹鳟受精卵的孵化率比较有显著差异，说明显微注射在这几种鱼受精卵上的转基因孵化效果明显不同。     

影响外源基因在鱼染色体中整合因素的研究

通过微注射法将不同构型和不同剂量的全鱼基因导入不同发育时期的鲫鱼受精卵，研究其孵化率，孵出鱼苗后，通过斑点杂交，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，研究其整合率，并对受精卵去壳与未去壳导入全鱼基因后比较其整合率。结果表明：１．显微注射外源基因后以单细胞前、中期孵化率最高，与对照组比差异不显著，与其它比较差异极显著；２．综合孵化度与整合率，外源基因导入的最佳时期是受精卵单细胞后期。     

猪卵泡卵母细胞体外受精研究

采用３种获能方法（常规获能法、肝索获能法、钙离子载体获能法）进行猪冷冻附睾精子的体外获能研究，其相应的受精率分别为４２．５％，３２．０％，３０．８％，卵裂率分别为１８．６％，１５．７％，１６．１％。受精率、卵裂率间均无显著差异。精子与ＳＭＴ－ＰＧＨ基因质粒混合培养后引起卵裂率下降，实验组的卵裂率（７．５％）显著地低于对照组的水平（２１．０％）．３９℃与３７℃下受精，其受精率分别为３８．８％。１８．７％；多精受精率分别为８９％，３０．７％；卵裂率分别为２６．９％，３．７％，３９℃组的受用率、卵裂率均显著高于３７℃组水平，而多精受精率则极显著地低于３７℃组。发育培养液Ａ液、Ｂ液中的卵裂率分别为２４．３％，１３．０％，两者无差异。在兔输卵管内培养猪体外受精卵，卵裂率为４６．７％，极显著地高于对照组水平（１０．９％）．受精卵体外培养１６～１７ｈ后离心，可观察到１８．４％的原核形成率，这与受精卵体外培养的卵裂率（１９．５％）相当。     

特定电磁波谱（TDP）在兔体外受精中的应用

将３１９枚兔卵母细胞分成四组（对照组为８０枚、精液照射组为９１枚、卵母细胞照射组为５０枚以及精液与卵母细胞同时照射组为９８枚），进行ＴＤＰ对体外受精的影响试验，发现精液照射组和卵母细胞照射组的体外受精率比对照组有所提高，但差异不显著（Ｐ＞０．０５）；而同时照射免精液和卵母细胞，其体外受精率比对照组提高１８．１４％（６９．３９％－５１．２５％，Ｐ＜０．０５），而且体外受精卵发育率提高１９．３７％（７０．５９％－５１．２２％）（Ｐ＜０．０５）。实验结果表明：ＴＤＰ照射可提高兔体外受精率以及体外受精卵的发育率，并表现出“剂量效应”。     

牛体外受精卵培养方法的研究

以CRLaa为基础培养基，分别采用三种方法对牛体外受精卵进行培养。方法一：预先制备卵丘细胞单层，随后将已培养48h的受精卵转入；方法二：用胶原预先处理培养皿，随后将受精刚结束的受精卵转入；方法三：将方法二中的血清培养改为无血清培养。结果表明，三种方法卵裂率无显著差异（82．7％、85．7％、84．2％，P〉0．05）；方法二（32．1％）的囊胚率明显高于方法一（21．6％），P〈0．01；但与方法三（32．8％）相当，P〉0．05。     

外源Toll样受体2转基因绵羊的构建与鉴定

Toll样受体2（Toll-likereceptor2,TLR2）是识别革兰氏阳性细菌如引起羊乳腺炎、炭疽病、破伤风等病原体的一种重要受体,而TLR2过表达转基因羊为研究TLR2在防卫细菌侵染中的作用提供了一个理想的模型。因此,研究首先通过显微注射TLR-2过表达载体3S—Loxp—TLR2的方法对绵羊进行外源基因TLR2整合,然后采用PCR和Southernblot方法对其进行鉴定、拷贝数验证和表达量分析。结果表明,注射148个受精卵,共产下15只小羊,其中8只小羊检测为阳性,转基因率为53．3％;Southern杂交结果发现转TLR2小羊的基因组中外源TLR2基因均为单拷贝;且转基因羊TLR2mRNA表达高于对照。说明成功构建了转TLR2基因羊。     

特定电磁波照射对家兔体外受精的影响

家兔精液用特定电磁波（ＴＤＰ）照射３ｍｉｎ，精子体外获能采用ｍ—ＨＩＳ（１５ｍｉｎ）＋ｍ－ＤＭ（２－４ｈ）．家兔卵母细胞经ＴＤＰ照射５ｍｉｎ并体外培养１０－１２ｈ．家兔的卵泡卵母细胞经体外受精和体外培养的结果表明，经ＴＤＰ照射的精液与未经ＴＤＰ照射的卵母细胞的体外受精，原核形成率达６４．７％，对照织为４４．４％，两者差异显著（Ｐ＜０．０５），２－细胞以上的受精卵发育率分别为５６．８％和５０％（Ｐ＞０．０５），经ＴＤＰ照射的卵母细胞与未经ＴＤＰ照射的精液的体外受精，原核形成率达６３．７％，对照组为４６．７％，两者差异显著（Ｐ＜０．０５），２－细胞以上的受精卵发育率分别为５８．９％和４７．２％（Ｐ＞０．０５）、用ＴＤＰ照射精液或卵母细胞能显著提高其体外受精率．     

用显微注射法将绿色荧光蛋白基因导入金鱼受精卵中表达

采用显微注射法将绿色荧光蛋白（GFP）基因重组表达质粒导入金鱼受精卵中，以期获得能发绿色荧光的金鱼。结果显示，在注射的3批金鱼受精卵中（第一批4310粒，第二批3952粒，第三批4056粒），分别孵出鱼苗543、282和266尾，出苗率为17.02%、12.53%和13.52%，其中表达绿色荧光的金鱼分别为23、24和18尾，表达率为4.24%、8.51%和6.77%。荧光表达检测发现，从肌肉效应期就开始检测得到绿色荧光。     

用显微注射法将绿色荧光蛋白基因导入金鱼受精卵中表达

采用显微注射法将绿色荧光蛋白（GFP）基因重组表达质粒导入金鱼受精卵中，以期获得能发绿色荧光的金鱼。结果显示，在注射的3批金鱼受精卵中（第一批4310粒，第二批3952粒，第三批4056粒），分别孵出鱼苗543、282和266尾，出苗率为17.02%、12.53%和13.52%，其中表达绿色荧光的金鱼分别为23、24和18尾，表达率为4.24%、8.51%和6.77%。荧光表达检测发现，从肌肉效应期就开始检测得到绿色荧光。     

樱桃谷鸭种蛋受精率和孵化率的相关性分析与应用

试验对樱桃谷SM3父母代种鸭一年的入孵种蛋数、受精蛋数、出雏数进行了跟踪观测.并对种蛋受精率(x)与受精蛋孵化率(y)之间的相关与回归关系进行了分析,建立了相应的回归方程.结果表明,在孵化技术水平和孵化条件相对稳定时,种蛋受精率与受精蛋孵化率呈显著的正相关关系,可得到如下回归方程:y=0.433x+57.735;应用该回归方程可以指导生产实践、制定科学饲养管理和孵化新技术,并可望大幅度提高饲养效益.     

温度对泥鳅受精卵孵化和仔鱼活力的影响研究

[目的]了解温度对泥鳅仔鱼孵化和仔鱼活力的影响。[方法]在不同温度（18、21、242、73、0和33℃）下,研究泥鳅受精卵的培育周期、孵化周期、孵化率和畸形率,对初孵的泥鳅仔鱼进行耐饥饿试验,测定其不投饵存活系数（SAI）。[结果]当温度为18～33℃时,泥鳅受精卵的培育周期和孵化周期随温度的升高而缩短。当温度为18℃时,泥鳅受精卵的培育周期和孵化周期最长,分别为39.43和10.13 h。当温度为21～27℃时,受精卵孵化率达80%以上,且初孵仔鱼的畸形率较低。当温度为18～30℃时,初孵仔鱼在24 h和48 h存活率都相对较高。不投饵存活系数（SAI）随温度的增长呈先升后降的变化趋势。当温度为24℃时,仔鱼的SAI值最高（27.01）。[结论]泥鳅受精卵孵化的适宜温度为21～27℃,仔鱼生存的适宜温度为21～24℃。     

北京市高碑店城市污水对家鱼胚胎发育影响的研究

本研究以家鱼受精卵卵膜膨胀,胚胎发育速度,受精卵半数孵化时间,孵化率和仔鱼畸形率为观察指标。研究结果表明:试验浓度为28%的高碑店污水对鱼的胚胎发育具有一定影响。与该污水对仔鱼及大型蚤(Daphnia magna)的毒性试验相比,鱼类胚胎发育受污水影响更为敏感一些。     

董铺水库太湖新银鱼生物学及其增殖试验

阐述太湖新银鱼的生物学习性（栖息环境、食性、繁殖与生长）,着重论述太湖新银鱼受精卵的采集。本实验共采集受精卵５０多万粒,受精率达８０％以上。受精卵的暂养保存,采取控温方法,将温度控制在８℃,使受精卵发育减慢,但孵化率并没受到影响。这一特性为小银鱼大批量运输提供了依据,在移植工作中具有重要意义。     

老龄(73~77周龄)卢氏鸡种蛋蛋壳品质对孵化效果的影响

将老龄卢氏鸡(73~77周龄)所产的绿壳种蛋和粉壳种蛋分别分为3类(正常蛋、沙皮蛋、皱纹蛋),入孵3批。试验结果表明:无论是粉壳蛋中还是绿壳蛋中,沙皮蛋的受精率、受精蛋孵化率及入孵蛋健雏孵出率与对照组(正常蛋)相比,差异均极显著(P<0.01),3个孵化指标平均分别比对照组低11.9%、15.3%、23.1%;皱纹蛋的受精率与对照组相比,差异不显著(P>0.05),但受精蛋孵化率、入孵蛋健雏孵化率与对照组相比差异显著(P<0.05),两个孵化指标平均分别比对照组低9.7%、9.8%;而绿壳蛋中与粉壳蛋中对应组间的差异不显著(P>0.05)。     

黄羽肉种鸡主要繁殖性状的相关性分析

通过对华南农业大学增城正大肉鸡发展中心2009年1月至2011年4月共计8批父母代黄羽肉种鸡孵化生产记录数据进行整理、归纳和汇总,对种蛋受精率、入孵蛋孵化率、受精蛋孵化率和健雏率4个繁殖性能指标进行相关分析,计算两两间的相关系数并建立回归方程,结果表明4个指标两两间均呈较强正相关。     

转人MCP和CD59双基因小鼠的制备

采用显微混合注射的方法制备转人MCP(膜辅因子蛋白)和CD59(膜反应性溶解抑制物)双基因小鼠,共注射478枚受精卵,移植于21只受体,其中14只受孕,8只受孕小鼠中途流产,从6只受孕小鼠获得18只仔鼠,经检测,其中9只仔鼠单基因阳性(50％),6只仔鼠双基因阳性(33．3％)。结果表明：通过显微混合注射的方法可以获得转人MCP和CD59双基因小鼠。     

初情期前枫泾小母猪超数排卵及其胚胎发育研究

２４头初情期前的枫泾小母猪以ＰＭＳＧ、ＨＣＧ进行超排处理,平均获得２３．４枚卵子,人工授精后２８￣５０ｈ超排的卵母细胞的受精率为９８．１％,受精卵发育至桑椹胚和囊胚的比例为８９．７％。采用外科手术将１８０枚受精卵移植至８头同期发情的枫泾母猪子宫,其中有５头妊娠,产仔４４头,胚胎移植妊娠率为６２．５％