兽用疫苗中霉形体污染的套式PCR检测技术建立及初步应用

根据GenBank公布的鸡毒霉形体、猪肺炎霉形体、猪滑液霉形体和絮状霉形体的16s rRNA基因序列,利用引物设计软件DNAStar和Primer5.0自行设计3对特异性引物,以市场上常见的兽用疫苗为检测对象进行试验,优化反应体系,建立了兽用疫苗霉形体污染检测的套式PCR方法。同时,本试验还对市场上的兽用疫苗进行随机抽查检测,其检出率分别为24.2%(23/95)、21.1%(20/95)和14.7%(14/95)。     

应用多聚酶链式反应检测兽用活疫苗中支原体DNA

我们应用包括套式引物的ＰＣＲ方法检测牛、猪、犬、猪、禽和水貂活疫苗中支原体的ＤＮＡ。尽管这些疫苗中不含有活支原体细胞，但在被检测的６１从商品疫苗中２２份含有支原全。     

巢式PCR在动物疫苗支原体污染检测中的应用

在动物疫苗研制过程中,应用巢式PCR方法,设计两套引物,扩增支原体16S与23SrRNA基因间隔区序列,可以检测造成细胞污染的常见支原体种类。本试验应用该方法检测三批样品和阴性对照均无特异性目标条带,即三批疫苗样品支原体检测均为阴性。阳性对照样品在200-400bp之间出现特异性目标条带,实验表明所建立的巢式PCIL方法是一种快捷、灵敏、准确的检测方法,可以用于检测动物疫苗细胞培养物中支原体污染。     

兽用生物制品中支原体的污染来源及检测预防控制措施

兽用生物制品是一类特殊的动物保健品,是控制和消灭动物传染病,保障动物及人类健康的重要武器之一。若兽用生物制品被支原体污染,制品的质量和安全将会受到严重影响,同时会造成巨大的经济损失。结合生产实际对兽用生物制品支原体污染的主要来源和支原体污染的检测方法进行了介绍,制定了科学合理的预防控制措施,以期为确保兽用生物制品无支原体污染,质量安全可靠提供参考。     

巢式PCR检测猪鼻支原体方法的建立及应用

应用巢式聚合酶链式反应(Nested PCR)建立了一种检测猪鼻支原体(Mycoplasmah yorhinis)的方法,试验中以酚-氯仿法制备模板DNA,根据猪鼻支原体P37序列高度保守区设计2对引物,建立Nested PCR诊断方法.在特异性检测试验中,设计的引物不能扩增出猪絮状支原体、猪滑液支原体、猪肺炎支原体、鸡毒支原体、胸膜肺炎放线杆菌、猪瘟病毒、猪流感病毒、猪圆环病毒及猪繁殖与呼吸综合征病毒等病原体;敏感性试验表明,第1次PCR和第2次PCR的敏感度分别为3.01 mg/L和3.01×10-4mg/L.对41份临床样品肺组织的检测中,普通PCR和巢式PCR的检出率分别为29.3％(12/41)和82.9％(34/41).结果表明,巢式PCR方法明显优于常规PCR方法,具有较高的敏感性和实用性,为猪鼻支原体的检测提供了一种新型、可靠的诊断技术.     

兽用生物制品中支原体的污染来源及检测预防控制策略

兽用生物制品可以对动物传染病进行控制或灭除,有利于保障动物的健康以及人类的健康,属于一种类型较为特殊的保健品.但是如果支原体污染兽用生物制品,将能够导致兽用生物制品的使用效果及安全性受到不良影响,还有可能导致严重的经济损失,所以有必要根据实际生产情况,针对兽用生物制品之中支原体的检测方法及主要来源进行分析,并制定与实际...     

鸡毒支原体PCR检测方法的建立

目前临床上常见的支原体主要为鸡毒支原体（MG）和鸡滑液囊支原体（MS）。由于MG和MS经常发生混合感染，给临床诊断和治疗带来极大的困难。为了快速诊断MG，特别是致病性鸡毒支原体，本研究针对MG的pvpA基因设计特异性引物，通过优化反应条件，进行灵敏性试验、特异性试验和重复性试验，建立快速高效检测MG的PCR方法。结果表明，该检测技术具有较好的灵敏性、特异性强且CV<3%，具有很好的符合性。     

PCR在动物支原体检测中的应用

PCR是近年来发展起来的一项分子生物学新技术 ,具有灵敏、特异、快速、简便和适用面广等优点 ,因而在分子生物学检测与研究中具有广阔的应用前景。目前 ,PCR被广泛应用于众多领域 ,其在支原体检测中的应用与发展已经取得了可喜的成绩。文章简要介绍 PCR在动物支原体检测中的应用 ,包括应用通用 PCR引物与特异性引物检测支原体 ,以及 PCR在禽类、牛和猪支原体检测中的应用现状。表明在实验室和临床中应用 PCR检测支原体是一种有效的方法。     

支原体检测方法的建立及在疫苗检验中的应用

建立两种支原体检测方法,直接培养法和PCR方法。两种方法互为补充,共同应用于生产检验,为生产提供及时可靠数据的同时对产品严格把关,提高产品质量,对树立公司品牌形象具有重要意义。     

猪支原体肺炎活疫苗(168株)的安全性研究

用健康易感仔猪进行同群感染试验和连续五代返强试验对猪肺炎支原体活疫苗(168株)进行安全性试验,同时也进行了该活疫苗单剂量、单剂量重复和大剂量试验及5批次疫苗免疫商品猪的临床试验。结果发现,猪支原体肺炎活疫苗(168株)免疫猪后,免疫猪和同群感染猪均未观察到典型的临床症状和病理变化;连续五代返强试验,试验猪均未观察到典型的临床症状和病理变化,说明该疫苗株未出现返强。单剂量、单剂量重复和大剂量试验及5批次疫苗的临床试验也未观察到不良反应。这说明受试批次猪支原体肺炎活疫苗(168株)具有良好的安全性。     

免疫萤光技术检测禽用活疫苗中衣原体的污染

本文主要描术字用萤光抗体技术对４０批禽病疫苗，以不同的形式进行了检测。第一，取１０批新城疫疫苗，分别用ＮＤ阳性血清中和，接种鸡胚，并任取一批与１０＾－４稀释的衣原体混合后接种鸡胚，作为阳性对照；第二，取２０批禽病疫苗直接涂片检测同时设衣原体对照；第三，取１０批ＮＤ苗，用ＮＤ阳性血清中和，接种鸡胚，同时每批苗分别为１０＾－１４衣原体稀释液混合，接种鸡胚作对照，结果４０批疫苗均未检出阳性，衣原体对照均     

支原体PCR检测方法的建立及初步应用

经过对Genebank鸡滑液支原体、猪肺炎支原体、口腔支原体和猪鼻支原体16S rRNA序列比对,设计了一条通用引物,建立支原体PCR检测方法.该方法敏感、特异、经济、快速,在动物疫苗生产中检测细胞、半成品及成品支原体污染具有较大的应用价值.     

猪支原体肺炎活疫苗(168株)生产工艺关键技术研究

肺炎支原体的培养和保存条件非常苛刻,是疫苗规模化生产的工艺难题。本文针对猪支原体肺炎活疫苗(168株)生产工艺关键技术进行研究。通过培养试验筛选四种培养基配方表明该疫苗株在低血清改良培养基中生长良好;优化发酵培养工艺,使其在发酵罐培养60～70 h的峰值可达到1010CCU/mL;设计筛选该疫苗耐热保护剂和冻干工艺,37℃下保存10 d的耐老化试验结果显示,下降滴度小于100.5CCU/mL。本研究为提供高效、安全和稳定的猪肺炎支原体疫苗产品奠定基础。     

鸡痘病毒活疫苗污染禽网状内皮组织 增生症病毒的间接免疫荧光法检测研究

通过向无外源病毒污染的鸡痘病毒活疫苗中添加不同剂量的禽网状内皮组织增生症病毒(REV),然后用间接免疫荧光法(IFA)进行检测,确定了该IFA方法的最低检出量为每500羽份疫苗中污染20 TCID_(50)的REV。使用该方法对国内16家企业生产的60批鸡痘病毒活疫苗进行了检验,结果显示2个企业生产的4批疫苗REV检测为阳性。随机选取5批IFA检测阴性样品和4批IFA检测阳性样品,按鸡检查法进行外源病毒检验,结果两种方法对REV污染的检测结果的符合率为100%。     

鸡毒支原体PCR检测方法的建立

根据已发表的鸡毒支原体种特异性序列fMG-2设计1对引物,建立检测鸡毒支原体的PCR方法.该法对鸡毒支原体能特异性扩增726 bp的目的片段,而对其他禽病原DNA模板的扩增结果为阴性.建立的PCR方法对鸡毒支原体的最少检出量为3 Pg.用建立的PCR方法对临床采集的样品进行检测,同时对相应的样品进行细菌分离,结果临床样品PCR的阳性检出率为20.5%,细菌分离培养的阳性率为0.9%,表明PCR的敏感性高于细菌分离鉴定.     

支原体PCR检测方法的建立和应用

依据GenBank中登录的常见细胞污染支原体16S rRNA基因序列,选择高度保守的区域设计引物,建立了一种快速灵敏的支原体PCR检测方法.该方法可以特异性检测出6种支原体,并能敏感的检测到10个拷贝数的目的基因.采用建立的PCR方法和传统的培养法对23个不同样品(细胞、血清、疫苗成品、半成品)进行检测,符合度100％.该方法的建立可大大缩短疫苗生产过程中支原体检验所需时间.     

3种PCR引物对猪瘟活疫苗中支原体污染的检测

本研究以GenBank中登录的几种常见支原体的16S rRNA基因序列为标准,依据其属、种特征设计了3对引物,对猪肺炎支原体DNA进行PCR扩增,建立PCR扩增体系和条件。然后以此体系和条件对从市场上随机购买的猪瘟活疫苗样品进行检测。结果显示：3对PCR引物都可以从疫苗样品中检测到支原体的污染,3对引物的检出率分别为20%、17.1%和14.3%,说明猪瘟活疫苗中的支原体污染为多种支原体的混合污染,污染源较为复杂。