一品红品种柠檬雪叶片愈伤组织的诱导及再生技术

以具有黄绿色苞片的一品红品种柠檬雪的叶片为外植体,配以不同浓度的NAA和6-BA组合,对其愈伤组织的诱导及再生进行探讨.研究结果表明,生长素为柠檬雪愈伤组织诱导的主要影响因子,细胞分裂素对愈伤组织生长有促进作用;柠檬雪叶片最适合的愈伤组织诱导培养基为MS+NAA 1.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L,分化培养基为MS+NAA 0.2 mg/L+6-BA 1.0 mg/L,增殖培养基为MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.5 mg/L,生根培养基为1/2 MS+NAA 0.5 mg/L.     

花烟草再生与遗传转化体系的建立

以花烟草(Nicotiana forgetiana)无菌苗植株的叶片为材料,研究不同NAA和6-BA组合培养的再生体系,得到最佳培养基配方为NAA浓度为0.1 mg/L和6-BA浓度为1.5 mg/L,此时再生率达97%、平均芽数达8.65。以卡那霉素(Km)、头孢霉素(Cef)为筛选试剂,探讨了影响农杆菌介导的花烟草遗传转化因素,表明卡那霉素敏感性浓度为20 mg/L、头孢霉素抑菌浓度为300 mg/L,在菌液OD600 nm为0.2~0.4时最适侵染时间为5 min;最适筛选培养基(MS+0.1 mg/L NAA+1.5 mg/L 6-BA+300 mg/L Cef+20 mg/L Km)、壮芽培养基Z2(MS+0.1 mg/L 6-BA+0.01 mg/L NAA+300 mg/L Cef+20 mg/L Km)、生根培养基S2(MS+0.1 mg/L 6-BA+300 mg/L Cef+20 mg/L Km)。以最佳组合进行遗传转化培养,获得的生根苗经炼苗移栽后存活35个株系,用CTAB法提取植物组织DNA,经PCR检测证实外源基因已转入植物组DNA中,阳性率为71%。     

细叶百合鳞片诱导与遗传转化组培体系的建立

为扩大细叶百合(Lilium pumilun)在生物技术领域的应用,本研究以细叶百合鳞片为外植体,MS培养基为基础培养基,附加不同种类和浓度的植物生长调节物质(6-BA,NAA,IAA,IBA)诱导丛生芽及再生植株,对体系中外植体消毒时间及各阶段培养基的激素配比进行了研究.结果表明:0.1％氯化汞溶液最佳灭菌时间为8 min;最佳诱导培养基为MS+ 6-BA 0.5 mg/L+ NAA 0.1 mg/L;最佳继代培养基为MS+ 6-BA 1.0 mg/L+ NAA 0.1 mg/L;最佳增殖培养基为MS +6-BA 0.1 mg/L+ NAA 0.5 mg/L;最佳生根培养基为1/2 MS+ IAA0.1 mg/L+ IBA 0.1 mg/L.     

几丁质酶基因转化番茄的研究

以金丰一号亲本JM、JF为转化材料，建立了以子叶为外植体的离体再生体系，其芽分化培养基为MS ZT 2．0mg/L IAA0．2mg／L，生根培养基为MS。借助植物双元表达载体pROK，用农杆菌(LBA4404)与番茄子叶外植体共培养，把几丁质酶基因和抗除草剂BAR基因转化到番茄上。经过卡那霉紊和Basta的筛选和再生培养，获得转化再生植株。采用浓度为1000mg/L的Basta除草剂溶液涂抹再生植株后代叶片，表现明显抗性。对转化再生植株进行了PCR检测、Southern检测，表明上述基因已整合进番茄基因组中。     

甜瓜自交系离体子叶节再生体系的建立

以4个不同甜瓜自交系为试材,研究基因型,激素(6-BA、IAA)组合、浓度对甜瓜离体子叶节再生的影响。结果表明:不同基因型甜瓜之间的再生频率差异较大,CM-15甜瓜自交系为最佳基因型,在培养基M8(MS+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IAA)上再生频率最高,达96.7%,平均每个外植体再生芽数为4;6-BA是甜瓜子叶节再生的必要激素,而IAA是促进子叶节高效再生的激素;MS培养基中添加0.05 mg/L 6-BA能显著促进再生不定芽的伸长。     

不同浓度6-BA对小菊“孔雀”外植体再生频率的影响

试验以小菊品种"孔雀"的叶片为外植体,选择不同的6-BA浓度配比值,以获得再生频率高的培养基配方。结果表明,在浓度为4.0mg/L和5.0mg/L的6-BA中诱导出愈伤组织和诱导出芽的再生频率较高。具体在(MS+4.0mg/L、6-BA+0.1mg/L)NAA的培养基上诱导出愈伤组织,在(MS+5.0mg/L、BA+0.1mg/L)NAA的培养基上诱导出芽,并在1/2MS的培养基上诱导出根,获得再生完整植株,生根小苗在温室生长良好。     

杂种樱桃(P. avium×P. pseudocerasus) 叶片离体再生体系的建立

以先锋与对樱桃的种间杂交种F8的组培苗为试材进行离体再生,研究建立了F8叶片再生体系,以WPM为基本培养基,附加6-BA及IAA的培养基芽再生效果最好,在1~7 mg/L 6-BA、0.5~3.0 mg/L IAA的浓度组合中,离体叶片均可以再生。其中3.0 mg/L 6-BA 2.0 mg/L IAA组合叶片离体再生效果最好,再生频率可达90%,叶片平均再生芽数可达5.22个。     

农杆菌介导黄瓜Tril基因转化及体系优化

采用农杆菌介导法将黄瓜表皮毛基因Tril转入黄瓜‘新泰密刺’品种,并研究了6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)和卡那霉素(Kan)分别对再生和转化苗筛选效果的影响。结果表明,在黄瓜‘新泰密刺’转化中,Kan抗性苗出芽率为9.67%,生根率为3.67%,转化株阳性率为0.33%;分化培养基中6-BA适宜浓度为0.5 mg/L,出芽率最高(76.33%),平均出芽天数最短(19.66 d);生根培养基中Kan浓度为60 mg/L时筛选效果最好。3种筛选方式的研究表明,仅在生根培养基中添加Kan(60 mg/L)筛选,其转化周期最短(45 d),阳性率最高(达4.0%)。     

大红甜橙遗传转化高效再生体系的建立

以大红甜橙的实生苗为试材,研究6-BA与IAA的不同浓度组合和Km不同浓度对大红甜橙不同外植体离体再生的影响和IBA的不同浓度对不定芽生根的影响,建立了高效的大红甜橙遗传转化再生体系.该体系的最佳条件是:1)以实生苗上胚轴为外植体.2)以MS无机盐 100mg/L肌醇 0.2mg/LV-B1 1mg/LV-B6 1mg/L烟酸 3%蔗糖 0.8%琼脂(pH5.8) 3mg/L6-BA为不定芽诱导培养基,在26℃黑暗条件下培养7d后,转移至光/暗周期16/8h的条件下诱导不定芽的分化(40d分化率达90%).以1/2MS 3%蔗糖 0.7%琼脂 2.0mg/LIBA为不定芽的生根培养基(40d生根率达94.7%).3)筛选遗传转化转化体的Km质量浓度为50mg/L.     

甘蓝型油菜花柄遗传转化体系的创建

为获得转基因油菜植株,以甘蓝型油菜品种特选4号花柄为外植体,确定了不定芽分化最佳培养基为MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.1mg/L,并进行了花柄外植体的转化试验,得到了抗卡那霉素(Kan)植株,并对影响转化的一些因素进行了研究。结果表明:卡那霉素对芽再生均具有很强的抑制作用,最佳筛选浓度为15mg/L;花柄外植体在MS+3mg/L 6-BA+1.0mg/L 2,4-D培养基上预培养72h时,经农杆菌(OD600≈0.4)侵染3min后共培养2d,获得了抗卡那霉素并通过PCR鉴定和GUS报告基因检测的转基因植株15株,遗传转化效率为5.19%。     

超甜玉米转基因稳定高效再生体系的建立及转化植株PCR分析

为了通过对影响超甜玉米再生因素的研究,建立超甜玉米转基因再生技术体系,获得抗虫资源。以超甜玉米幼胚为愈伤组织诱导外植体,利用基因枪法将苏云金杆菌杀虫蛋白基因转化胚性愈伤组织,通过优化再生和生根培养条件建立了稳定、高效的超甜玉米转基因再生成株体系。结果表明,随着愈伤组织继代时间的延长,再生成苗率降低,再生成苗越难;除草剂Basta对愈伤组织筛选的最适质量浓度为8 mg/L,愈伤组织预分化的最适培养基为MS+40 g/L蔗糖+20 g/L甘露醇+5.0 mg/L ABA,最适的再生培养基为MS+20 g/L蔗糖+2.0 mg/L6-BA+0.1 mg/L NAA,生根培养基为1/2 MS+0.1 mg/L NAA,对生根不好的小苗附加0.1 mg/L NAA+2.0mg/L IBA或0.2 mg/L NAA+3.0 mg/L IBA可以促进生根,生根率达93%以上。对部分再生转化植株进行PCR分析,部分植株能够扩增出426 bp片段,与阳性对照大小相同。试验结果初步证明Bt基因已经导入到玉米植株中。     

葡萄风信子基因转化受体系统的建立

以葡萄风信子(Muscari botryoides Mill)品种"紫葡萄"(Cantat)的鳞茎和叶片为外植体,通过植物组织培养再生系统的建立和抗生素敏感性试验,建立了稳定的葡萄风信子基因转化受体系统。结果表明,葡萄风信子的鳞茎和叶片均可被诱导形成大量的愈伤组织;叶片诱导愈伤组织的最适培养基为MS+0.6 mg/L 2,4-D+0.1mg/L 6-BA,其诱导频率可达100%;鳞茎诱导愈伤组织的最适培养基为MS+3.0 mg/L 2,4-D+0.3 mg/L 6-BA,其诱导频率达91.2%;愈伤组织分化不定芽的最适培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA,生根最适培养基为1/2 MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1%AC;筛选卡那霉素的临界质量浓度为60 mg/L,羧苄青霉素的适宜质量浓度为300 mg/L。     

同源四倍体台湾泡桐体外植株再生系统的建立

以同源四倍体台湾泡桐叶片和叶柄为外植体,将其分别置于含有不同植物生长调节剂及其不同质量浓度(0.1~1.1 mg/L NAA和6~20 mg/L 6-BA)的组合培养基上诱导再生植株,筛选最佳外植体和最适培养基,建立体外植株再生系统。结果表明,同源四倍体台湾泡桐体外植株再生的最佳外植体是叶片;其愈伤组织诱导的最适培养基为MS+0.1 mg/L NAA+14 mg/L 6-BA;芽分化的最适培养基为MS+0.3 mg/L NAA+16 mg/L 6-BA;幼芽生根的最适培养基为1/2MS+0.1 mg/L NAA。     

提高金柑实生态离体再生效率的研究

金柑童期短,1年可多次开花结果,有利于通过遗传转化开展花、果性状和相关基因在花、果实中表达的研究,但目前金柑实生苗再生率还有待提高。以广西阳朔的金弹金柑实生苗节间茎段为材料,发现以35 d苗龄(暗培养25 d,光照10 d)的实生苗节间茎段为外植体材料,培养于再生培养基(MS+3 mg/L 6-BA)上50 d左右,可达到80%以上的不定芽再生率。而经过农杆菌侵染后,以MS+2 mg/L 6-BA+1 mg/L NAA+1 mg/L KT为共培养基,MS+3 mg/L 6-BA为筛选培养基时,并在50 mg/L卡那浓度筛选下,仍可获得13.3%的抗性芽再生率。不定芽切下放置于生根培养基(1/2MS+3 mg/L IBA+1 g/L活性炭)中获得86%左右的生根率。通过对影响不定芽和抗性芽再生频率的各种因素进行研究,最终建立了一套有效的金柑实生苗节间茎段离体再生体系。     

青狐尾草丛生芽诱导研究

将青狐尾草作为研究C4光合作用的模式植物,其转化体系还不成熟。由成熟种子胚诱导的愈伤组织再生获得植株效率较低,该试验对比含有不同浓度的6-BA和2,4-D诱导培养基对青狐尾草的丛生芽诱导效果,结果表明:改良后的MS培养基并添加6-BA 2 mg/L和2,4-D 0.5 mg/L组成的诱导培养基效果较好。因此,为青狐尾草的遗传转化寻找到一种比较好的转化对象。     

利用甘蓝游离小孢子不定芽叶片再生DH植株技术研究

【目的】探索一种能将有限的DH株快速扩繁的植株再生技术,扩大DH株数量以提高育种效率。【方法】以甘蓝小孢子胚状体不定芽叶片为试材,MS为基础培养基,分别添加不同质量浓度的6-BA(1.0,2.0,3.0,4.0 mg/L)和NAA(0.05,0.1,0.2,0.4 mg/L),筛选出最优质量浓度组合;在6-BA和NAA最优质量浓度组合上,继续添加不同质量浓度的GA-3(0.5,1.0,1.5,2.0 mg/L),比较筛选小孢子不定芽叶片的最佳再生方法。最后,在MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L不定芽诱导培养基上,研究不同生长日龄DH株叶片的诱导效果。【结果】 在MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L中,不定芽再生频率最高,为64.29%,分化系数4.03;添加6-BA、NAA和 GA-3 3种激素,对不定芽再生频率促进作用更大,其中MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+GA-3 1.5 mg/L诱导效率最高,不定芽再生频率达到了80.36%,分化系数为4.15。当DH株叶片生长日龄为25 d时,不定芽再生频率相对最大,达到68.76%,分化系数为3.62,35 d后诱导效果下降。【结论】 甘蓝DH株叶片诱导植株再生的适宜培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L +NAA 0.1 mg/L+GA-3 1.5 mg/L;以生长日龄为25 d左右的甘蓝DH株叶片作为外植体诱导植株再生效果较好。     

新疆雪莲遗传转化中Basta筛选压的确定

[目的]研究新疆雪莲(Saussurea involucrate Kar.et Kir.)遗传转化中除草剂Basta的筛选压。[方法]用新疆雪莲愈伤组织或再生苗转接于含不同浓度Basta培养基上,观察其存活状况。[结果]浓度为2～12 mg/L的Basta对雪莲愈伤组织或再生苗的生长有不同程度的抑制作用。[结论]Basta可以作为新疆雪莲遗传转化体的一种有效筛选剂,筛选压设为4～5 mg/L比较合适。     

中华枸杞叶片离体再生技术初探

为探索中华枸杞(Lycium chinense Mill.var.chinense)叶片离体再生技术,通过设置不同消毒时间梯度,研究了0.1%升汞溶液对中华枸杞叶片的消毒效果;以MS为基本培养基,添加6-BA、2,4-D、IAA等激素,研究了不同激素浓度配比对中华枸杞叶片离体再生的影响。结果表明,用0.1%升汞溶液消毒叶片8 min,污染率最低,是中华枸杞叶片的最佳消毒时间。基本培养基中添加1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L2,4-D是诱导愈伤组织的最佳激素浓度配比;基本培养基中添加1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA是诱导愈伤组织分化的最佳激素浓度配比;基本培养基中添加0.2 mg/L IAA+0.6 mg/L NAA是诱导丛生芽生根的适宜激素浓度配比。利用组织培养技术可有效实现中华枸杞叶片离体再生和快速繁殖,为其工厂化育苗和优良品种的选育奠定基础。     

利用甘蓝游离小孢子不定芽叶片再生DH植株技术研究

【目的】探索一种能将有限的DH株快速扩繁的植株再生技术,扩大DH株数量以提高育种效率。【方法】以甘蓝小孢子胚状体不定芽叶片为试材,MS为基础培养基,分别添加不同质量浓度的6-BA(1.0,2.0,3.0,4.0mg/L)和NAA(0.05,0.1,0.2,0.4mg/L),筛选出最优质量浓度组合;在6-BA和NAA最优质量浓度组合上,继续添加不同质量浓度的GA3(0.5,1.0,1.5,2.0mg/L),比较筛选小孢子不定芽叶片的最佳再生方法。最后,在MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L不定芽诱导培养基上,研究不同生长日龄DH株叶片的诱导效果。【结果】在MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L中,不定芽再生频率最高,为64.29%,分化系数4.03;添加6-BA、NAA和GA33种激素,对不定芽再生频率促进作用更大,其中MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA31.5mg/L诱导效率最高,不定芽再生频率达到了80.36%,分化系数为4.15。当DH株叶片生长日龄为25d时,不定芽再生频率相对最大,达到68.76%,分化系数为3.62,35d后诱导效果下降。【结论】甘蓝DH株叶片诱导植株再生的适宜培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA31.5mg/L;以生长日龄为25d左右的甘蓝DH株叶片作为外植体诱导植株再生效果较好。     

甘菊遗传转化再生体系的建立

[目的] 建立高效稳定的甘菊再生体系,并确定卡那霉素和草丁膦的筛选压。[方法] 以甘菊无菌苗叶片为外植体,通过添加不同浓度的NAA和6-BA建立了甘菊遗传转化再生体系。[结果] 在5种芽诱导培养基中,MS3（MS＋NAA 0.1mg/L＋6-BA0.1mg/L）的再生频率最高,可达98%,其不定芽生根率可达100%。培养35d后,添加5和10mg/L卡那霉素的培养基上甘菊再生率为11.3%和10%,添加15和20mg/L卡那霉素的培养基上没有芽的分化;添加0.5mg/L草丁膦的培养基上甘菊再生率为8.7%,添加1mg/L草丁膦的培养基上没有芽的再生,添加1.5和2.0mg/L草丁膦的培养基上没有芽的分化。卡那霉素和草丁膦在甘菊遗传转化中的筛选浓度分别为8.0和0.8 mg/L。[结论] 该研究为进行甘菊转基因试验打下了基础。