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一步法RT-PCR快速检测鸡新城疫病毒强毒株 总被引:3,自引:0,他引:3
本文参照NDV融合蛋白(F)基因序列设计引物,通过一步法RT-PCR扩增到NDV强毒株的170bp大小的特异条带。试验中未检出NDV弱毒株、IBV、AIV、IBDV的RNA,能够检出NDV尿囊液毒的最低滴度为10^-5稀释度(相当于10^3.7EID50病毒量)。对山东省不同地区于1997至2003年所分离的21个NDV强毒株检测全为阳性,而6个NDV弱毒株全为阴性。整个实验操作从病毒核酸提取到判定结果,在5h内即可完成。实验结果表明,该方法特异、敏感,适用于NDV强毒感染鸡群的快速检测。 相似文献
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帕利亚姆血清群病毒(PALV)在我国广泛流行,给我国牛羊养殖业健康发展构成了严重威胁,目前国内尚无PALV核酸检测方法的报道。本研究根据流行于我国的中山病毒(CHUV)、Bunyip Creek virus(BCV)和D’Aguilar virus(DAV)3种血清型PALV的Seg-7保守基因序列,设计针对PALV的群特异性RT-PCR扩增引物,通过反应条件优化,建立了PALV的一步法RT-PCR检测方法,其最佳引物浓度为0.8μmol/L;最佳退火温度为56℃。对该方法进行特异性试验,结果显示该方法可特异性的检测出CHUV、BCV和DAV核酸,而对环状病毒属的蓝舌病病毒、流行性出血病病毒、非洲马瘟病毒和广西环状病毒的检测结果均为阴性;敏感性试验结果显示,该方法对RNA标准品的最低检测限为6.9×10~1拷贝/μL。利用该方法检测血液样品,结果显示该方法检测结果与病毒分离结果基本一致。本研究建立的PALV一步法RT-PCR方法具有特异性强、敏感度高等优点,为开展PALV感染疫病诊断与流行病学研究提供了技术保障。 相似文献
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H5亚型禽流感病毒一步法复合RT-PCR检测方法的建立 总被引:2,自引:1,他引:2
针对近年来H5亚型禽流感(AI)频发的严峻形势,本研究通过分析GenBank中AI的221个HA基因和M基因序列,在保守区内用Oligo4.0软件设计合成2对引物,建立了能同时鉴别AIV型与亚型的一步法复合RT-PCR,其扩增的目的片段大小分别为372、229 bp。通过对AIV尿囊液和棉拭子浸出液进行不同稀释倍数检测,结果病毒在尿囊液最低检出量为10-4稀释。用病毒分离和该方法同时检测不同脏器、口咽及泄殖腔棉拭子样品,结果该方法检测灵敏度比病毒分离低10~100倍。用该方法检测H1~H15亚型AIV和鸡新城疫病毒等其他14种禽病毒,结果所有AIV均有M基因229 bp的目的条带,且仅H5亚型AIV有372 bp的特异性条带,而其他14种禽病毒无任何目的条带。 相似文献
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