β-catenin在牦牛角缘毛囊形态发生中的时空表达

以牦牛为实验动物,用免疫组织化学方法定性检测角缘毛囊形态发生过程中β-catenin表达的时空变化规律。结果表明,β-catenin在牦牛角缘毛囊的形态发生早期E65左右,在表皮中呈弱阳性表达,在基板和基底层中呈强阳性表达;在牦牛角缘毛囊的形态发生中期E65~E140,β-catenin在表皮层、基底层、毛囊漏斗部呈中强阳性表达;在角缘毛囊发生后期E140~E240,β-catenin在表皮层、基底层、毛乳头呈中强阳性表达,在毛囊内根鞘和外根鞘呈强阳性表达。其表达规律提示β-catenin在牦牛角缘毛囊的形态发生中有着重要的作用。     

牦牛睫毛毛囊的形态发生及其Shh与β-catenin的时空表达

以胚龄(Ed)45～240牦牛上睑皮肤为材料,同一个体背部皮肤作为对照,通过组织切片HE染色和免疫组化方法研究睫毛毛囊的形态发生过程,检测Shh和β-catenin在牦牛睫毛毛囊形态发生中的时空表达和互作规律.结果表明,在睫毛毛囊的形态发生中表皮-间充质相互作用以表皮为主导间充质随着表皮而变化,β-catenin从基板表皮开始表达,逐渐增强,从毛芽至形成毛囊维持高水平,间充质变化幅度较小;Shh则在睫毛形态发生中变化剧烈,刺激基板-毛芽-毛钉-毛囊.Shh与β-catenin睫毛形态发生中既有协同作用,也有各自的分工,Shh负责发出信号指导细胞分化决定细胞命运,β-catenin则主管维持细胞分化状态并大量增殖.提示两种信号的表达强度与精细分工差异可能是决定毛囊类型的关键因素.     

牦牛角的形态发生及Shh和β-catenin的时空表达

研究对象为Ed(Embryonic days)60～240,0.5～5岁公牦牛角(原)基.采用石蜡切片、HE染色和免疫组化的方法研究牦牛角的形态发生过程,检测Shh(Sonic hedgehog)和β-catenin的时空表达与互作规律.结果表明,牦牛角的形态发生按照角(原)基毛囊和角质外鞘发生与否分为5个阶段:角原基前期(Ed≤60)表皮增厚,无毛囊发生;角原基中期(Ed60～140)表皮持续增厚,有少量毛囊发生;角原基后期(Ed140～250)表皮变薄,大量毛囊发生;肉角期(≤0.5 a)真皮乳头发生;成角期(≥0.5 a)形成角质外鞘.角原基期的顶部和角边缘处基底层Shh与β-catenin表达趋势相同,均为强-弱-强过程;肉角期的角边缘处基底层Shh与β-catenin同时表达,顶部仪β-catenin表达;成角期的角边缘处基底层Shh与β-catenin同时表达,顶部均无表达.结果提示:Shh在牦牛角的形态发生中负责表皮基底层形态分化,β-catenin则起着维持细胞分化状态并促进细胞增殖的作用.     

内蒙古绒山羊毛囊形态发生规律

以胚胎龄40~110 d内蒙古二郎山绒山羊胚胎体侧部皮肤为材料,通过石蜡切片、HE染色,研究绒山羊胚胎毛囊形态发生规律。结果显示,内蒙古绒山羊胚胎皮肤初级毛囊形态发生经历毛基板前期、毛基板期、毛芽期、毛钉期和毛囊期5个时期,这5个时期又可根据其形态结构的差异划分为不同的亚期,内蒙古绒山羊胚胎皮肤初级毛囊形态发生与汗腺的发生相伴随;内蒙古绒山羊皮肤初级毛囊形态发生是分批进行的。在胚胎龄40~110 d内蒙古绒山羊胚胎体侧部皮肤未观察到次级毛囊的发生。     

β-catenin在藏山羊切牙牙胚发育过程中的表达

研究β-catenin在藏山羊牙胚发育过程中的表达与分布变化,并探讨其在牙齿发育过程中的作用机制。制备藏山羊切牙各期标本,并采用免疫组化方法观察。结果表明,帽状期在星网层、内釉上皮、牙囊均为细胞核阳性表达;钟状早期在内釉上皮、牙乳头细胞核阳性表达;钟状晚期在颈环、牙尖细胞膜阳性表达;成釉期早期在成釉质细胞、成牙本质细胞阳性表达;成釉期晚期均阴性表达。β-catenin在早期牙胚发育中有特定的时空表达模式,通过参与Wnt信号通路和作为黏附分子两种方式,对确定牙胚的形态发生重要作用。     

山羊胚胎心脏发生发育的形态学研究

应用光镜观察了山羊胚胎心脏的发生和发育过程 ,结果表明 :15日龄 2 0时的胚胎处于胚层分化阶段 ,中胚层上已有微血管发生 ;16～ 18日龄的胚胎在前肠门两侧发生两条对称的心内皮管 ;18～ 2 0日龄的胚胎在前肠腹面两条心内皮管合并成单管状心。同时 ,心管发生扭曲 ,心管内部开始分隔过程 ;2 0～ 34日龄的胚胎心脏的分隔基本完成 ;34～ 10 5日龄属于胚胎心脏进一步发育成熟的阶段。试验还发现山羊心骨骼中的纤维三角发生初期是由致密结缔组织构成 ,随着胚胎的发育转变为透明软骨 ,具有种特异性     

内蒙古阿尔巴斯绒山羊毛囊结构及形态发生过程研究

 【目的】了解绒山羊毛囊的组织结构及毛囊形态发生变化过程，为研究绒山羊绒毛发育的分子调控机理奠定组织学基础。【方法】制作内蒙古阿尔巴斯绒山羊胚胎皮肤组织切片，显微镜下观察照相。【结果】绒山羊的毛囊结构同其它动物一样，由毛球、连接组织鞘、外根鞘、内根鞘和毛干几部分组成。在胎龄55～65 d毛囊开始发生形成毛芽；胎龄135 d，大多数初级毛囊和一部分次级毛囊发育基本成熟；次级毛囊是初级毛囊的一个分支。【结论】了解了绒山羊毛囊的结构组成及毛囊从发生到发育成熟的整个形态变化过程，为相关领域研究者提供借鉴。     

pcdh19在小鼠毛囊形态发生过程中的时空表达

以胚龄13.5 d到8日龄的昆白系小鼠为试验材料,应用免疫组化方法测定pcdh19在小鼠毛囊形态发生中表达的时空变化。结果显示,基板前期、基板期均未发现pcdh19的表达;毛芽期开始表皮和间充质胞质中出现弱表达,并且毛芽上的表达逐渐加强;在毛囊结缔组织鞘发生和成熟过程中,在该部位始终强表达,推测可将pcdh19作为结缔组织鞘的标志分子。     

20d、18h山羊胚胎系统形态及以后各时期体形发生

２０ｄ、１８ｈ山羊胎儿仍属鳃弓期,呈典型Ｃ字形,４对鳃弓发生,心胸突大于肝腹突,前肢芽、后肢芽均为丘状。前间、中胸泡及神经管均已产生完整;消化系统、循环系统、发育较快、各器官原基已产生;泌尿系统的后肾、生殖系统的性腺尚未发生。２０ｄ、１８ｈ～２６ｄ山羊胚胎为鳃弓期,４对鳃弓充分发育,在后期,前肢芽已由丘状变为桨状,肝腹突在后期超过心胸突,视泡、听泡、嗅窝均已发生;指蹼期：３０ｄ～３７ｄ,虹膜产生,     

EDA及受体EDAR在胚胎小鼠背部毛囊形成期的表达

毛囊是皮肤的附属器官之一。有研究表明外胚层发育不全基因(ectodysplasin A,EDA)是毛囊、牙齿和腺体等器官发育所必需的,EDA及其受体EDAR可以参与并调节毛囊不同时期的发育。[目的]探究EDA和EDAR对小鼠背部毛囊形成的作用。[方法]试验采用苏木精-伊红(HE)染色和免疫组织化学方法,观察小鼠胚胎期第13～18天背部毛囊形成过程中组织结构特征以及EDA和EDAR蛋白在此期间的表达。[结果]HE染色试验结果显示不同天数胚胎小鼠背部毛囊结构有如下变化:细胞排列逐步紧密,层数逐渐增多;皮肤毛胚逐渐凸起,形成基板,并逐步发育成毛钉,进而形成未成熟毛囊。免疫组织化学试验结果显示EDA和EDAR蛋白在表层细胞、基底层、基板、毛芽、毛钉、未成熟毛囊和真皮中均有表达。[结论]EDA可能对毛囊形成的启动有促进作用,且可能促进毛钉的形成和未成熟毛囊的发育;EDAR则可能对表皮的分化有诱导作用,且可能对毛钉的形成和发育有促进作用。     

β-连环蛋白在胎牛睫毛毛囊发育中的表达

以胎牛为实验动物，应用免疫组化检测胎牛睫毛毛囊发育过程中不同阶段β-连环蛋白的表达变化。结果显示β-连环蛋白在毛囊发育早期和中期表达于睫毛毛基、毛芽和毛钉中，其中在隆突区及毛母质中强表达；毛囊发育晚期及成熟期于隆突区、内外根鞘近隆突区强表达，而在毛母质中表达减弱。β-连环蛋白的表达变化提示其在胎牛睫毛毛囊的形态发生及发育中具有重要作用。     

内蒙古绒山羊毛囊不同发育时期BMP2、Noggin及SHH基因在皮肤中的表达

采用功能分类基因芯片方法.分析内蒙古绒山羊皮肤毛囊发育兴盛期和休止期BMP2、Noggin及SHH基因在皮肤中的表达,探讨其对毛囊发育的作用方式.结果表明:与兴盛期相比,休止期BMP2、Noggin及SHH基因表达分别上调24.61倍、下调0.16倍、下调0.22倍.BMP基因可抑制毛囊发育,且与维持毛囊处于休止期有关;在毛囊发育兴盛期,Noggin基因起强抑制BMP2基因表达的作用;在毛囊发育过程中,Noggin对BMP2基因的抑制作用至少是部分通过SHH实现的.     

巴旦杏雌蕊形态及早期胚胎发生的研究

①巴旦杏雌蕊形态结构为：湿型柱头,花柱实心,子房１室,基生胎座,横生胚珠,双珠被,厚珠心,有珠孔塞。②巴旦杏存在明显的雌雄蕊异熟现象：花粉授粉后２ｈ左右便可萌发,而雌蕊胚囊在开花时仍处在４核期。观察的材料中,绝大部分胚囊在授粉第３天逐渐进入８核早期,第９天发育为成熟胚囊,胚囊为蓼型。③珠孔授精,花粉管最早在授粉第９天进入珠孔,第１０～１１天进入胚囊完成双受精。胚乳在授粉第１１天后出现,受精卵休眠１～２ｄ于授粉第１２天前后进行第一次分裂,胚胎发生为紫菀型。此外,本研究还对巴旦杏早期胚胎发生中胚珠的多糖和单宁物质动态进行了观察。     

Wnt10b、β-catenin、FGF18基因在‘甘肃高山细毛羊’胎儿皮肤毛囊中的表达规律研究

以81~147d胎龄的‘甘肃高山细毛羊’胚胎体侧部皮肤作为研究材料,通过冰冻切片、HE染色、荧光定量PCR、免疫组化技术研究Wnt10b、β-catenin、FGF18基因在次级毛囊形态发生过程中的表达规律.结果表明:从次级毛囊形态发生诱导期到器官形成阶段(胎龄87~108d)Wnt10b、FGF18基因表达量逐渐升高,在胎龄第108天Wnt10b、FGF18基因相对表达量分别达到(43.652±0.425)(13.67±0.207),在细胞分化期表达量逐渐下降;而β-catenin基因的表达量始终维持较低水平,相对表达量仅为(0.58±015);Wnt10b基因分别与β-catenin、FGF18基因表达水平呈显著正相关(r=0.85,P0.01;r=0.58,P0.05);β-catenin基因与FGF18基因表达水平呈正相关(r=0.43,P0.05).免疫组化结果显示在次级毛囊形态发生过程中Wnt10b、β-catenin基因主要在表皮、基板、毛芽、毛钉和成熟毛囊的内根鞘、毛干部表达;而FGF18不仅在表皮、基板、毛芽、毛钉和成熟毛囊的内根鞘、毛干部表达,而且在真皮中表达.本研究初步表明,Wnt10b、β-catenin、FGF18基因通过Wnt/β-catenin基因经典信号通路参与调控‘甘肃高山细毛羊’次级毛囊形态发生和再分化过程.     

龙眼体细胞胚胎发生过程中特异表达蛋白的双向电泳分析

以龙眼品种红核子LC2胚性细胞系为材料,进行体细胞胚胎(简称体胚)发生及其同步化调控,获取体胚发生过程中各个主要发育阶段的培养物(胚性愈伤组织、球形胚、子叶形胚、早期成熟胚、中期成熟胚、晚期成熟胚),采用双向电泳对体胚发生过程中特异表达蛋白进行分析.结果表明:(1)龙眼胚性愈伤组织中,pI为4-5的酸性蛋白表达种类最多,在体胚发育的过程中逐渐消失,相反,pI为5-6的微酸性蛋白的表达逐渐增多;(2)体胚发育后期,尤其是成熟胚晚期,分子质量大的蛋白大量减少,分子质量较小的蛋白增多并逐渐积累;(3)虽然在各个发育阶段都会出现一些新的特异蛋白,但是没有改变蛋白质种类逐渐减少的趋势;(4)发现了一些有差异的特异蛋白点,尤其是成熟胚后期,有一系列大分子质量的蛋白消失,新出现了一部分分子质量较小的蛋白,其中几种表达量很大,可能与体胚发育有密切关系.     

沙冬青胚胎晚期发生丰富蛋白基因序列及表达特性分析

从沙冬青叶片EST文库中获得了胚胎晚期发生丰富蛋白（LEA）基因cDNA全长序列,命名为AmLEA14。序列分析表明该基因全长579 bp,含有一个459 bp编码152个氨基酸的开放阅读框,推测编码的蛋白质分子质量为166 ku。二级结构预测显示此编码蛋白属于第4类LEA蛋白。系统发生分析表明,此编码蛋白与大豆LEA14蛋白（P465191）的亲缘关系最近。荧光定量PCR结果显示,AmLEA14的表达量在低温、干旱、盐胁迫条件下升高,但是主要在低温胁迫后期富集。推测AmLEA14基因可能在沙冬青抵御低温、干旱、盐胁迫中发挥作用,主要是参与沙冬青的低温防御机制。      

αV,β3整合素在绵羊体外受精胚胎的表达模式研究

[目的]探讨胚胎附植调控因子αV,β3整合素在绵羊早期体外胚胎的表达情况,为早期胚胎发育及附植调控机理提供理论依据.[方法]采用RT-PCR和间接免疫荧光染色技术,检测绵羊体外受精个发育阶段胚胎中αV及β3整合素mRNA的表达模式及蛋白表达定位情况.[结果]在绵羊2-细胞至桑椹胚体外胚胎中未能检测到整合素αV及β3 mRNA的表达,但可以检测到囊胚期胚胎有微量整合素αV及β3 mRNA的表达.并且在绵羊第7d扩张囊胚和第8d孵化囊胚上均可检测到整合素αVβ3蛋白的表达,且蛋白表达主要分布在胚胎滋养层细胞周围,孵化囊胚蛋白表达量略高于扩张囊胚.[结论]αV,β3整合素在绵羊早期胚胎发育及附植过程中具有重要调控作用.     

福瑞鲤β-catenin2基因的克隆与表达分析

β-catenin是Wnt/β-catenin信号通路中的关键因子,参与调控性腺发育和分化。本研究首次克隆得到福瑞鲤(Cyprinus carpio)β-catenin2的c DNA全长序列,采用荧光定量PCR技术分析了β-catenin2基因的组织表达模式及注射外源性激素对福瑞鲤β-catenin2基因表达的影响。结果表明,β-catenin2 c DNA全长3 411 bp,编码780个氨基酸,预测分子量为85. 52 ku;实时荧光定量PCR表明,β-catenin2 mRNA在血液中表达量最高,其次是性腺和脾脏;且β-catenin2 mRNA表达量在福瑞鲤性腺发育早期,随着性腺发育的成熟而升高。睾丸甾酮(T)处理后发现:卵巢中β-catenin2 mRNA表达量在10μg/g 24 h处理组显著升高(P 0. 05),精巢中β-catenin2 mRNA表达量在10μg/g和50μg/g 24 h、48 h处理组显著降低(P 0. 05)。17β-雌二醇(E2)处理后发现:精巢和卵巢中β-catenin2 mRNA表达量无显著变化(P 0. 05);以上结果表明,β-catenin2在福瑞鲤性腺发育早期是必需的。     

槟榔叶片和花序的体细胞胚胎发生及植株再生

本研究以不同槟榔品种的幼嫩叶片及花序为外植体成功实现体细胞胚胎发生及植株再生.试验结果显示,不同品种及外植体均以毒莠定为最佳愈伤组织诱导剂.诱导所获愈伤组织需连续用生长素浓度由高到低的一系列培养基进行继代培养才能不断生长并诱导体细胞胚胎.当愈伤组织最终转移入无激素MS配养基后可观察到体细胞胚胎发生.胚胎萌发以附加20 ...     

日本血吸虫β-catenin基因的克隆及在不同发育阶段的表达水平

【目的】分析β-连环蛋白(β-catenin)在不同发育阶段日本血吸虫体内的表达特征,为研究Wnt/β-catenin信号通路对虫体发育的调控奠定基础。【方法】以7 d童虫cDNA为模板,通过RACE技术获得日本血吸虫β-catenin基因全长cDNA序列。采用实时定量PCR分析该基因mRNA在不同发育阶段日本血吸虫体内表达水平的变化。以含有多个抗原表位的β-catenin部分cDNA序列为模板,构建原核pET28a-β-catenin-310重组质粒,表达β-catenin蛋白。以纯化的原核表达产物为抗原,免疫BALB/c小鼠制备抗血清,以此抗血清为一抗,通过Westernblotting分析β-catenin蛋白在不同发育阶段日本血吸虫体内表达量的变化。【结果】β-catenincDNA(GenBank登陆号GU570442)序列全长2 354 bp,含完整的开放阅读框,编码671个氨基酸。β-catenin基因mRNA表达水平在虫卵中最高,23 d雌虫次之,在13 d童虫和23 d雄虫中也较高,约是23 d雌虫的一半,在其他发育阶段mRNA的表达水平相对较低。构建的重组质粒以包涵体形式表达β-catenin重组蛋白,该蛋白有很好的免疫原性。在日本血吸虫不同发育阶段β-catenin蛋白表达量的变化趋势与β-cateninmRNA表达水平的变化基本一致。【结论】不同发育阶段日本血吸虫β-catenin基因mRNA表达水平与β-catenin蛋白表达水平变化趋势基本一致;结合日本血吸虫发育特征,推测Wnt/β-catenin信号通路可能对虫体的器官分化、虫卵的形成及卵胚发育等过程起着重要的调控作用。