乳及乳制品中乳铁蛋白定量测定法SDS-PAGE法的建立

为了有助于检测市场上乳及乳制品中的乳铁蛋白含量,本试验建立了定量测定乳及乳制品中乳铁蛋白的SDS-PAGE电泳分析法.试验采集了10种液态奶、3种乳清粉、3种干酪、4种奶粉和4种酸奶,利用SDS-PAGE法分离乳铁蛋白,并优化了分离胶的浓度、电压、上样量和染色法.SDS-PAGE法的最佳条件为:分离胶浓度12%,浓缩胶电压120V,分离胶电压200V,改良的考马斯亮蓝染色,乳铁蛋白标准品的点样浓度0.1111mg/mL.点样量12μL.乳清粉及奶粉比干酪、液态奶和酸奶中的乳铁蛋白含量高,并且,液态奶、干酪和奶粉的检出限分别为2.9、29.0和29.0mg/100g,液态奶、干酪和奶粉的定量限分别为9.7、97.0和97.0mg/100g.该条件下测定乳及乳制品中乳铁蛋白含量的RSD分别为0.01%-8.70%.说明利用本文建立的SDS-PAGE电泳法简易、快速、准确,并且可以作为定量测定乳及乳制品中乳铁蛋白的方法.     

高效液相色谱法同时测定巴氏杀菌乳中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白

建立巴氏杀菌乳中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白的高相液相色谱分析方法。样品经水稀释、调节pH值至4.6沉淀酪蛋白,过滤后采用Xbridge Protein BEH C4柱分析,经体积分数0.1%三氟乙酸-水溶液、体积分数0.09%三氟乙酸-乙腈溶液梯度洗脱、紫外检测器检测、外标法定量。结果表明：α-乳白蛋白在10～500 mg/L质量浓度范围内线性良好,相关系数为0.999 87;当牛乳中α-乳白蛋白加标量为200～1 032 mg/L,加标回收率为97.9%～104.0%、相对标准偏差（relative standard deviation,RSD）为0.00%～1.09%;β-乳球蛋白在20～900 mg/L质量浓度范围内线性良好,相关系数为0.999 96;当牛乳中β-乳球蛋白加标量为600～4 727 mg/L,加标回收率为96.1%～103.0%、RSD为0.00%～2.23%。该方法分离效果好、重复性好,适用于巴氏杀菌乳中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的准确定量。     

不同乳制品中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白的测定

建立高效液相色谱-串联质谱法测定牛乳和婴幼儿配方乳粉中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白含量的方法。样品中加入超纯水溶解,经过二硫苏糖醇和碘代乙酰胺溶液反应打开二硫键并保护巯基后,加入胰蛋白酶溶液进行酶解,反应结束后用乙腈水溶液定容,离心,移取上清液待测,外标法定量。结果表明：α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白标准曲线在0～100 μg/mL范围内线性良好,相关系数均大于0.995;α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白在生乳中的平均加标回收率为93.5%～117.1%,相对标准偏差为1.4%～6.7%。该方法前处理操作简便,分析速度快,灵敏度高,可用于牛乳和乳粉中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白含量测定。     

增加β-乳球蛋白和乳清蛋白质含量对 UHT奶保存稳定性的影响

本试验检测了在UHT牛奶中添加浓缩β-乳球蛋白粉(0.015-0.375g/100g牛奶)或乳清粉(0.26-2.5g/100g牛奶)对其稳定保存的影响.在生奶中添加β-乳球蛋白或乳清粉,增加乳清蛋白质的浓度,UHT奶推迟了凝结时间.添加低浓度的β-乳球蛋白通常推迟凝结时间4-8周,而大剂量的添加β-乳球蛋白或乳清粉将进一步推迟凝结时间.凝结出现在样品上层的乳脂层,通常与样品凝结有关的粘度并没有增加.牛奶组成的季节变化与凝结时间之间没有明显相关.     

草地藏系绵羊乳的组成及乳蛋白多态性

测定了63只草地藏系绵羊乳常规营养成分的含量,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了乳蛋白组分及乳蛋白多态性。结果表明:草地藏系绵羊脱脂乳中蛋白含量为(48.45±1.66)g/L,乳糖含量为(41.93±0.64)g/L,乳脂肪含量为(69.43±1.44)g/L;脱脂乳蛋白主要包括α-乳清蛋白、β-乳球蛋白、酪蛋白、免疫球蛋白等组分,酪蛋白的相对含量约为52%。乳中酪蛋白、β-乳球蛋白均未检测到多态性。试验检测到4种分子量类型的乳上皮粘蛋白(MUC1),分子量分别为214、209、207和205 ku。试验结果提示,草地藏系绵羊乳蛋白多态性较为贫乏。     

原料乳中外源性β-内酰胺酶快速检测方法的建立

β-内酰胺酶是乳及乳制品中的非法添加物,卫生部已发布相关检测方法,但是方法耗时,不利于乳制品企业应用。本文采用间接测定原理,即利用β-内酰胺酶在原料乳中降解青霉素G(青霉素钠)的能力,建立了外源性β-内酰胺酶快速检测方法,并确定了该方法的检出限、重复性和抗干扰性能。结果显示:该方法的检出限为4IU/mL,10组平行性实验结果符合度为100%;阴性样品的掺假添加检测结果均为阴性,说明抗干扰性能好;对阳性结果的样品进行定量验证,验证结果均为阳性,说明准确度高,且普遍性较好,是一种适应用于原料乳收购过程的快速检测方法。     

高效液相色谱法测定乳与乳制品中柚皮苷

建立高效液相色谱法测定乳与乳制品中柚皮苷含量的方法。样品用甲醇提取,在284 nm波长下,流动相为体积分数0.1%醋酸水溶液-乙腈（75∶25,V/V）,C18色谱柱分离,经二极管阵列检测器检测,外标法定量。结果表明：柚皮苷在5～500 μg/mL质量浓度范围内线性关系良好,相关系数为0.999 9;分别向乳粉、液态乳和酸乳样品中在加入柚皮苷标准品0.02、0.04、0.08 g/100 g时,加标回收率分别为96.2%～103.2%、96.3%～103.7%和99.7%～104.1%,相对标准偏差分别为1.12%～2.31%、1.25%～1.85%和1.24%～1.66%。该检测方法简便、快速、准确、重复性好,能够测定乳与乳制品中柚皮苷的含量。     

高效液相色谱法测定乳品中乳铁蛋白的含量

建立乳品中乳铁蛋白高效液相色谱的测定方法。采用pH值为7.0磷酸盐缓冲溶液做为提取剂,C_(18)色谱柱分离,不同浓度的乙腈-0.5 mol/L的氯化钠溶液-三氟乙酸的二元系统进行梯度洗脱。每100g奶粉(或每100mL液态奶)中乳铁蛋白添加量为5~10 mg时,回收率大于90%。定量限为0.5 mg/100g。该方法具有结果准确,操作简便,重复性好等优点,可用于乳品中乳铁蛋白的检测。     

牛奶β-乳球蛋白研究进展

β-乳球蛋白是牛奶中主要乳清蛋白的成分。作者对目前国内外有关β-乳球蛋白的研究进行了综述,主要包括牛奶中β-乳球蛋白的组成与结构、生理功能,热加工对β-乳球蛋白变性的影响及β-乳球蛋白的应用等内容。     

干酪乳杆菌WPC09对β-乳球蛋白抗原性降低的研究

前期的研究筛选出了一株降β-乳球蛋白抗原性的干酪乳杆菌WPC09。研究表明,在脱脂乳中β-乳球蛋白抗原性降低率达到92.0%,且水解牛乳蛋白产生游离氨基酸的数量相当于341.5μg/mL酪氨酸。所以为了了解干酪乳杆菌WPC09降β-乳球蛋白抗原性的机理,我们初步的考察温度和pH值对干酪乳杆菌WPC09降β-乳球蛋白抗原性的影响,以及考察发酵上清液和活细胞悬液对β-乳球蛋白抗原性的降低能力。     

驴乳的化学成分和营养价值

驴乳含水分90.02%,脂肪1.47%,蛋白质1.84%,乳糖6.26%,灰分0.42%.氨基酸种类齐全,数量充足,比例合理;9种人体必需氨基酸的含量占氨基酸总量的42.52%.矿物质和维生素含量丰富,钙磷比1.7：1,硒含量是牛乳的5.16倍,维生素C含量是牛乳的4.75倍.驴乳属乳清蛋白性乳类,乳白蛋白和乳球蛋白的含量占蛋白质总量的60%以上;不饱和脂肪酸含量高,人体必需脂肪酸亚油酸和亚麻酸的含量占脂肪酸总量的30.7%,比牛乳高27.2个百分点;胆固醇含量为2.2mg/100g,是牛乳的14.7%.在各种家畜乳中,驴乳的成分和人乳最为接近,可作为婴幼儿代乳品或代乳品基料.驴乳的化学成分和营养特点决定其在乳制品和保健食品的开发中具有较大的潜力.     

骆驼乳生物资源与营养价值

骆驼是一种独特的动物,其艰难的生长环境赋予了骆驼乳独特的营养价值与功能特性。本文对骆驼乳组分进行了详细分析,发现骆驼乳营养丰富——蛋白质特别是保护性蛋白、维生素和矿物质含量都明显高于牛乳;不饱和脂肪酸比例较高、不含过敏原β-乳球蛋白。目前我国对骆驼乳的研究还很有限,但随着消费者们对骆驼乳认识的深入,骆驼乳制品的全面发展将会进一步加快。     

补充脂质对不同β-乳球蛋白显型奶牛的乳产量及乳汁组成的影响

不同品种及基因系的奶牛对补充脂质的反应不同，说明营养与基因型的相互作用。β-乳球蛋白显型与牛乳产量及组成是相关的。没有测定出不同β-乳球蛋白显型奶牛对补充脂质的反应，此外．测定了补充脂质是否会改变牛乳蛋白质的组成。通过使用一种随机分组设计，将39头荷斯坦奶牛饲喂了3周，一部分饲喂包含2．8％粗脂肪的对照日粮（n=19），其余的饲喂补充了4．2％动物脂的试验日粮（n=20）。存此之前，所有奶牛均饲喂补充动物脂的日粮至少2周。存试验期及前1周测定干物质摄入量、体重、乳产量及乳汁组成。补充动物脂增加了干物质摄入量、乳产量及乳中成分，包括酪蛋白含量，没有减少任何乳中成分，也没有改变乳蛋白的组成。在低脂肪对照组，β-乳球蛋白B奶牛的乳产量及乳汁内容物含量要高于β-乳球蛋白A奶牛，然而在试验组的奶牛中没有观察到差异。试验结果表明，不同β-乳球蛋白显型的奶牛对低脂肪日粮的反应不同，补充4．2％动物脂的日粮可以增加乳汁产量但是不影响乳汁成分构成和乳蛋白组成。     

水牛初乳和常乳主要组分的动态变化

试验旨在研究水牛初乳和常乳主要组分的动态变化规律。采用乳品分析仪对摩本杂水牛(摩拉水牛×德宏水牛)初乳和常乳中乳脂、乳糖、乳蛋白、总固形物(TS)和非脂固形物(SNF)等含量进行测定,用SDS-PAGE对乳蛋白各组分进行分离,并利用凝胶成像系统进行扫描定量。结果表明,初乳中乳糖含量随泌乳天数的增加逐渐升高;乳蛋白、总固形物(TS)和非脂固形物(SNF)含量呈下降趋势;初乳中乳脂含量变化不规则,出现小幅波动;蛋白质各组分中乳铁蛋白(LF)、血清白蛋白(SA)、免疫球蛋白(Igs)含量第1天最高,以后开始下降;酪蛋白(CN)在乳蛋白百分比含量中占优势,随着泌乳天数的增加逐渐升高;β-乳球蛋白(β-LG)第1天含量低,第5 和7天达到最高值;α-乳白蛋白(α-LA)第1天最低,第2天急剧上升,以后变化平稳。常乳中大部分组分含量比较稳定,有时有波动,但各天数之间差异不显著。研究结果显示,水牛乳中大部分组分的含量在初乳中变化较大,初乳的营养价值高于常乳。     

反相高效液相色谱法检测牛初乳乳铁蛋白的方法研究

为了建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定牛初乳乳铁蛋白的含量,采用Kromasil C4色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-水-三氟乙酸(80:20:0.1)流速0.6 mL/min;检测波长:220nm;柱温:25℃.乳铁蛋白的检测线性范围为0.025-1 mg/mL,回归方程为Y=734105X-8035.9,相关系数r=0.999,平均回收率为99.58%,相对标准偏差为1.3%.此方法操作方便、快捷、精密度好、结果准确可靠、重复性好.     

利用高效液相色谱仪测定猪乳中乳清蛋白含量的方法及其应用

为了建立快速准确检测猪乳中溶菌酶、乳铁蛋白、α-乳白蛋白、血清白蛋白和β-乳球蛋白高效液相色谱方法,采用0.1%三氟乙酸水溶液为流动相A,0.1%三氟乙酸乙腈溶液为流动相B进行程序洗脱,用Xbridge~(TM) Sneild RP C18色谱柱对α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和溶菌酶进行分离检测,用Supelcosil C18色谱柱对乳铁蛋白和血清白蛋白进行分离检测。结果显示:5种乳清蛋白分离良好,在25~1 000 mg·L~(-1)范围内呈良好线性,标准曲线回归系数均大于0.99,RSD小于5%,回收率在91%~97%,溶菌酶、乳铁蛋白、α-乳白蛋白、血清白蛋白和β-乳球蛋白的检测限分别为0.2、4.0、0.6、0.3和1.0 mg·L~(-1);对猪乳中乳清蛋白进行测定显示,β-乳球蛋白、溶菌酶、乳铁蛋白和血清白蛋白含量在母猪分娩后16 d内逐渐降低,其含量均在母猪分娩后第1天最高,分别为17.2、0.224、2.0和15.6 g·L~(-1),在第16天含量最低,分别为5.6、0.092、0.5和3.6 g·L~(-1);α-乳白蛋白含量在母猪分娩后逐渐升高,在第7天时含量达到最高为3.3 g·L~(-1),随后降低,保持在3.1 g·L~(-1)。结果表明:建立的乳清蛋白高效液相色谱法,能够快速准确检测猪乳中5种乳清蛋白的含量。     

液相色谱法测定超高温灭菌乳中蛋白含量

建立一种超高温(ultra high temperature,UHT)灭菌乳中α-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、α-乳白蛋白及β-乳球蛋白含量的液相色谱检测方法.采用含双[三(羟甲基)氨基甲烷]、盐酸胍、柠檬酸钠、二硫苏糖醇等的缓冲液及试剂使蛋白溶解变性,运用液相色谱仪紫外检测器进行检测,外标法定量.结果表明:各蛋白...     

高效液相色谱法快速测定乳与乳制品中4种香兰素类化合物

建立乳与乳制品中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素的反相高效液相色谱分析方法。用乙腈作为提取剂,氮吹浓缩,正己烷除脂净化,以C18反相色谱柱分离,20 mmol/L乙酸铵缓冲溶液（pH 5.6）-乙腈-甲醇为流动相,采用梯度方式洗脱,紫外检测波长267 nm,外标法定量。结果表明：4 种香兰素类化合物在0.05～5.00 μg/mL范围内线性良好,液态乳、乳粉、发酵乳、乳酸菌饮料、雪糕和干酪样品中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素的定量限均为0.2 mg/kg,检出限均为0.06 mg/kg;液态乳、乳粉、发酵乳、乳酸菌饮料、雪糕和干酪中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素添加量为0.2～2.0 mg/kg时,加标回收率分别为80.6%～110.0%、80.1%～109.6%、80.4%～109.5%、80.1%～105.9%,相对标准偏差分别为1.87%～7.70%、1.45%～9.80%、1.66%～9.52%、1.16%～9.52%。本方法快速、准确、重复性好、操作简便,适用于乳制品中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素的含量测定。     

骆驼乳的营养成分及其营养价值

骆驼兼有役、肉、毛、乳等多种用途,不仅是游牧民族文化的独特象征,也是荒漠半荒漠经济可持续发展的助力。骆驼乳中的乳蛋白、长链脂肪酸含量高于牛乳,不含有过敏原β-乳球蛋白,乳糖含量低于牛乳,多数活性营养成分高于牛乳、羊乳等动物乳制品,可作为替代牛乳、羊乳的绿色营养乳进行开发。为促进骆驼乳的研究和利用,本文从乳产量、物理指标和化学指标对骆驼乳进行探讨,分析了骆驼乳的乳蛋白、乳脂肪、乳糖等营养成分及其营养价值,供同行交流参考。     

反相高效液相色谱法测定发酵乳中赤藓红含量

建立发酵乳中赤藓红的反相高效液相色谱分析方法。使用酶法分解蛋白,无水乙醇作为提取剂,碱性条件下使用HLB固相萃取小柱净化,以C₁₈反相色谱柱分离,20 mmoL/L乙酸铵缓冲溶液(pH 6.5)-甲醇为流动相,采用梯度洗脱,检测波长520 nm,外标法定量。结果表明：赤藓红在0.05～20.00μg/mL线性良好,发酵乳样品中赤藓红的定量限为0.2 mg/kg,检出限为0.1 mg/kg;发酵乳中赤藓红的添加量为0.2～2.0 mg/kg时,加标回收率为96.5%～105.6%,相对标准偏差为1.87%～2.21%。本方法操作简便、结果准确、回收率高、重复性好,适用于发酵乳中赤藓红的含量测定。