柑桔皮水提液在小鼠体内的抗氧化作用研究

研究了柚皮、松柑皮的水提液对小鼠体内氧化作用的影响。结果表明：柚皮、松柑皮的水提液在灌服浓度为0．1g／ml和0．2g／ml的条件下,对小鼠脑、心、肝组织的脂质过氧化具有较强的抑制作用,还可明显增强小鼠体内SOD酶的相对活性,其中椪柑皮水提液在小鼠体内的抗氧化作用强于柚皮水提液。     

桑枝皮水提液对实验性高血糖小鼠的动物实验

文章研究了桑枝皮水提液对高血糖小鼠的降糖作用,桑枝皮水提液为实验室自制,通过正交实验优化出最佳提取工艺,通过动物实验进行药理验证,为进一步的开发提供了理论基础。     

桑枝皮水提液对实验性高血糖小鼠的动物实验

文章研究了桑枝皮水提液对高血糖小鼠的降糖作用,桑枝皮水提液为实验室自制,通过正交实验优化出最佳提取工艺,通过动物实验进行药理验证,为进一步的开发提供了理论基础.     

柑桔皮水提液在小鼠体内的抗氧化作用研究

研究了柚皮、(木亚)柑皮的水提液对小鼠体内氧化作用的影响.结果表明: 柚皮、(木亚)柑皮的水提液在灌服浓度为0.1 g/ml和0.2 g/ml的条件下,对小鼠脑、心、肝组织的脂质过氧化具有较强的抑制作用,还可明显增强小鼠体内SOD酶的相对活性,其中(木亚)柑皮水提液在小鼠体内的抗氧化作用强于柚皮水提液.     

氟对体外培养成骨细胞骨钙素基因表达的调控

 【目的】探讨氟对成骨细胞骨钙素(OCN)基因表达的影响。【方法】应用酶消化法分离初生小鼠头盖骨成骨细胞,取第3代成骨细胞,加入不同浓度（0～10-3mol?L-1）氟化钠,提取细胞总RNA,通过实时荧光定量PCR方法,观察成骨细胞OCN基因表达的变化。【结果】各浓度NaF均能刺激体外培养成骨细胞OCN基因的表达呈剂量依赖关系,当浓度为5×10-4mol?L-1时OCN基因表达量的增加最为明显,约为对照组的30倍。【结论】各浓度的NaF均能在基因水平刺激OCN的表达,OCN在氟中毒所致的骨相损害中起着重要的作用。     

阉割对金华猪甲状腺组织GNAS基因表达的影响

为研究阉割对甲状腺刺激性G蛋白α亚基(GNAS)基因表达的影响,采用SYBR Green荧光定量PCR分析方法,分析60、90和120日龄阉割组与非阉割组金华猪甲状腺组织中GNAS基因的表达水平。结果表明:在3个时期,无论是阉割组还是非阉割组,金华猪GNAS基因的表达水平均是90日龄低于60日龄,而120日龄又高于90日龄;非阉割组60日龄GNAS基因的表达量最高,而阉割组120日龄GNAS基因的表达量最高。阉割组GNAS基因的表达水平在不同的生长阶段均低于非阉割组。结果提示建立的SYBR-Green荧光定量PCR方法可有效地用于GNAS基因的表达分析;阉割会造成猪GNAS基因的表达量下降。     

杜仲总黄酮对大鼠成骨细胞护骨素表达的影响

[目的]研究杜仲总黄酮对新生大鼠颅盖骨体外培养成骨细胞护骨素的mRNA及蛋白表达的影响。[方法]分别加入浓度为10、100、200μg/ml的杜仲黄酮到SD大鼠颅骨分离培养的成骨细胞中,用Realtime-PCR法检测杜仲总黄酮对护骨素的mRNA表达的影响;采用细胞免疫荧光技术检测杜仲总黄酮对护骨素蛋白表达的影响。[结果]与对照组比较,杜仲总黄酮能明显促进成骨细胞护骨素的mRNA和蛋白质的表达。[结论]杜仲总黄酮成分能直接在RNA和蛋白质水平促进体外成骨细胞中护骨素的表达。     

实时荧光定量PCR检测九香虫血淋巴液对肿瘤细胞凋亡相关基因表达的影响

为了检测九香虫血淋巴液对肿瘤细胞凋亡的影响,本试验制取2.45mg·L-1、12.26mg·L-1浓度的血淋巴液,将其分别作用至人乳腺癌MCF-7及人胃癌SGC-7901细胞,并采用实时荧光定量PCR方法对作用前后的肿瘤细胞凋亡相关基因表达进行检测.结果显示,经血淋巴液处理后的2种肿瘤细胞Caspase-9、Bax及C...     

H3N2和H1N1甲型流感病毒感染对猪CDK9基因表达的影响

【目的】研究H3N2和H1N1甲型流感病毒感染对仔猪肺脏CDK9基因表达的影响,揭示流感发病机制与CDK9基因的相关性。【方法】以接种PBS的仔猪为空白对照,利用实时荧光定量PCR技术和半定量免疫组织化学法,检测H3N2和H1N1甲型流感病毒接种感染7d后,仔猪肺脏CDK9的mRNA和蛋白表达的变化,并在电子显微镜下观察CDK9阳性细胞的定位。【结果】实时荧光定量PCR检测表明,H3N2和H1N1甲型流感病毒感染仔猪7d后,肺脏组织内CDK9基因mRNA的相对表达量分别为0.42和0.36,与对照(1.0)相比显著降低(P<0.05)。半定量免疫组织化学检测结果显示,仔猪受到H3N2和H1N1流感病毒感染后,肺脏组织内CDK9蛋白的相对表达水平分别为31.4和38.7,较正常组织(61.4)显著降低(P<0.05)。电子显微镜观察发现,H3N2和H1N1甲型流感病毒感染仔猪后,肺脏细胞界限不明显,CDK9阳性细胞散在分布于终末细支气管和肺泡内,且胞核着色较深,但是细胞整体着色变浅。【结论】受到流感病毒感染后,仔猪肺脏组织内CDK9表达量降低,可能是RNApolⅡ磷酸化水平降低的原因之一。     

不同肥料配比对黄芪有效成分合成关键酶基因表达的影响

为了探究不同肥料配比对黄芪有效成分合成途径的关键基因表达量的影响,以1年生黄芪为试材,选取3种诱导子(水杨酸、萘乙酸、硝普钠)以及固氮菌T16、T21和黄芪绿肥配制成肥料,按照正交试验设计4因素3水平的9个组合,利用实时荧光定量PCR对PAL、CHS和SS基因在不同配比施肥条件下黄芪根、茎部位的表达量进行测定分析。结果表明,不同肥料配比差异性地影响PAL、CHS、SS基因的表达量。因而,推断其可能会影响黄芪药效成分在根茎部位的合成与积累。     

饲喂羊肉和鸭肉对大鼠AQP_2表达的影响

为研究饲喂羊肉和鸭肉对大鼠肾脏水通道蛋白2(Aquaporin-2,AQP2)mRNA转录及其蛋白表达水平的影响,将90只3周龄雄性SD大鼠随机均分成3组,分别饲喂豆粕饲料(对照组)、羊肉饲料和鸭肉饲料。饲喂14 d和28 d对大鼠血清抗利尿激素(arginine vasopressin,AVP)、AQP2 mRNA、AQP2蛋白表达及Na+-K+-ATP酶活性进行检测。结果表明:饲喂羊肉大鼠的Na+-K+-ATP酶活性、AVP水平、肾脏AQP2蛋白表达及其基因转录水平均升高,而饲喂鸭肉上述指标均降低,且羊肉组和鸭肉组相比,差异显著(P<0.05)。3个试验组大鼠的体重差异显著,从大到小依次为鸭肉组、羊肉组、豆粕组。饲喂14 d,羊肉组的肾体比显著高于鸭肉组和豆粕组,鸭肉组与豆粕组差异不显著;饲喂28 d,羊肉组的肾体比显著高于鸭肉组。上述结果表明:饲喂羊肉和鸭肉对大鼠肾脏AQP2蛋白表达及其基因转录水平具有显著影响,饲喂羊肉使其上调,而饲喂鸭肉使其下调。因此,饲喂羊肉使机体向外利水的生理作用受限,而饲喂鸭肉使机体向外利水的生理作用增强。     

饲料添加杜仲皮水提物对虹鳟生长、肠道组织学及菌群多样性的影响

为研究不同浓度杜仲皮水提物对虹鳟Oncorhynchus mykiss生长、肌肉营养成分、肠道组织学及菌群多样性的影响,以体质量为(145.56±4.12)g的虹鳟幼鱼为研究对象,试验设5组,每组3个重复,每个重复30尾,在虹鳟基础饲料中分别添加浓度为0(对照组)、0.5%、1%、2%、4%的杜仲皮水提物,养殖周期为10周。结果表明:各试验组终末体质量、特定生长率均无显著性差异(P>0.05);各添加组肌肉粗脂肪含量显著高于对照组(P<0.05),其中, 4%添加组粗脂肪含量最高且显著高于其他组(P<0.05),各试验组肌肉粗蛋白质含量无显著差异(P>0.05);各试验组肠道皱襞、固有膜及肌层结构完整,其中,0.5%、1%和2%添加组杯状细胞数量增多,但对照组、4%组杯状细胞数量未见变化; 2%、4%添加组Simpson指数显著高于0.5%、1%添加组(P<0.05),但与对照组无显著性差异(P>0.05),1%添加组Shannon指数显著高于2%、4%添加组(P<0.05),但与对照组、0.5%组无显著性差异(P>0.05);在门水平上,肠道优势菌群为软壁菌门Tenericutes、厚壁菌门Firmicutes、梭杆菌门Fusobacteria、变形杆菌门Proteobacteria;与对照组相比,有害菌群中2%添加组肠道物种丰度下降最为明显,4%组除布鲁氏菌科Brucellaceae、鞘脂单胞菌科Sphingomonadaceae、苍白杆菌属Ochrobactrum物种丰度显著升高外,其余均显著降低(P<0.05),有益菌群中4%添加组肠道慢生根瘤菌科Bradyrhizobiaceae、丛毛单胞菌科Comamonadaceae物种丰度显著升高(P<0.05)。研究表明,在虹鳟饲料中添加4%杜仲皮水提物能较好地改善肠道菌群结构。     

肾上腺素对猪季节性基因表达的影响

选用部分具有季节性表达的基因,探讨肾上腺素对这些基因mRNA表达量的影响。(1)将猪肾细胞(PK15)分别置于含有100,250,500,750,1 000 nmol/L肾上腺素的培养基中培养6 h,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ADRβ2、ARNTL、CLOCK、IL-6R、NR3C1、VDR的mRNA表达量的变化。结果表明:1 000 nmol/L肾上腺素处理PK15细胞时,与对照组相比ADRβ2、IL-6R的mRNA表达量明显升高,差异极显著(P0.01);VDR的mRNA表达量降低,差异极显著(P0.01);CLOCK、NR3C1、ARNTL的mRNA表达量无明显变化。(2)选择1 000 nmol/L的肾上腺素分别处理PK15细胞6,12,24,36,48 h。qRT-PCR检测ADRβ2的mRNA表达量变化。结果表明:与对照组相比,培养12 h时ADRβ2的mRNA表达量达到1.6倍,差异极显著(P0.01),随着培养时间延长,ADRβ2的mRNA表达量逐渐降低,36 h时降到最低,为对照组的0.4倍,差异显著(P0.05)。这说明肾上腺素对部分季节周期性变化的基因具有调节作用,季节变化产生应激时可以通过肾上腺素影响ADRβ2、IL-6R、VDR的表达,从而影响机体功能。     

植物乳杆菌Lp基因表达时内参基因的选择

实验以植物乳杆菌Lp为实验材料,用荧光定量PCR技术分析16S rRNA、Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenas、L-lactate dehydrogenase以及rec A protein四个候选内参基因的表达情况。应用两种软件ge Norm和Norm Finder程序对实验结果进行分析。实验结果显示在植物乳杆菌Lp中,稳定值最小的是16S ribosomal RNA,用Norm Finder软件分析,稳定值最小的也是16S ribosomal RNA。揭示16S ribosomal RNA适合做植物乳杆菌正常生长状态下的内参基因。     

SA诱导对苹果叶片中PGIP基因表达的影响

以抗病性不同的两个苹果品种秦冠和礼泉短富为材料,研究在叶面喷施不同浓度的SA对苹果叶片中PGIP基因表达水平的影响。结果表明,0.1和0.01 mmol/L的SA叶面喷施处理对苹果叶片PGIP基因表达在0~96 h、0~129 d均有影响。在SA诱导处理后0~96 h内,两种浓度的SA处理均可以促进秦冠叶片PGIP基因的表达,低浓度处理后,PGIP基因表达上调达到峰值的时间较长,峰值较高;高浓度的SA处理能提高礼泉短富叶片PGIP基因的表达水平,低浓度的SA处理抑制其表达。在SA诱导处理后0~129 d内,前期（13~27 d）秦冠叶片PGIP基因的表达维持在较高水平且低浓度SA处理促进效应大,后期（27~129 d）表达量下降,促进效应不明显;高浓度的SA处理促进礼泉短富叶片PGIP基因表达,处理后第40天达到峰值,而低浓度的SA处理抑制其表达。     

pH对酸性紫色土中硝化作用与硝化微生物的影响

硝化作用是对pH高度敏感的典型生物学过程.本实验以重庆市永川区pH=3.8的紫色土为研究对象,pH=6.5紫色土为对照,通过室内培养实验研究了土壤硝化动力学过程,并采用荧光实时定量PCR技术对土壤氨氧化细菌(AOB)和氨氧化古菌(AOA)定量.结果显示:pH=3.8的紫色土净硝化速率为0.56mg/(kg·d)(全文均以N质量分数计),而pH=6.5紫色土的净硝化速率是pH=3.8紫色土的12.8倍,为7.14mg/(kg·d).研究同时发现不同pH的紫色土均符合一级动力学方程,动力学拟合参数表明pH高的紫色土具有更高的潜在硝化速率.硝化反应底物NH_3质量分数随土壤pH增加呈数量级增加,经计算pH=6.5紫色土中NH_3质量分数为1.08×10~(-1) mg/kg,是pH=3.8紫色土(2.46×10~(-4) mg/kg)的439倍.土壤中AOB,AOA丰度测定显示,pH=3.8紫色土中AOB,AOA的氨单加氧酶(amoA)基因拷贝数分别为3.23×10~6,7.17×10~6/g干土,而pH=6.5的紫色土中AOB,AOA的amoA基因拷贝数分别为3.58×10~7,1.67×10~8/g干土.虽然结果显示pH=6.5的紫色土中氨氧化微生物丰度明显高于pH=3.8的紫色土,但pH=3.8的紫色土中氨氧化微生物仍有较高的硝化潜力.结论认为,pH主要通过影响硝化底物NH_3质量分数而直接影响紫色土的硝化强度.     

乳腺癌患者外周血中MnSOD基因表达检测及其临床意义的研究

目的探讨锰超氧化物歧化酶（manganese superoxide dismutase,MnSOD）在乳腺癌患者和正常人外周血中的表达差异及其临床意义.方法采用实时荧光定量PCR方法检测218例乳腺癌患者和77例正常女性外周血中MnSOD基因表达水平,并进行分析.结果乳腺癌患者外周血中MnSOD基因表达水平为4.38±0.74,正常女性外周血中MnSOD基因表达水平为4.16±0.64,P〈0.001,有统计学意义.淋巴转移患者组和临床早期患者组与正常女性组比较,P〈0.001.结论淋巴转移和临床早期乳腺癌患者外周血中MnSOD基因表达水平显著低于正常女性,提示MnSOD的低表达与肿瘤的发生和发展有关.应用荧光定量PCR方法检测外周血MnSOD基因水平对监测乳腺癌有一定意义.     

转基因油菜 W-4 fad2基因沉默的种子特异性分析

目的：]研究转基因油菜 W鄄4的种子fad2基因受 RNAi干扰的效果及其器官特异性。[方法]采用实时荧光定量 PCR法分析比较了转基因油菜 W鄄4与非转基因对照 Westar开花后第7、14、21、28天的种子以及越冬期油菜根、茎、叶器官中的 fad2基因的相对表达量。[结果]对照 Westsr种子中 fad2基因的相对表达量随开花后的天数呈逐渐增加的趋势,但W鄄4种子中 fad2基因的相对表达量在开花后第21、28 d较对照 westar显著下降,降幅达到60%。说明转基因油菜 W鄄4在种子发育过程中表达的 fad2基因的 dsRNA干扰了 fad2基因表达。W鄄4与westar在越冬期根、茎、叶器官中fad2基因的相对表达量基本一致,无显著性差异。脂肪酸组成分析结果显示：W鄄4种子中油酸脱饱和指数（ODP）平均为0.07较 Westar的0.24下降了75%;但越冬期根、茎、叶中的油酸脱饱和指数两者无显著差异。研究还发现转基因油菜 fad2基因表达下降的时期与 napin基因表达时期同步,均始于开花后21 d左右。[结论]结果表明转基因油菜中 RNAi干扰 fad2基因表达具有种子特异性,不干扰其它器官的fad2基因表达。表明目标基因的表达受 napin启动子的准确控制。     

PCV2感染猪皮肤源树突状细胞内源性抗原加工提呈相关分子转录水平的变化(英文)

[目的]该研究旨在探讨PCV2感染猪皮肤源树突状细胞内源性抗原加工提呈相关分子转录水平的变化。[方法]用猪圆环病毒2型(PCV2)感染40日龄健康长白仔猪,于感染后3、7、14、21、35天宰杀,收集皮肤源树突状细胞(DCs)。利用实时荧光定量PCR技术对感染仔猪皮肤源DC内源性抗原加工提呈相关分子(LMP7,UBP,MHC-I,calreticulin)mRNA水平的变化进行定量分析。[结果]LMP7转录水平在感染后3天显著下调(P<0.05),UBP转录水平始终上调,其中在21天和35天显著上调(P<0.05),MHC-I转录水平在7天显著下调(P<0.05),calreticulin转录水平虽有所上调,但差异不明显。[结论]以上结果表明,PCV2在感染早期可抑制猪皮肤源DC内源性抗原加工提呈能力。     

转基因油菜 W-4 fad_2基因沉默的种子特异性分析（英文）

目的]研究转基因油菜W-4的种子fad2基因受RNAi干扰的效果及其器官特异性。[方法]采用实时荧光定量PCR法分析比较了转基因油菜W-4与非转基因对照Westar开花后第7、14、21、28天的种子以及越冬期油菜根、茎、叶器官中的fad2基因的相对表达量。[结果]对照Westsr种子中fad2基因的相对表达量随开花后的天数呈逐渐增加的趋势,但W-4种子中fad2基因的相对表达量在开花后第21、28 d较对照westar显著下降,降幅达到60%。说明转基因油菜W-4在种子发育过程中表达的fad2基因的dsRNA干扰了fad2基因表达。W-4与westar在越冬期根、茎、叶器官中fad2基因的相对表达量基本一致,无显著性差异。脂肪酸组成分析结果显示:W-4种子中油酸脱饱和指数(ODP)平均为0.07较Westar的0.24下降了75%;但越冬期根、茎、叶中的油酸脱饱和指数两者无显著差异。研究还发现转基因油菜fad2基因表达下降的时期与napin基因表达时期同步,均始于开花后21 d左右。[结论]结果表明转基因油菜中RNAi干扰fad2基因表达具有种子特异性,不干扰其它器官的fad2基因表达。表明目标基因的表达受napin启动子的准确控制。