一种适用于木本植物RNA提取的方法

木本植物富含酚类、多糖等代谢物质,用普通方法提取RNA时很难将其除去.选取杜仲叶片做材料,通过比较研究Trizol、改良CTAB法和热硼酸盐法三种RNA提取方法,发现改良CTAB法提取效果好且简单易行,单位鲜重材料获得的RNA产量高,电泳条带清晰完整,OD260/OD280=1.84,是一种适于木本植物RNA提取的方法.     

一种简单高效提取棉花不同组织总RNA的方法

目前,虽然已经报道了几种比较有效的提取棉花组织总RNA的方法,但是这些方法往往费时费工,又很难同时适用于棉花不同组织的总RNA提取。以CTAB法为基础进行技术改良,同时结合LiCl沉淀等,总结出了一种简单、快速又普遍适用于棉花各组织总RNA的提取方法。试验证明,此法提取到的RNA纯度高、完整性好,适用于逆转录合成cDNA第一链、RT-PCR分析以及Northern杂交等分子实验。     

大麦不同器官总RNA提取方法研究

[目的]探索出一套较好的大麦总RNA提取方法。[方法]以大麦的叶片、茎秆和子粒为试验材料,探索各器官总RNA提取方法。[结果]所得产物的检验结果表明,总RNA具有整齐且清晰的28S rRNA、18S rRNA条带,A260/A280均介于1.8~2.0。将提取的叶片总RNA反转录成c DNA,RT-PCR检测PCR产物在1 500 bp处。[结论]用此方法提取的大麦各器官总RNA质量较好,纯度较高,完整性较好,可用于进一步的分子生物学研究。     

植物组织RNA的几种提取方法

以白菜叶为试材，用常用的异硫氰酸胍法、尿素法及Tris-硼酸法，比较其提取RNA的质量和纯度。结果表明异硫氰酸胍法提取RNA的质量好、纯度高、提取效率高；尿素法提取RNA成本低、RNA质量也较高；而Tris-硼酸法则较适合于酚类物质含量的材料RNA的提取，其RNA的产率较高。     

地黄RgPR-10基因的克隆与表达

为研究地黄块根的发育机制,通过抑制消减杂交方法从地黄块根中克隆到一个多拷贝、含有完整阅读框编码154个氨基酸的RgPR-10基因(GenBank登录号为EU526395).表达分析发现地黄RgPR-10基因主要在根、茎中表达,尤其是块根中具有较高的表达量.序列分析发现该基因序列与其他物种相似性较低,可能具有不同的功能.为进一步研究该基因在地黄块根发育中的作用,对该基因进行了原核表达,并对融合蛋白进行了初步纯化,电泳检测纯化蛋白具有较高的纯度,可以用于下一步制备抗体和生化功能分析.     

一种适于黄瓜不同组织总RNA提取的方法

在比较了Trizol试剂盒法、异硫氰酸胍法和改良CTAB法用于黄瓜总RNA的提取效果后,表明改良的热CTAB/酸酚法较其他两种方法能更有效地提取黄瓜总RNA,该方法能有效提取黄瓜不同器官,包括根、茎、叶、花、幼嫩果实的总RNA。该方法简单经济,能有效去除黄瓜植株不同部位的多糖和多酚类等次生物质,获得完整的总RNA。经紫外分光光度计分析,A260 nm/A280 nm比值在1.9~2.0之间,提取率在80~100μg/100mg左右。利用该法所提取的总RNA成功地对ACC合酶基因(CS-ACS1)片段进行了反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)。     

不同植物组织RNA提取方法的比较分析

不同的植物组织都有较优化RNA提取方法。本文针对蜡质的红掌叶片、含糖较多的百合花瓣、含色素较多的万寿菊花瓣,使用改良CTAB法、Trizol法、快速RNA提取试剂盒法提取RNA,比较提取效果,以确定适合几种植物组织的最优RNA提取方法。结果表明:改良CTAB法提取的红掌叶片总RNA,Trizol法提取的百合花瓣总RNA和万寿菊总RNA,28SRNA和18SRNA条带都较清晰,且28SRNA亮度较18SRNA明亮,效果较好,部分RNA提取试验中5SRNA也较明亮,说明提取的总RNA有部分降解,但总RNA质量符合后续试验要求。RT-PCR检验符合上述结论。     

一种大量提取猕猴桃不同组织高质量总RNA的方法

在CTAB法的基础上,经过多方面改进,提取了"红阳"猕猴桃7种组织(果实、雄花、雌花、叶片、种子、皮、根)的总RNA。利用琼脂糖凝胶电泳和超微量核酸蛋白测定仪检测了该方法和试剂盒法提取的RNA的完整性、纯度和浓度。结果显示:采用这两种方法提取到的猕猴桃不同组织的总RNA,能检测到18S和28S两条清晰完整的条带,A₂₆₀/A₂₈₀值在1.8～2.0间,A₂₆₀/A₂₃₀值大于2.0。进一步的RT-PCR验证结果表明采用这两种方法提取到的RNA质量较高,均达到了分子生物学实验的要求。因此,本文改良的CTAB法适用于猕猴桃各组织高质量总RNA的大量提取。     

一种大量提取猕猴桃不同组织高质量总RNA的方法

在CTAB法的基础上,经过多方面改进,提取了"红阳"猕猴桃7种组织(果实、雄花、雌花、叶片、种子、皮、根)的总RNA。利用琼脂糖凝胶电泳和超微量核酸蛋白测定仪检测了该方法和试剂盒法提取的RNA的完整性、纯度和浓度。结果显示:采用这两种方法提取到的猕猴桃不同组织的总RNA,能检测到18S和28S两条清晰完整的条带,A_(260)/A_(280)值在1.8～2.0间,A_(260)/A_(230)值大于2.0。进一步的RT-PCR验证结果表明采用这两种方法提取到的RNA质量较高,均达到了分子生物学实验的要求。因此,本文改良的CTAB法适用于猕猴桃各组织高质量总RNA的大量提取。     

非洲菊不同组织总RNA提取

以非洲菊为材料,采用Trizol试剂法、改良的异硫氰酸胍法、CTAB法和尿素—氯化锂法,提取非洲菊的花、花蕾、叶、花梗和根的总RNA。所得RNA经1%琼脂糖凝胶电泳以及紫外分光光度计分析,结果表明Trizol法和改良的异硫氰酸胍法适用于花和根组织,尿素-氯化锂法对花蕾和叶组织RNA有较好的提取效果,而花梗组织RNA最好采用CTAB法。     

甘蔗种质总RNA提取方法的研究

甘蔗是重要的糖料及能源作物之一。甘蔗种质RNA的提取是甘蔗分子生物学研究的前提。本实验是以成熟甘蔗的叶片为材料,通过对前人的植物RNA提取方法进行改良,寻求最佳的甘蔗总RNA提取方法。通过改良最后得到的异硫氰酸胍法Ⅲ具有成本低、操作简单、省时等特点。用该法提取得到的甘蔗总RNA经琼脂糖凝胶电泳可获得28S、18S和5S rRNA3条带,并且28S rRNA的亮度大于18S rRNA的亮度。表明该方法提取的RNA完整性好,纯度高。另外对所得部分甘蔗种质的总RNA进行RT-PCR检测,可特异扩增出目标片段,说明用异硫氰酸胍法Ⅲ提取的甘蔗种质总RNA,可以直接用于后续的分子生物学试验。     

改良热酚法快速提取棉花不同组织RNA

[目的]以改良热酚法快速提取棉花不同组织的RNA。[方法]以陆地棉(Gossypium hirsutum L.)新陆早26为材料,在冷酚法的基础上对RNA的提取方法进行改进。[结果]利用改良热酚法获得的RNA不仅完整性极好、浓度高且无多糖多酚污染,可用于cDNA末端快速扩增(RACE)、Northern Bloting、基因芯片分析及转录组分析等研究。[结论]该方法不但适用于提取棉花叶片总RNA,而且在根、花冠、花药、发育的纤维中均能获得高质量的RNA,同时节约成本,操作简便,对环境污染小。     

一种适于cDNA-AFLP分析的茶树叶片总RNA提取方法

茶树富含多糖、多酚,从茶树组织中提取高质量的RNA较为困难,cDNA-AFLP技术对RNA质量要求较高,因而从茶树叶片中提取高质量的RNA是cDNA-AFLP试验正常进行的重要保障。该试验采用改进的CTAB法从茶树叶片中提取总RNA,结果表明:琼脂糖凝胶电泳显示28S、18S、5S 3条带清晰,完整性好,产率高;A260/A280值为2.07,范围为1.8~2.1,DNA和蛋白质污染较少;经逆转录、双链cDNA合成和cDNA-AFLP检测,证实提取的RNA能满足cDNA-AFLP技术对RNA质量和数量的要求。该方法为应用cDNA-AFLP技术顺利开展茶树分子生物学方面的研究奠定了基础,处理方式简单且成本较低。     

人参根组织RNA提取方法的研究与优化

针对人参根组织中多酚和多糖类物质含量较高的特点,比较了CTAB-LiCl法、pBIOZOL植物提取试剂法、植物RNAout法和优化的Trizol法4种RNA分离提取方法。结果表明:4种方法均能从新鲜的多年生人参根组织中分离提取到总RNA。其中优化的Trizol法能有效地抑制多酚和多糖对总RNA提取的影响,能从成熟的根组织中获得完整性好的总RNA,每克人参根组织RNA产量为100～120μg,OD260/OD280为1.8～2.0,OD260/OD230为2.0～2.3。     

植物组织双向电泳样品制备方法研究进展

摘要：双向电泳是目前应用最广泛的蛋白分离技术,该技术的核心是蛋白样品的制备。植物组织中通常含有大量蛋白酶和次生代谢物,这严重干扰蛋白提取、分离和鉴定。从植物组织中提取高质量的蛋白样品用于蛋白组分析充满挑战,本文简要阐述了植物组织蛋白提取的关键点,特别是植物组织中的次生代谢物及去除方案。此外,本文还对三种植物蛋白提取方法、三种方法的优缺点及适用植物组织作了概述。     

一种提取菊科植物各组织中总RNA的改良方法

以入侵菊科植物微甘菊(Mikaania micrantha Kunth)、紫茎泽兰(Eupatorium adenophorum Spreng)、豚草(Ambrosia artemisiifolia Linn)、飞机草(Eupatorium odoratum Linn)、假苍耳(Iva xanthifolia Nutt)的根、茎、叶及花蕾为试验材料,采用改良的盐酸胍法提取总RNA,通过紫外分光光度计测定RNA样品的得率和纯度,用琼脂糖电泳检测RNA样品的质量和完整性。结果表明:采用新方法提取的总RNA,其OD260nm/OD280nm值为1.8~2.0,且RNA得率较高;琼脂糖电泳出现18S和28S 2条清晰的rRNA条带,而且28S rRNA条带的亮度约为18S的2倍。采用改良的盐酸胍法可以从不同植物组织中提取到高质量、完整性好总RNA。     

适于葡萄不同组织RNA提取方法的筛选

比较了CTAB法、改良CTAB法、Trizol法、SDS-苯酚法和改良SDS法5种RNA提取方法提取葡萄叶片、花序、茎尖、卷须和果实组织RNA的效果。并进一步从总RNA中分离出了高质量的低分子量RNA(LMWRNA),建立了葡萄LMWRNA提取的方法。改进后的改良SDS法能够克服果实中RNA提取难度大的问题,能够从果实中提取到质量和产量都很高的RNA。结果表明,改良SDS法适用于葡萄叶片、花序、茎尖、卷须组织中总RNA的提取,改进的改良SDS法是从果实中提得LMWRNA较佳选择。在总RNA提取的基础上建立的葡萄LMWRNA提取方法能够达到研究的要求。     

一种直接用于PCR的土壤微生物DNA提取方法

以橡胶林土壤为材料,直接提取土壤微生物DNA。本实验介绍的方法不仅可以获得大片段,并且不需要纯化即可直接用于PCR扩增和DNA酶切等后续操作,每克土壤DNA提取量约为2.1～4.6μg。此方法操作简单、快捷、为土壤宏基因组文库的构建和土壤微生物群落结构的多样性分析提供基础。     

几种植物组织总RNA提取方法的特点及疑难对策

植物组织总RNA的提取方法较多,在提取过程中会遇到酚类物质、多糖和蛋白质的干扰及外源RNase污染等问题,笔者对几种植物组织总RNA提取方法的特点、提取过程遇到的问题及解决问题的对策进行了简要介绍。