大豆基因组DNA提取纯化方法研究

[目的]通过逐步富集的方法,提高大豆DNA的纯度和质量,为其他动植物基因组DNA的提取纯化提供参考。[方法]以梅桥大豆为试验材料,在CTAB法提取大豆基因组DNA的基础上,对大豆基因组DNA进行了纯化,对纯化后的DNA进行了光密度、紫外光谱、琼脂糖电泳和RAPD-PCR等的检测。[结果]光密度和紫外光谱检测表明A260/A230介于1.678~1.722,平均为1.697,A260/A280介于1.733~2.022,平均为1.844;琼脂糖电泳检测证实DNA分子量较大、完整性好、RNA残留少;RAPD-PCR检测得到了谱带清晰、多态性丰富的电泳谱带。DNA的得率为66.969μg/g。该试验的研究方法具有DNA质量高、操作简便、试验条件要求不高的特点。[结论]该方法可以应用于其它动植物的DNA提取纯化。     

平菇基因组DNA的提取及RAPD体系的优化

应用SDS与β-SH乙醇结合的方法对平菇菌丝体、原基、菇蕾和成熟子实体4种材料的基因组DNA进行了提取,并对影响RAPD反应的各因素进行了优化,20 μL反应体系中,模板加入量为6～10 ng,引物加入量10 pmol,dNTPs(各2.5 mmol)加入量为1.5～2 μL,Taq酶加入量为0.5U,退火温度设置在略低于引物Tm值的范围.     

凉粉草基因组DNA提取与分析

[目的]为分子生物学研究提供高质量、高产量的凉粉草总DNA。[方法]采用改良CTAB法提取总DNA,通过测定OD260/OD280值、琼脂糖凝胶电泳和RAPD扩增对所得DNA的浓度和质量进行检测,考察该方法对DNA的提取效果。[结果]改良CTAB法提取的总DNAOD260/OD280值为1.6～2.0;电泳条带清晰,完整性好,纯度高,总DNA分子量与λDNA相近;以所提DNA为模板进行RAPD扩增时,可得到稳定的扩增条带。[结论]改良CTAB法适合凉粉草基因组DNA的提取。     

狗牙根基因组DNA提取方法的比较

以狗牙根的嫩叶为材料,在传统CTAB法的基础上加以改良,建立了狗牙根基因组DNA的CTAB提取方法.得到的DNA经核酸蛋白质分析仪测得A_(260)/A_(280)值处于1.69～2.02之间、A_(260)/A_(230)集中处于1.82～2.08之间,经琼脂糖凝胶电泳检测各样品具有一条明亮主带并无拖尾现象,经ISSR-PCR检测出现清晰稳定的条带,说明改良CTAB法提取得到的DNA完整性好,纯度高,适用于分子标记等分子生物学的研究.     

刺参基因组DNA的提取及RAPD条件的优化

以野生刺参为试验材料,探索了刺参基因组的提取方法,并对影响RAPD反应的各因素进行了优化,建立了刺参的优化反应体系和程序.反应体系总体积为25μL,各组分的含量为10倍缓冲液2.5μL,Mg2 (20 mmol·L-1)3μL,TaqDNA聚合酶(1 U·μL-1)1.5μL,dNTPs(10 mmol·L-1)2.5μL,随机引物(5pmol·μL-1)1μL,模板DNA(40 ng·μL-1)2.5μL.PCR循环程序为96℃预变性5 min;94℃变性0.5 min,36℃退火1 min,72℃延伸1 min,35个循环;最后72℃延伸10 min.     

丝瓜DNA的提取与质量鉴定

探讨了基于CTAB法的丝瓜基因组总DNA提取过程中有关的技术环节及改进方法,并用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度检测和ISSR分子标记的方法进行鉴定、比较.结果表明:在2%CTAB提取液中加入β-巯基乙醇、PVP等,可提高DNA的纯度;提取的DNA完整性较好,无RNA污染,酚类、色素和蛋白质等杂质都已基本除尽,可用于ISSR等分子标记.     

藏獒基因组DNA提取及RAPD扩增体系的优化

采用改进的盐析法提取了藏獒血液基因组DNA,并对RAPD扩增体系进行了优化。结果表明,改进的盐析法所提取的藏獒基因组DNA完整、无降解,完全可以满足RAPD分析的需要;20μL的最佳扩增体系组成为2.50 mmol/L Mg2+、0.60 mmol/L dNTP、50 ng模板DNA、1.25U Taq酶和0.3μmol/L随机引物,最佳退火温度为36.5℃。     

4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法比较

[目的]对4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法进行比较研究,建立滑叶铁线莲最适DNA提取方法。[方法]以滑叶铁线莲叶片为材料,比较改良CTAB法I、改良CTAB法Ⅱ、改良CTAB法Ⅲ、改良SDS法这4种基因组DNA提取法在提取DNA纯度、浓度和提取时间等方面的不同。[结果]4种方法都可提取滑叶铁线莲基因组DNA。改良CTAB法I提取DNA纯度最高,但浓度最低且提取时间最长;改良SDS法提取DNA浓度最高,所需时间较短,但纯度较低;改良CTAB法Ⅲ提取所需时间最短。[结论]建立了铁线莲最适DNA提取方法,为运用分子生物学手段对其研究提供支持。     

海洋贝类基因组DNA的提取改进及ITS2扩增

目前已报道的常见的基因组DNA提取方法有经典酚醇法、盐析法、碘化钾法、煮沸法等,其中酚醇法根据其裂解液的不同又有CTAB、SDS、ROSE等具体方法,本试验对经典的CTAB法进行了改进,从酒精保存的西施舌组织中提取得到质量高的基因组DNA,以此为模板扩增ITS2效果很好。     

一种新的梨基因组DNA提取方法及其应用

摸索出一种新的DNA提取方法--CTAB改良法,从梨成熟叶片中提取到高质量、高纯度的DNA.同时,分析了模板DNA和dNTPs浓度、TaqDNA聚合酶用量等对RAPD反应体系的影响,建立了一套适合梨基因组RAPD分析的技术体系.     

一种广泛适用于植物基因组DNA提取的方法

[目的]研究植物基因组DNA提取方法,为从植物组织中快速提取基因组DNA提供指导。[方法]在已发表的植物基因组DNA提取方法基础上,对SDS提取法的操作步骤、试剂用量及作用时间进行了优化。[结果]初步建立了一种广泛适用于各类植物及植物多种组织器官的基因组DNA提取方法。所提取的基因组DNA质量较好,满足下一步操作的要求。[结论]该研究结果为植物基因组DNA的快速提取提供了指导方法。     

16份黄秋葵种质的ISSR分析

对Owayadei（Abelmoschus esculentus L.）、Ladies finger（Abelmoschus esculentus L.）、golder kost（Abelmoschus esculentus L）、Esoyarido（Abelmoschus esculentus L.）等16份国外黄秋葵栽培种质进行ISSR分析,结果表明,选用14条引物扩增出162个DNA片段,平均每个引物可扩增出11.6条片段,其中多态性片段102个,占扩增总片段的62.96%。利用扩增结果进行遗传距离分析,构建了分子树状图,可以把16份材料划分为4个类群。     

茉莉花基因组DNA的提取

以茉莉花的嫩叶和花蕾作为实验材料,采用改良后的CTAB提取法提取DNA,经紫外分析仪和琼脂糖电泳检测所提取的DNA浓度和纯度,发现提取的DNA质量好、浓度高,且用花蕾提取的效果比嫩叶更好。     

枳壳基因组DNA提取方法的比较研究

以枳壳(酸橙)叶片为试验材料,采用改良CTAB法、CTAB-硅珠法、SDS法、高盐低pH法和周世良法5种方法提取枳壳基因组DNA,并通过紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳及SSR-PCR扩增3种检测方法比较DNA的提取效果,以期找到枳壳DNA的最佳提取方法.结果表明,5种方法中SDS法提取的DNA浓度最高(平均为900ng/μl),纯度最好(OD260/OD280平均值为1.90),且以SDS法提取的DNA为模板进行SSR-PCR扩增检测,目的条带清晰、亮度均一、稳定性和重复性好.因此,SDS法是枳壳DNA最佳提取方法,可用于分子检测试验.     

高质量加工番茄基因组DNA提取方法的改进

加工番茄在生长过程中会富积大量的多糖、蛋白质和其他次生代谢物质,采用文献报道的方法不易提取(高质量的)DNA或提取的DNA溶液容易降解.采用改进的CTAB法,提取加工番茄幼嫩叶片和老叶片的基因组DNA,经紫外分光光度计和凝胶电泳检验,提取到的DNA纯度高、完整性好,PCR扩增能得到明显的多态性谱带,可直接用于后续相关试...     

茶树基因组DNA的高效提取方法

为了从富含多酚和多糖等多种次生代谢物质的茶树叶片中分离出高质量的基因组DNA，对4种植物DNA提取方法进行改良后，以茶树春梢为材料，对提取效果进行了比较，并首次采用CTAB区室法提取茶树基因组DNA。结果表明，用该4种方法提取的DNA，其OD260／OD280都在1．8以上，相对分子质量均大于21kb，能完全被EcoRI酶切消化，也能获得清晰的PCR扩增图谱。因此，只要操作合理，4种方法均能提取出高质量的DNA。     

黄秋葵果荚中多糖的提取及其累积规律

以台湾品种‘五福’黄秋葵为材料,采用热水浸提法提取多糖,同时在黄秋葵果实成熟过程对果荚中多糖含量进行测定比较。试验结果表明:黄秋葵中多糖得率为7.12%;黄秋葵果荚中多糖含量先随黄秋葵的发育成熟过程呈累积增加趋势,到第8d达到最大值,之后,随着果荚的老化,其中多糖却随之逐渐减少。     

亚麻全基因组DNA的提取及分析

应用改良过的CTAB法提取亚麻基因组DNA,并对其进行了紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳分析.结果表明:得到的DNA结构较完整,杂质较少,浓度较高,可不经纯化直接用于进一步PCR和酶切等分子生物学研究,同时探讨了亚麻DNA提取过程中的一些技巧及注意事项.     

冷季型草坪草基因组DNA的提取方法比较

采用SDS法、热CTAB法、高盐低pH法和改进CTAB法分别提取高羊茅(Festuca arundinoceaSchreb.)、草地早熟禾(Poa pratensis L.)和多年生黑麦草(Lolium perenne L.)3种冷季型草坪草基因组DNA.结果表明,改进CTAB法为最佳的提取方法,分离的DNA产率高、纯度高、质量高,经纯化后电泳检测带型清晰.RAPD扩增显示,用该快速、简便、有效的方法提取的基因组DNA能扩增出清晰易辨的带型.     

棕榈科植物DNA的提取及SRAP引物筛选

采用CTAB法提取棕榈科植物基因组DNA,选用4个棕榈科植物DNA作模板,对100个SRAP引物组合进行筛选,以条带清晰多态性丰富为引物筛选原则,最后共筛选出14个组合作为棕榈科植物SRAP分子标记的核心引物,为后续SRAP分析提供依据。同时还对SRAP-PCR扩增程序进行优化,在不影响扩增效果的前提下,节约了大量实验时间。