濒危兰科植物DNA的提取方法

濒危兰科植物组织富含多糖和多酚类物质,提取高质量的DNA较困难。为优化濒危兰科植物基因组DNA提取方法,采用改良CTAB法、改良SDS法和试剂盒法对多种濒危兰科植物基因组DNA进行提取,对获得的DNA质量、浓度和纯度进行比较。结果表明,用改良CTAB法和试剂盒法可有效去除多糖类和多酚类物质的干扰,DNA提取效果较理想,改良SDS法较差;CTAB法获得的DNA浓度高于试剂盒法,且后续PCR扩增效果也优于试剂盒法。     

天冬药材基因组DNA提取方法研究

[目的]从天冬药材中提取可用于RAPD扩增的高质量基因组DNA。[方法]分别采用改良CTAB法、SDS法以及植物基因组DNA提取试剂盒法提取天冬药材基因组DNA;通过电泳、DNA浓度与纯度检测以及RAPD扩增效果确定天冬药材基因组DNA的最佳提取方法。[结果]CTAB法提取的基因组DNA较完整,DNA浓度与纯度均较高,可获得丰富的、清晰的RAPD条带。[结论]CTAB法为天冬药材基因组DNA提取的最佳方法,提取的DNA可用于天冬RAPD分析,该方法可为其他药材基因组DNA提取提供参考。     

苦瓜基因组DNA提取和RAPD分析

采用4种CTAB法和改良SDS法对苦瓜的基因组DNA进行了提取，结果表明，改良SDS法提取的DAN质量较差，主要表现在多糖类物质去除不彻底；4种CTAB法都适合苦瓜DNA的提取，提取的DNA均适于RAPD分析，尤以改良CTAB法最为简单，快速。     

不同种质荔枝基因组DNA提取研究

针对荔枝体细胞富含多酚、多糖、色素以及蛋白质等次生物质的特点,以荔枝叶片为材料,分别采用CTAB法和SDS法对荔枝野生、半野生和栽培种质的基因组DNA进行提取。结果表明,SDS法提取的荔枝基因组DNA效果稳定,获得DNA的机率为100％,DNA纯度高、质量好,可用于AFLP酶切、连接、预扩增和选择性扩增,并获得清晰、稳定的扩增产物;CTAB法提取的荔枝基因组DNA效果不稳定,DNA浓度较低,易出现多糖等次生物质与DNA共沉淀现象,无法检测出DNA。因此,SDS法可用于不同荔枝种质基因组DNA的提取,进行AFTJP、SSR、ISSR分析。     

一种适于甜菜RAPD分析的DNA快速提取方法

实验用CTAB法、SDS法Ⅰ及SDS法Ⅱ提取甜菜叶片DNA.利用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳检测所得DNA的浓度和纯度.实验表明,CTAB法所提取甜菜总DNA的纯度高,能满足RAPD扩增,条带清晰、稳定.CTAB法是作为甜菜RAPD分子标记研究的最佳DNA提取方案.     

凉粉草基因组DNA提取与分析

[目的]为分子生物学研究提供高质量、高产量的凉粉草总DNA。[方法]采用改良CTAB法提取总DNA,通过测定OD260/OD280值、琼脂糖凝胶电泳和RAPD扩增对所得DNA的浓度和质量进行检测,考察该方法对DNA的提取效果。[结果]改良CTAB法提取的总DNAOD260/OD280值为1.6～2.0;电泳条带清晰,完整性好,纯度高,总DNA分子量与λDNA相近;以所提DNA为模板进行RAPD扩增时,可得到稳定的扩增条带。[结论]改良CTAB法适合凉粉草基因组DNA的提取。     

蒙古黄芪总DNA提取方法的改进研究

[目的]改进蒙古黄芪（Astragalus membranaceus var.mongholicus）总DNA的CTAB提取法。[方法]以蒙古黄芪为试验材料,通过提取试验研究了利用改进CTAB法从植物组织中提取总DNA的效果。[结果]提取DNA的凝胶电泳图谱上呈现出清晰、整齐的条带且拖带较少,说明所提DNA的纯度较高,质量较好。利用改进CTAB法提取的DNA进行trnS-trnG扩增的产量高,说明提取的DNA可用于测序等后续分析。用提取的基因组DNA为模板,用多对特异性ISSR引物对其进行PCR扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱表明各基因组DNA均扩增出多态性谱带,且带型清晰,易区分,说明利用提取的基因组DNA进行ISSR分子标记检测的效果良好。[结论]改进CTAB法可有效消除次生物质对DNA的干扰,提取的基因组DNA可用于叶绿体trnS-trnG测序分析和ISSR分子标记分析。     

5种金边瑞香基因组DNA提取方法比较研究

[目的]研究不同提取方法对金边瑞香基因组DNA提取质量的影响,筛选最佳提取方法。[方法]以金边瑞香叶片为试材,以SDS法、改良CTAB法、SDS-CTAB法、高盐低pH法和尿素法5种方法提取基因组DNA,并从DNA纯度、浓度、酶切电泳结果和ISSR-PCR扩增产物电泳等方面进行比较分析。[结果]高盐低pH法和尿素法提取的金边瑞香基因组DNA富含蛋白质和多糖等杂质,DNA纯度低;SDS法提取的基因组DNA含有一些酚类物质和盐等杂质,DNA纯度较低;改良CTAB法提取的基因组DNA纯度较高,但浓度和产率低。SDS-CTAB法提取的基因组DNA纯度、浓度和产率最高,酶切和ISSR-PCR产物电泳检测效果最好。[结论]SDS-CTAB法提取的金边瑞香基因组DNA质量与产量最佳,可以满足后续分子生物学研究的需求。     

稻飞虱基因组DNA提取方法的比较

 以褐飞虱（Nilaparvata lugens Stal）为材料,分别采用SDS法,CTAB法,冰KAc法和饱和NaCl法提取褐飞虱的基因组DNA。通过电泳、紫外光谱分析和ISSR-PCR扩增等检测手段,比较分析了DNA数量与质量。结果表明： CTAB法和SDS法提取的DNA质量明显优于冰KAc法和饱和NaCl法,适于PCR扩增。并且SDS法提取的DNA经过PCR扩增后得到较多的多态性位点。因此,SDS法是实验室提取稻飞虱基因组有效,经济实用的方法。     

一种高效提取虎耳草科植物基因组DNA的方法

[目的]探索从虎耳草科植物中提取DNA的有效方法。[方法]采用改进的CTAB法,从11种虎耳草科植物中提取DNA。以提取的DNA为模板,利用通用引物"psbAF"和"trnHR"对虎耳草科植物叶绿体DNApsbA-trnH片段进行PCR扩增。[结果]通过该方法提取的DNA纯度较高,质量较好。用所得DNA进行psbA-trnH扩增的产量高,可用于后续的测序等分析。对山地虎耳草的PCR产物纯化后进行测序,得到262 bp的序列。将其与GenBank中的虎耳草属其他植物的psbA-trnH序列进行比对分析,证实该序列为目标psbA-trnH片段的区域。[结论]该方法可有效去除次生物质对DNA的干扰,提取的基因组DNA可用于叶绿体psbA-trnH测序分析和其他遗传学分析。     

侵染广东黄秋葵的木尔坦棉花曲叶病毒及伴随卫星DNA的分子特征

从广东省表现黄脉曲叶的黄秋葵病株上分离到病毒分离物Okra06,PCR检测结果显示,该病毒属双生病毒科Geminiviridae菜豆金色花叶病毒属Begomovirus.基因克隆及序列分析结果表明,其基因组仅含A组分(DNA-A),全长为2 737 nt,推导编码6个开放阅读框(Open reading frame,ORF).该组分与木尔坦棉花曲叶病毒(Cotton leafcurl Multan virus,CLCuMV)分离物G6的核苷酸序列相似性最高,为99.7%;二者编码的6个ORF相似性分别为100%、100%、99.6%、99.8%、100%和99.7%.该病毒还伴随有卫星分子β(DNAβ),全长为1 346 nt,推导其互补链上编码1个ORF(C1).该分子与伴随CLCuMV分离物G6 DNAβ的核苷酸序列相似性也最高(99.5%).DNAβ系统进化分析显示,Okra06 DNAβ与CLCuMV-[G6]DNAβ、CLCuMV-[Gx08]DNAβ亲缘关系最近,三者形成一个独立分支;进一步与其他CLCuMV DNAβ和CLCuV DNAβ聚类在一起.这些结果证明,侵染广东黄秋葵的病毒分离物Okra06属于CLCuMV,且该分离物与引起广东朱槿曲叶病的CLCuMV-G6应同属木尔坦棉花曲叶病毒朱槿株系.     

中国榛属植物SSR反应体系的建立

榛子鲜叶组织中富含酚类、糖类及其他次生代谢物,致使鲜叶易发生褐变,从而严重影响基因组DNA的提取质量。为了探讨适合中国榛属植物基因组DNA的提取方法,建立SSR反应体系,以榛属植物叶片为材料,通过对CTAB法的改良,摸索出了适于中国榛属植物基因组DNA提取的方法,并以核酸产量、纯度、片断分布情况等指标来评价基因组的质量。结果表明,获得的基因组质量较高,能够满足SSR反应体系的建立。并对影响榛属基因组DNA提取的因素进行了简要的分析讨论。     

适于AFLP分析用的桃韧皮部DNA提取方法

[目的]研究适于AFLP分析用的桃韧皮部DNA提取方法,为冬季无法获得幼叶和其他幼嫩材料时从事桃基因组研究打下了基础。[方法]以8种野生桃冬季1年生休眠枝的韧皮部为试验材料,采用改进的CTAB法提取基因组总DNA,与其相应幼叶DNA的提取效果进行了比较分析,并进行了AFLP验证分析。[结果]从野生桃韧皮部提取的DNA除产量低于幼叶外,DNA纯度和完整性都较好,OD260/OD280均为1.8~2.0,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化,其AFLP分析条带清晰,多态性好。[结论]该法提取的野生桃韧皮部基因组总DNA完全适于AFLP分析。     

一种快速提取鸭基因组DNA的方法

建立了一种快速提取鸭基因组DNA的方法。该法操作简单,在减少污染的同时还节约成本,且其所提取的基因组DNA完整性好,未出现多糖、蛋白质残留,可以用于PCR、酶切等分子生物学操作。     

鸡血藤DNA提取方法的研究

[目的]筛选一种适合鸡血藤DNA的提取方法。[方法]以鸡血藤嫩叶为材料,分别采用液氮-CTAB法、石英砂-CTAB法以及石英砂-SDS法提取基因组DNA,利用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测提取的DNA样品,对提取方法进行比较筛选。[结果]电泳检测中,石英砂-CTAB法所提DNA条带亮度最高,质量较好。紫外检测中,石英砂-CTAB法提取的DNA A260/A280值大于1.8,比其他两种方法提取的DNA蛋白质污染小,其提取的DNA纯度和得率均最高,液氮-CTAB法提取DNA得率居中,石英砂-SDS法提取DNA得率较低。[结论]该研究结果表明石英砂比液氮更能简便快速地将叶片研碎,CTAB提取缓冲液比SDS提取缓冲液可更有效地去除杂质,使细胞裂解、DNA析出。因此,石英砂-CTAB法更适合鸡血藤DNA的提取。     

Noni基因组DNA提取及RAPD分析

针对Noni含有大量的多糖、多酚等次生代谢物设计其DNA的提取方法,得到的Noni基因组DNA纯度高、完整性好。对5个Noni品种进行RAPD分析,结果表明,国外品种(库克、泰国、马来西亚)和国内品种(西沙、三亚)各聚为一类。     

核果类果树基因组DNA提取方法的研究

以核果类果树油桃、扁桃、杏、山桃、榆叶梅和樱桃的幼叶为试材,进行了基因组DNA的提取方法的比较研究,其中改良SDS法效果最好;采用改良SDS法提取油桃的幼叶、花蕾和韧皮部基因组DNA的效果表明,三者均可以作为基因组DNA提取的材料,且以幼叶效果最理想;采用改良的SDS法可在自然阴干的扁桃和油桃叶片中提取到完整的DNA;将改良SDS法提取的油桃不同部位和自然阴干的扁桃和油桃叶片基因组DNA,经SSR-PCR检测发现,扩增效果清晰稳定,完全可以应用于果树分子生物学研究.     

不同方法提取大豆基因组DNA的效果比较

[目的]采用不同方法对大豆基因组DNA进行提取,为大豆基因组DNA的提取提供参考。[方法]采用CTAB法、SDS法和高盐低pH值法对大豆基因组DNA进行提取,对提取的DNA进行光密度、紫外光谱、琼脂糖凝胶电泳和DNA限制性内切酶图谱等的检测。[结果]光密度和光谱检测结果表明,SDS法的提取量和纯度均优于CTAB法和高盐低pH值法;琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,SDS法提取的基因组DNA谱带较CTAB法和高盐低pH值法提取的基因DNA谱带粗、亮、重复性好;限制性内切酶检测结果表明,3种方法所得基因组DNA均能被胁谢Ⅲ和EcoRI酶切,但SDS法所得基因组DNA的酶切效果最好。l结论ISDS法的提取效果明显优于CTAB法和高盐低pH值法。     

农杆菌介导花生的遗传转化研究Ⅱ.花生基因组DNA提取方法的改良与鉴定

针对花生基因组DNA常规提取方法的不足,对提取程序进行改良.改良后的方法具有简便、快速、安全、得率高等特点,对所鉴定植株生长影响相对较小,所提取DNA可直接用于PCR、限制性酶切等分子生物学试验.     

病毒外壳蛋白基因在马铃薯基因组中的整合与转录表达

以表达马铃薯卷叶病毒（ＰＬＲＶ）外壳蛋白（ＣＰ）基因的转基因马铃薯植株为供试材料,在接种病毒后续发感染条件下提取转基因植株ＤＮＡ和ＲＮＡ,用克隆的病毒ＣＰ基因ｃＤＮＡ为探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析,结果表明,外源ＣＰ基因稳定整合于马铃薯基因组内,并在转录水平上高效表达．