清热中药对大鼠肺及其微血管内皮细胞磷酸二酯酶活性的影响

采用组织贴块法培养分离大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC),以高效液相色谱(HPLC)检测环核苷酸(cAMP)在酶反应前后磷酸二酯酶(PDE)的变化计算PDE活性,并分析药物对其影响,为研究PMVEC特异性PDE抑制剂和清热药作用机理积累资料。结果显示:分离培养经CD31鉴定的PMVEC,其酶量在5~20μL范围内与PDE活性存在良好的线性关系(r=0.9929);17味入肺经清热药均对肺组织cAMP-PDE酶活性有不同程度的抑制作用,其中黄芩、黄药子、青蒿抑制率较高,对肺组织酶分别为:75.37%,72%,61.26%,对PMVEC分别为:66.1%,63.54%,59.39%,结果提示以cAMP-PDE活性为指标,有望筛选出其特异性PDE抑制剂,并揭示入肺经清热药的作用机制。     

中草药对磷酸二酯酶4活性影响的初步研究

以对磷酸二酯酶4(PDE4)活性的影响为指标,筛选PDE4选择性中草药调节剂,为中兽医药理学研究和临床调节环核苷酸水平提供依据。以cAMP为底物,加入由猪嗜中性粒细胞中提取的PDE4与中草药样品, 用HPLC法检测反应后的cAMP含量,计算中草药对酶活性的影响,正数为抑制作用,负数为促进作用。54味中草药里,对PDE4活性具有抑制作用的有38味,具有促进作用的有16味。部分所选中草药对PDE4活性具有较强的抑制作用,部分具有较强的促进作用,提示从中草药里筛选特异性PDE4活性调节剂是可行的。     

大鼠脑微血管内皮细胞的体外培养及鉴定

探讨大鼠脑微血管内皮细胞的体外培养方法,为研究猪链球菌引起脑膜炎的致病机理打下基础.采用脑组织匀浆、二次过筛及酶消化技术分离大鼠脑微血管段,对分离的脑微血管内皮细胞进行了体外培养、形态学观察、免疫荧光鉴定及生长曲线的MTT法测定.结果表明:倒置显微镜下,细胞具有单层"铺路石样"排列的典型特征,免疫荧光检测第Ⅷ因子相关抗原呈阳性,成功建立了大鼠脑微血管内皮细胞的体外培养方法.     

中药有效成分诱导肺微血管内皮细胞表达IFN-γ的研究

以体外培养的RPMVECs(rat pul monary microvascular endothelial cells,RPMVECs)为模型,采用双夹心ELISA法和MTT法,研究了绿原酸、连翘酯苷、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素诱导RPMVECs表达IFN-γ(inferteron-γ)的影响以及对PMVECs的毒性。ELISA检测结果表明,加入质量浓度为5,10,20,50,100μg/mL的5种中药成分刺激细胞16 h后,在培养细胞上清液内均能检测到IFN-γ,其中绿原酸、黄芩素组IFN-γ的表达量随药物浓度增大而减少;连翘酯苷组IFN-γ的表达量均较多;黄芩苷、汉黄芩素组均在10μg/mL时IFN-γ的表达量达到峰值,随后IFN-γ的表达量随浓度增大而减少。MTT检测结果显示,各浓度的黄芩苷、黄芩素对PMVECs均有一定程度的抑制作用,而连翘酯苷对PMVECs均有增殖作用,绿原酸、汉黄芩素的细胞毒性则随药物浓度而发生变化。     

大鼠心肌膜、肺、肠黏膜微血管内皮细胞静息膜电位的检测

比较大鼠心肌膜、肺、肠黏膜微血管内皮细胞静息膜电位,为内皮细胞电生理特性研究提供数据。用植块法培养大鼠心肌膜、肺、肠黏膜微血管内皮细胞,采用膜片钳放大器全细胞记录模式,分别测定3种细胞的静息膜电位。结果表明:心肌膜微血管内皮细胞的静息膜电位为(-24±4)mV;肺微血管内皮细胞的静息膜电位为(-27±6)mV;肠黏膜微血管内皮细胞静息膜电位为(-18±4)mV。3种不同组织来源的微血管内皮细胞在静息膜电位上存在异质性。     

猪中性粒细胞磷酸二酯酶基因表达及活性研究

 【目的】通过对猪中性粒细胞磷酸二酯酶（PDE）基因表达、活性及特异性抑制剂实验检测，研究其存在的主要PDE亚型及在体外的活性，为探讨PDE在中性粒细胞的分布、活性变化及对cAMP、cGMP调节与中性粒细胞功能关系提供依据。【方法】采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测PDE基因在猪中性粒细胞的表达，以高效液相色谱（HPLC）检测环核苷酸在PDE反应前后的含量变化，计算PDE活性。【结果】在检测的18个PDE亚型中，PDE1B、2A、3A、3B、4A、4B、4C、4D、5A、7A、7B、8A、8B、9A、11A 共15个PDE mRNA在猪中性粒细胞表达，特异性抑制剂实验表明PDE4、PDE5分别为水解cAMP、cGMP的主要PDE亚型；cAMP/cGMP-PDE在10～40 μl范围内，与其活性存在良好的线性关系（r＝0.9929/0.9992）。【结论】猪中性粒细胞至少存在15个PDE亚型，其中PDE4、PDE5为主要存在的2个亚型，PDE样品量在一定范围内与其活性存在良好的线性关系，可作为筛选PDE型中性粒细胞功能调节剂的方法。     

LPS和LT对体外大鼠肠粘膜微血管内皮细胞的影响

将大鼠肠粘膜微血管内皮细胞分为空白对照组、BSA对照组、LPS1组、LPS2组、LT 1组和LT 2组6个组,分别用维持培养液,含50μg/mL BSA、1或10μg/mL LPS、10或50μg/mL LT的培养液静置培养12 h,研究不同浓度LPS和LT对体外大鼠肠粘膜微血管内皮细胞形态及NO分泌量的影响,并确定LPS和LT致大鼠肠粘膜微血管内皮细胞损伤的模型剂量。结果表明,LPS可使细胞长宽比增大,间隙变宽,而LT可使细胞肿大,排列紊乱;各浓度的LPS和LT均能引起肠粘膜微血管内皮细胞的NO分泌量升高,但1μg/mL LPS与50μg/mL LT的作用更明显;LPS和LT致大鼠肠粘膜微血管内皮细胞损伤的模型剂量分别是1和50μg/mL。     

黄芪多糖对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO的影响

笔者探讨黄芪多糖对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO的影响,结果表明:采用硝酸还原酶法黄芪多糖(900μg/mL)组细胞分泌NO量在1 h和3 h时极显著高于对照组(P<0.01),在6 h显著高于对照组细胞(P<0.05);黄芪多糖(450μg/mL)组细胞分泌NO量在1 h和6 h时显著高于对照组(P<0.05),在3 h与对照组差异不显著(P>0.05)。黄芪多糖可引起大鼠肠黏膜微血管内皮细胞NO分泌量的升高。     

猪嗜中性粒细胞cAMP磷酸二酯酶的提取与活性检测

目的:提取动物体的cAMP磷酸二酯酶(PDE),并检测其活性,为兽医临床研究PDE活性的生理病理变化和中西药物对PDE活性调节作用建立实验方法。方法:猪血经过葡聚糖沉降,淋巴细胞分离液分离,特殊分离液洗涤和红细胞溶胀后,获得嗜中性白细胞。嗜中性白细胞破碎后释放PDE,通过反相高效液相色谱(RP HPLC)法测定反应体系中cAMP的含量,根据底物(cAMP)的减少量,确定嗜中性白细胞中PDE活性。结果:经显微镜计数嗜中性粒细胞纯度达95%;酶量在10～40μl间对cAMP的分解率为9 90%～31 39%,与PDE活性之间存在直线相关关系(r=0 99)。结论:猪嗜中性粒细胞中含有高纯度、高活性的cAMP PDE;高效液相色谱法可以准确测定PDE反应前后cAMP含量的变化;两种方法结合可以作为兽医临床研究机体PDE活性变化和中西药物对PDE活性调节作用的新方法。     

胡黄连与牛蒡子有效成分对猪磷酸二酯酶7A2活性的影响

从牛蒡子、胡黄连中筛选对猪磷酸二酯酶（PDE） 7A2具有抑制作用的中药单体成分,为PDE亚型抑制剂研究积累资料.使用高效液相色谱法（HPLC）测定绿原酸、牛蒡子苷、β-谷甾醇和胡黄连苷-Ⅱ对体外原核表达的猪PDE7A2的抑制作用.结果表明：在反应质量浓度为1,5,10,50,100 μmol/L时,绿原酸对猪PDE7A2的活性抑制率分别为12.55％,46.29％,56.17％,68.52％,47.12％;牛蒡子苷抑制率分别为21.60％,41.35％,70.16％,88.27％,80.07％;β-谷甾醇抑制率分别为40.53％,54.52％,71.81％,96.50％,94.86％;胡黄连苷-Ⅱ抑制率分别为69.34％,94.03％,96.50％,103.09％,101.44％.绿原酸、牛蒡子苷、β-谷甾醇和胡黄连苷-Ⅱ对体外表达的猪PDE7A2均有抑制作用,其中胡黄连苷-Ⅱ对猪PDE7A2的抑制作用最强.     

Baicalin Induces IFN-α/β and IFN-γ Expressions in Cultured Mouse Pulmonary Microvascular Endothelial Cells

We studied the effect of baicalin, an extract from Radix Scutellariae (a traditional Chinese medicine) in inducing mouse pulmonary microvascular endothelial cells (MPMVECs) to produce interferons (IFNs). MPMVECs were cultured in vitro in the presence of different concentrations of baicalin (10, 20, and 30 μg mL-1), and the cells and the culture media were harvested at various time intervals. The proteins and mRNA levels (relative to β-actin) of IFN-α/β and IFN-γ were analyzed by RT-PCR and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). It was observed that baicalin substantially up-regulated the expression of IFN-α/β and IFN-γ. In all baicalin-treated groups, the relative levels of IFN-α/β and IFN-γ mRNAs peaked after 12 h of culturing, and IFN-α/β and IFN-γ proteins peaked after 24 h of culturing. These results suggest that baicalin can effectively induce the expression of IFNs in pulmonary microvascular endothelial cells, and thus potentially act as an antiviral compound. This study may provide background information for developing new antiviral drugs based on baicalin.     

口蹄疫146S对乳鼠心肌膜微血管内皮细胞分泌IL-6的影响

研究口蹄疫146S病毒粒子抗原（FMDV146S）对乳鼠心肌膜微血管内皮细胞（RMMVECs）分泌IL-6的影响,为解决现有口蹄疫疫苗的不足提供数据。体外培养乳鼠心肌膜微血管内皮细胞,用ELISA方法检测FMDV146S处理后细胞上清液中IL-6浓度。乳鼠心肌膜微血管内皮细胞（RMMVECs）在正常状态下低水平分泌IL-6;FMDV146S刺激后IL-6的分泌量显著增加,且呈剂量和时间依赖性,在刺激24h后分泌量达到峰值。MVECs在FMDV146S诱导的免疫与炎症反应中起着重要作用。     

山茱萸多糖对脑微血管内皮细胞氧化损伤的保护作用研究

采用氧化性低密度脂蛋白（ox LDL）刺激小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3,建立内皮细胞氧化损伤模型,通过瑞氏染色观察细胞形态变化,利用试剂盒检测细胞上清液中内皮细胞损伤相关的一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和内皮素-1（ET-1）变化,采用Western blot法检测与内皮细胞凋亡相关的Bax、Bcl-2、caspase3表达变化,系统分析山茱萸多糖对小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3氧化损伤的保护作用。结果表明经过山茱萸多糖处理后的ox LDL刺激bEnd.3细胞形态逐渐恢复,细胞上清液中ET 1和MDA显著含量下降（P<0.01）,NO和SOD含量上升（P<0.01）;凋亡抑制蛋白Bcl 2表达升高,促凋亡蛋白Bax和caspase3表达下降。说明山茱萸多糖能够在一定程度上保护ox LDL引发的内皮细胞氧化损伤。     

植物内生菌活性提取物对粳稻基因表达的影响

运用基因表达芯片技术,分析了植物内生菌活性提取物对粳稻的根系进行处理后,粳稻根部基因表达谱的差异。处理后,有883个基因发生了变化,超表达13个,与粳稻生长发育有关的基因6个。     

Ghrelin对大鼠胃黏膜上皮细胞中H~+-K~+-ATP酶基因表达和活性的影响

为揭示Ghrelin对胃酸分泌的作用,从断奶大鼠中分离新鲜胃黏膜,培养胃黏膜上皮细胞,培养30 h后,试验组培养液更换为分别含有1×10-4 μmol/L、1×10-3 μmol/L、1×10-2 μmol/L和1×10-1 μmol/L Ghrelin的新鲜培养液,对照组换为不含Ghrelin的正常新鲜培养液.继续培养4 h后,收集培养液和细胞,分别测定细胞中H+-K+-ATPase mRNA表达和活性.结果表明:1×10-3 μmol/L Ghrelin可显著增加细胞中H+-K+-ATPase mRNA的表达(P＜0.05),1×10-4 μmol/L、1×10-3 μmol/L和1×10-2 μmol/L Ghrelin明显增加了胃黏膜上皮细胞中H+-K+-ATPase的活性.这表明Ghrelin体外作用于胃黏膜上皮细胞可刺激胃酸的分泌.     

猪生长激素基因与白介素-4基因在小鼠体内的表达效应

比较研究了阳离子脂质体包裹VpGH、VpGH联合VpIL-4以及脂质体(对照)腹腔注射昆明小鼠的增长效应与免疫应答。结果表明:VpGH联合VpIL-4注射小鼠的增重幅度与VpGH注射小鼠相比出现负增长;在血清GH水平上VpGH注射小鼠、VpGH联合VpIL-4注射小鼠两组之间无明显差异;在白细胞数量、红细胞数量上VpGH注射小鼠、VpGH联合VpIL-4注射小鼠两组之间无明显差异。在IgG表达上各组均无显著差异。