鸡柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法的建立

为了建立一种能够快速实现对鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)和巨型艾美耳球虫(E.maxima)同时进行检测的双重PCR方法,基于2种艾美耳球虫各自的ITS-1基因筛选2对特异性引物,对制备的阳性DNA样品进行PCR扩增,凝胶电泳检测结果显示,分别在约450bp和150bp处出现目的条带。对PCR反应中的退火温度、MgCl2浓度、DNA模板量等进行优化。结果表明,当退火温度为59℃、MgCl2浓度为2.5mmol/L、DNA模板量为2μL时,双重PCR扩增结果最佳。特异性检测结果显示,所建立的双重PCR对环形泰勒虫、羊巴贝斯虫、隐孢子虫和蓝氏贾第虫的扩增结果均呈阴性,表明建立的方法具有较高的特异性。成功建立了柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法,为临床中鸡球虫病的快速诊断提供了一种可靠的检测方法。     

鸡六种艾美耳球ITS-1的克隆和序列分析

为对上海地区分离的6种鸡艾美耳球虫内转录间隔区1(ITS-1)进行克隆和序列分析,探索ITS-1区域序列在鸡球虫分类学中的作用,利用一对属特异性引物,对上海地区分离的6种球虫的ITS-1序列进行PCR扩增,扩增产物克隆到pMD18-T后进行序列测定,并与GenBank上下载的序列进行系统进化树分析.结果显示,巨型艾美耳球虫有大小分别为547bp和422bp两条PCR扩增条带;和缓艾美耳球虫有大小为627bp和493bp两条PCR扩增条带;其他4种球虫均为一条PCR扩增条带,大小分别为柔嫩艾美耳球虫668bp,毒害艾美耳球虫691 bp,堆型艾美耳球虫507 bp,早熟艾美耳球虫541 bp.6种球虫序列之间的同源性为34%～52%.系统进化分析显示,各个种分别与GenBank中下载的对应球虫种在同一分支上.     

四种鸡艾美耳球虫实验室保存株的PCR鉴定

以4种鸡球虫实验室保存株(毒害、巨型、柔嫩、堆型艾美耳球虫)的基因组DNA为模板,分别用针对4种球虫的ITS-1序列设计的种特异性引物进行PCR扩增,扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析,观察特异性条带。结果显示,只有在模板和扩增引物为同一种球虫时,方能扩增出特异性条带。表明本实验室保存的4种鸡球虫均为纯种株,建立的PCR检测方法可以用于鸡球虫纯种的鉴定。     

3株柔嫩艾美耳球虫28SrRNA基因部分序列的扩增与分析

本研究应用PCR技术扩增来自广东的3株柔嫩艾美耳球虫的28S rRNA基因部分序列,并与GenBank^TM登录的柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、鼠肉孢子虫和刚地弓形虫虫株的相应序列进行比对分析。试验结果显示,柔嫩艾美耳球虫3个样品均获得1172 bp的28S rRNA基因部分有效序列,不同虫株序列没有差异,与GenBank^TM登录的柔嫩艾美耳球虫相应序列只有一个碱基差异,显示种内序列高度保守,而与堆型艾美耳球虫、鼠肉孢子虫、刚地弓形虫相应的序列存在不同程度的差异。结果表明,28S rRNA基因部分序列可作为研究艾美耳球虫种间及其他顶复门原虫遗传变异的标记。     

鸡球虫病的防治

一、病原 常见的鸡球虫病原有9种,分别为柔嫩、毒害、巨型、堆型、布氏、变位、和缓、哈氏和早熟艾美耳球虫。其中以柔嫩和毒害艾美耳球虫致病力最强,其它种如堆型、巨型、和缓艾美耳球虫虽很常见,但致病性弱,而布氏艾美耳球虫虽很少见,但具有高度致病性。     

一起肉鸡球虫病与组织滴虫病并发的诊治

鸡球虫病是由柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、哈氏艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫和早熟艾美耳球虫等7种艾美耳球虫(尤其是前两种球虫)引起的多数鸟类的一种传染性消化道寄生虫性机能紊乱性疾病^[1]。柔嫩艾美     

鸡球虫虫种分离鉴别方法研究

球虫病是一种由艾美耳属原虫引起的家禽肠道疾病。现在认为主要有七种禽艾美耳球虫：堆型艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫、柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、早熟艾美耳球虫、布氏艾美耳球虫和毒害艾美耳球虫。所有种的球虫均有一定的致病性,这使得球虫种的诊断问题复杂化了...     

特异PCR方法用于鸡的3种艾美耳球虫混合感染鉴别的研究

用单卵囊分离法获得的鸡的3种艾美耳球虫（每种各2株）卵囊：柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）、巨型艾美耳球虫（E．maxima）、堆型艾美耳球虫（E．acervulina）。经纯化、提取基因组DNA后，用报道的种特异引物做PCR扩增分析，以确定是否为纯种。结果发现这3种球虫均存在混合感染的情况。该结果为进一步研究这3种球虫奠定了基础，并说明特异PCR方法能够有效地、快速地鉴别球虫虫种。     

鸡球虫病的防治方法

鸡球虫病的病原为原虫中艾美耳科艾美耳属的球虫,世界各国已经记载的鸡球虫种类共有13种之多,我国已发现柔嫩、毒害、巨型、堆型等9种艾美耳球虫,其中致病力最强的是柔嫩艾美耳球虫和毒害艾关耳球虫。     

山东省潍坊地区肉鸡球虫的抗药性调查

应用石歧杂肉仔鸡,检测了采自我国山东潍坊的５种艾美耳球虫对６种常用抗球虫药的敏感性。根据最适抗球虫活性百分率、相对卵囊产量和病变记分减少率３项指标综合判定,山东潍坊地区的柔嫩艾美耳球虫,堆型艾美耳球虫,巨型艾美耳球虫、丰氏菌美耳球虫和缓艾美耳球虫的５个混合种对盐霉素Ｓａｌｉｎｏｍｙｃｉｎ、拉水 攻素Ｌａｓａｌｏｃｉｄ、莫能霉素Ｍｏｎｅｎｓｉｎ、马杜拉霉素Ｍａｄｕｒａｍｉｃｉｎ和常山酮Ｈａｌｏｆｕｇ     

鸡柔嫩艾美尔球虫ZJ株3-1E基因的原核表达及鉴定

本实验对E．tenellaZJ株的3-1E基因进行了克隆和表达。根据已报道的柔嫩艾美尔球虫3-1E基因序列设计引物,以孢子化卵囊总RNA为模板,用RT—PCR方法扩增得到一条特异片段,将扩增产物克隆至pUCM—T,转化感受态菌DH5仅,经酶切鉴定获得阳性重组质粒并对其进行测序。测序结果与参考序列比较,核苷酸同源性为99．5％。然后将重组质粒和表达载体pET-30a分别以EcoRⅠ、SalⅠ酶切后构建重组表达载体pET-30a-3—1E,并将其转化入大肠杆菌BL21中,提取质粒经酶切和PCR鉴定正确后,用IPTG诱导表达。表达产物经SDS—PAGE和Westernblot检测显示,3-1E基因在大肠杆菌中成功表达;融合蛋白的分子量约为27ku,诱导6h的蛋白表达量可达到47、024％。     

栎叶枇杷、大渡河枇杷和普通枇杷遗传关系的形态学分析

本研究对普通枇杷(Eriobotrya japonica Linl.)、大渡河枇杷(Eriobotrya prinoides Rehd.& Wils. var. dadunensis H. Z. Zhang)和栎叶枇杷(Eriobotrya prinoides Rehd.& Wils.)的叶、果等性状进行了调查考证,结果表明,大渡河枇杷的各种性状都处于二者之间;不同大渡河枇杷单株的许多性状也有不同程度的分离,有些偏向于栎叶枇杷,有些偏向于普通枇杷,支持大渡河枇杷为栎叶枇杷和普通枇杷种间杂种的结论。     

Isolation and selection of ionophore-tolerant Eimeria precocious lines: E. tenella, E. maxima and E. acervulina

Eimeria parasites were isolated from Nanhai Guangdong province (southern China) and studied in chickens in wire cages to evaluate their drug resistance against commonly used ionophores: monensin (100 mg/kg of feed), lasolacid (90 mg/kg), salinomycin (60 mg/kg), maduramicin (5 mg/kg) and semduramicin (25 mg/kg). Chinese Yellow Broiler Chickens were infected with 40,000 crude sporulated Eimeria oocysts at 15 days of age and prophylactic medication commenced a day prior to infection. Drug resistance was assessed for each ionophore drug by calculating the anticoccidial index (ACI) and percentage optimum anticoccidial activity (POAA) based on relative weight gain, rate of oocyst production and lesion values. Results revealed that Nanhai Eimeria oocysts comprising of E. tenella, E. maxima and E. acervulina, were resistant to monensin, sensitive to both salinomycin and lasolacid and partially sensitive to maduramicin and semduramicin. By selection for early development of oocysts during passage through chickens, the prepatent time of E. tenella, E. maxima and E. acervulina were reduced by 49, 36 and 22 h, respectively. The precocious lines are less pathogenic than the parent strains from which they were selected and conferred a satisfactory protection for chickens against coccidiosis. These ionophore-tolerant precocious lines could have wider applications in the development of anticoccidial vaccines for sustainable control of coccidiosis.     

毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)广东株微线蛋白-2基因在大肠杆菌的表达

根据克隆的毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)广东株微线蛋白-2基因(EnMIC-2(Gd))的cDNA序列设计特异性引物，用PCR方法扩增其阅读框架(ORF)后，克隆至质粒表达载体pET-32a( )，成功构建了重组表达质粒pET-32a( )-EnMIC-2。用CaCl2法将其转化至宿主细菌E.cliBL21(DE3)，并用IPTG成功诱导了EnMIC-2重组抗原在大肠杆菌表达。表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的10．8％，其相对分子质量约为55000。重组蛋白经SDS-AGE分析后，用E．necatrix(广东株)感染鸡的高免血清进行Western Blotting分析，结果为阳性。