棉酚对猪原代培养黄体细胞增殖和凋亡的影响

采用长大杂母猪原代培养的黄体细胞,通过MTT法、DNA Ladder和TUNEL检测法,探讨了0、0.4、2、10、50 mg/L棉酚对猪原代培养黄体细胞增殖和凋亡的影响.结果表明,棉酚分别染毒24、48 h后,与对照组比较,各浓度组对黄体细胞增殖具有明显的抑制作用(P<0.05,P<0.01),黄体细胞的凋亡率达5%～23%;这种细胞毒性作用呈剂量相关性,在一定剂量下,具有时间依赖关系.     

顺铂诱导体外犬乳腺肿瘤细胞凋亡影响

为研究顺铂诱导体外犬乳腺肿瘤细胞CHMp凋亡影响,本试验采用不同浓度的顺铂以不同作用时间处理细胞,用MTT法检测细胞活性,通过透射电镜观察CHMp细胞形态学变化,用流式细胞仪研究CHMp细胞凋亡和周期。结果显示,CHMp细胞生长受浓度和时间双重依赖,浓度越高,时间越长,抑制越明显,在电镜下观察细胞出现明显的凋亡形态,同时5μmol/L顺铂作用24 h后细胞阻滞于G1/S期,比例高达75.12%。结果表明,顺铂能抑制CHMp增殖,诱导细胞凋亡,阻滞细胞G1/S期。     

雌激素和孕酮对犬子宫内膜基质细胞增殖和孕酮受体表达的影响

本试验应用不同消化分离途径获取犬子宫内膜基质细胞,调节培养液中雌激素(E₂)和孕酮(P₄)的浓度,采用MTT法测定E₂和P₄浓度水平对犬子宫内膜基质细胞体外增殖的影响,利用细胞免疫组织化学法鉴定细胞并测定细胞孕酮受体(PR)表达与激素浓度水平的相关性。结果表明,E₂浓度变化(15、30、100 pg/mL)对犬子宫内膜基质细胞的增殖和PR的表达均没有显著的调节作用(P>0.05);P₄(15、30 ng/mL)对犬子宫内膜基质细胞的增殖有显著促进作用(P<0.05),P₄(3、15、30 ng/mL)对犬子宫内膜基质细胞PR的表达具有显著的抑制作用(P<0.05),其影响程度与浓度和作用时间关系密切。     

锌对鹅淋巴细胞凋亡和细胞增殖周期影响的研究

试验选用120只1日龄鹅随机分成4组，A组喂以玉米大豆为基础日粮未加锌的饲料，另3组在基础日粮中添加ZnSO₄·H₂O，使锌含量分别为40(B组)、110(C组) 和2000 mg/kg(D组)。应用流式细胞仪观测锌对鹅细胞周期和细胞凋亡的影响。结果显示锌添加量为110 mg/kg时，鹅血液淋巴细胞、胸腺、脾脏细胞的增殖指数和DNA含量最高。低锌和高锌饲料可以引起血液淋巴细胞的凋亡。     

干扰B-Raf基因对绵羊毛囊干细胞增殖和凋亡的影响

本研究旨在探讨编码丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（Serine/Threonine-Protein Kinase）的B-Raf基因对绵羊毛囊干细胞（HFSCs）增殖和凋亡的影响。将si-B-Raf转染至HFSCs,通过RT-qPCR实验技术检测B-Raf基因、Erk1/2基因和STAT3基因的表达水平,通过Western Blot实验技术检测B-Raf蛋白、Erk1/2蛋白、p-Erk1/2蛋白和STAT3蛋白的表达水平,通过EdU细胞增殖法和CCK-8细胞增殖检测法检测HFSCs的增殖情况,通过流式细胞仪检测HFSCs的凋亡情况。结果表明,si-B-Raf转染细胞后,B-Raf基因的表达量显著降低,Erk1/2基因和STAT3基因的表达量也显著降低;Western Blot实验结果表明,B-Raf蛋白、Erk1/2蛋白、p-Erk1/2蛋白和STAT3蛋白的表达水平显著降低;EdU和CCK-8结果发现细胞增殖受到抑制,细胞增殖水平显著下降;流式细胞仪检测到细胞凋亡水平显著上升。综上,干扰B-Raf基因表达显著抑制HFSCs增殖并促进其凋亡,可能是通过MAPK/Erk1/2通路进行的,研究可为...     

柞蚕蛹虫草水提物对人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响

研究柞蚕蛹虫草水提物（Aqueous extract from cordycep militaris of antheraea pemyi,AEoAPC）对人乳腺癌细胞MCF-7生长抑制与凋亡的作用.将不同浓度的AEoAPC分别作用于人乳腺癌细胞MCF-7 24、48、72 h后,应用倒置相差显微镜观察人乳腺癌细胞MCF-7的形态变化,噻唑蓝比色法测定细胞生长抑制效应,流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率.结果表明：AEoAPC能显著抑制人乳腺癌细胞MCF-7的增殖,且在一定的浓度范围内呈时间和浓度的依赖性;形态学观察发现,细胞形状不规则、变暗、皱缩;FCM检测结果显示,作用72 h后G0-G1期（DNA合成前期）的细胞分布有所增加,使细胞阻滞于G2期（DNA合成后期）和S期（DNA合成期）;0.8g/L AE0-APC在24、48、72 h凋亡率分别为8.65％、14.20％、26.30％,其凋亡程度与时间呈正相关.说明AEoAPC能明显抑制人乳腺癌细胞MCF-7的生长,诱导其细胞凋亡.     

镉对鸡胚成纤维细胞增殖和凋亡的影响

以鸡胚成纤维细胞为研究对象,探讨镉影响细胞增殖及凋亡的作用。应用酶标仪、倒置相差显微镜、激光共聚焦显微镜及流式细胞仪,分析细胞毒性、细胞形态、凋亡率、细胞周期与线粒体膜电位及胞内钙离子稳态。结果表明:镉处理后,细胞活性下降,呈现凋亡形态学变化,细胞周期阻滞于G1期,细胞凋亡率呈浓度和时间依赖性,细胞线粒体膜电位下降,胞内游离钙离子浓度增大。研究发现,镉可通过阻滞细胞周期,降低线粒体膜电位,影响胞内钙离子稳态来诱导鸡胚成纤维细胞凋亡。     

林蛙皮多肽对HaCaT细胞增殖及凋亡的影响

将本室自制的林蛙皮多肽进行SDS-PAGE和紫外扫描检测,并将其以不同质量浓度作用于人永生化表皮细胞(HaCaT细胞),利用MTS法、Annexin V-FITC/PI法分别检测林蛙皮多肽对HaCaT细胞增殖及其凋亡的影响。结果显示,林蛙皮多肽在20%SDS-PAGE条件下呈现弥散状态,灰度分析表明相对分子质量在10 000以下的多肽占总多肽的67.1%。林蛙皮多肽在(50⁸00)mg/L条件下,随着多肽质量浓度的升高,对HaCaT细胞促进增殖的作用逐渐增强,当林蛙皮多肽质量浓度为800mg/L时,MTS检测HaCaT细胞活力D值是正常对照细胞D值的2.5倍(P<0.01);此时,细胞凋亡率比正常对照细胞降低了(2.7±0.03)%,(P<0.01)。以上结果表明,林蛙皮活性多肽对HaCaT细胞的增殖有显著的促进作用,并对其凋亡有显著的抑制作用。     

紫杉醇诱导犬乳腺肿瘤细胞凋亡和细胞ROS及SOD失衡的研究

为研究紫杉醇诱导犬乳腺肿瘤细胞(CHMm)凋亡及对氧化还原平衡的影响,本实验以不同浓度的紫杉醇处理细胞,采用台盼蓝排斥试验和MTT法检测细胞活性,并进行丫啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双荧光染色以及在透射电镜下观察CHMm细胞凋亡和形态学变化,并检测细胞内活性氧(ROS)、超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)等反映细胞内氧化还原功能的指标。结果显示:在紫杉醇的作用下,CHMm生长受到不同程度的抑制,引起细胞凋亡,出现典型的凋亡形态;ROS和MDA含量增加,SOD和CAT酶活性降低,细胞内出现氧化还原失衡。表明紫杉醇能够抑制CHMm细胞生长,打破氧化还原平衡,诱导细胞凋亡并呈浓度和时间依赖性。     

高铜对雏鸡肝细胞周期和凋亡影响的研究

420只1日龄艾维菌肉鸡随机分为7组，分别喂以对照日粮（Cu 11mg／kg）和高铜日粮（Cu 100mg／kg，高铜Ⅰ组；Cu 200mg／kg，高铜Ⅱ组；Cu 300mg／kg，高铜Ⅲ组；Cu 400mg／kg，高铜Ⅳ组；Cu 500mg／kg，高铜Ⅴ组；Cu 600mg／kg，高铜Ⅵ组）6周，以流式细胞术和原位末端标记法（TUNEL）研究了高铜对雏鸡肝细胞周期和凋亡的影响。结果表明，日粮铜水平达到300mg／kg以上时，肝细胞DNA直方图出现位于G1峰之前的亚G1峰（又叫AP峰），凋亡细胞比例与对照组比较差异显著（P〈0．05）。TUNEL法检测，肝脏组织切片中出现被染成黄褐色的凋亡细胞，且检出率随日粮铜水平的升高而升高。日粮铜水平达到400mg／kg以上时，肝细胞增殖分化受阻。     

胰岛素样生长因子-Ⅰ、肝细胞生长因子、转化生长因子-β1、干扰素-γ对奶牛乳腺上皮细胞增殖活性的影响

本试验应用组织块培养和差速消化法获取原代奶牛乳腺上皮细胞,免疫荧光鉴定正确后MTT法评价不同浓度的胰岛素样生长因子-Ⅰ（insulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor, HGF）、转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、干扰素-γ （interferon-γ,IFN-γ）对奶牛乳腺上皮细胞体外增殖的影响。结果表明,IGF-Ⅰ、HGF分别在 10～200和0.1～100 ng/mL对乳腺上皮细胞的增殖呈正相关,而TGF-β1（2.5～100 ng/mL）、IFN-γ（5～160 ng/mL）则剂量依赖性地抑制乳腺上皮细胞增殖。提示,IGF-Ⅰ、HGF均能促进奶牛乳腺上皮细胞的体外增殖,该作用在一定浓度范围内有剂量依赖性;TGF-β1、IFN-γ对乳腺上皮细胞的增殖作用出现剂量抑制效应。     

不同浓度氟对山羊成骨细胞周期和凋亡的影响

为了探讨氟化物对反刍动物成骨细胞的细胞周期和凋亡的影响,本研究以初生山羊股骨骨膜为材料分离成骨细胞,接种于含15?S的DMEM培养液,于37℃、5%CO2的培养箱中培养。通过形态观察(Hoechst33342/PI双重染色)、DNA ladder电泳、透射电镜、流式细胞仪等方法检测氟对成骨细胞的调控作用。结果表明,高氟(1.0×10-3及2.5×10-3mol/L)使成骨细胞G0/G1期减少,S期细胞增多,抑制成骨细胞周期由合成DNA的S期向G2M期转化,使细胞停滞在S期。1.0×10-5~2.5×10-3mol/L氟可使DNA断裂,诱导成骨细胞凋亡,其中1.0×10-4mol/L氟所致早期和晚期凋亡率最高,分别为3.33%和2.92%。本试验证实氟可诱导成骨细胞凋亡。     

DDR1对奶牛乳腺上皮细胞增殖与凋亡的调控作用

旨在通过干扰或过表达盘状蛋白结构域受体1（DDR1）基因,探讨其对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡及周期的影响。本研究将DDR1基因小干扰RNA片段和过表达载体pcDNA3.1-DDR1转染奶牛乳腺上皮细胞,采用qRT-PCR和Western blot检测细胞中DDR1的干扰和过表达效果;利用CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡（早凋、晚凋）的变化;利用qRT-PCR检测增殖与凋亡相关基因的表达情况。结果,在奶牛乳腺上皮细胞中干扰DDR1基因后,其mRNA和蛋白表达分别下调94%和30%,而过表达DDR1基因后,其mRNA和蛋白表达分别上调68.24和1.38倍;干扰DDR1极显著抑制细胞的增殖（P<0.01）,细胞早凋与晚凋比例极显著上升（P<0.01）;干扰组G1期细胞比例极显著上升（P<0.01）,S期细胞比例极显著下降（P<0.01）,G2期细胞比例显著下降（P<0.05）,提示细胞阻滞在G0/G1期。相反,过表达DDR1能显著促进细胞增殖（P<0.05）,显著抑制细胞晚期凋亡（P<0.05）,G1期细胞比例极显著下降（P<0.01）,S期细胞比例极显著上升（P<0.01）,促进细胞由G1期向S期的转换。qRT-PCR检测结果显示,干扰DDR1后显著上调BAX、Caspase9基因的表达（P<0.05）,极显著上调P53、FAS基因的表达（P<0.01）,且显著下调PCNA、CyclinB1基因的表达（P<0.05）;过表达DDR1后,分别显著和极显著下调Cytc与BAX基因的表达（P<0.05,P<0.01）,并极显著上调CyclinB1基因的表达（P<0.01）。综上可见,DDR1能够调控奶牛乳腺上皮细胞的增殖、凋亡和周期,可为阐明DDR1参与奶牛乳腺上皮细胞生长发育的分子机制提供参考。     

SOX2敲低对犬乳腺肿瘤CHMm细胞增殖和迁移的影响

为探究SOX2对犬乳腺肿瘤细胞系CHMm增殖及迁移能力的影响,采用脂质体将siRNA转染至犬乳腺肿瘤细胞系CHMm降低其SOX2的表达,采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力,Transwell小室迁移试验检测细胞的迁移能力,Western blot检测NF2和YAP的表达。结果表明,成功建立了SOX2敲低的犬乳腺肿瘤细胞模型,敲低SOX2的犬乳腺肿瘤细胞的增殖能力和迁移能力均显著降低(P<0.05);敲低SOX2的犬乳腺肿瘤细胞中NF2的表达显著升高(P<0.05),Hippo信号通路下游效应分子YAP的表达显著降低(P<0.05)。说明SOX2可通过NF2/YAP影响犬乳腺肿瘤细胞增殖和迁移,进一步阐明了SOX2在肿瘤发生中的作用机制。     

人乳铁蛋白对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响

为了研究人乳铁蛋白对宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用及其对细胞凋亡、p53蛋白表达和Caspase-3活性的影响,试验采用MTT方法检测细胞的生长抑制率、DNA片段化试验检测细胞凋亡、流式细胞术测定细胞周期、Western-blot检测p53蛋白表达、Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3的活性.结果表明:人乳铁蛋白对宫颈癌Hela细胞的抑制呈现时间和剂量依赖性,有73%的Hela细胞停滞在G0～G1期;Western-blot检测结果显示人乳铁蛋白可以上调p53蛋白的表达; 人乳铁蛋白作用48 h后Caspase-3的活性是0小时时的5.5倍,二者差异极显著(P<0.01).结果说明人乳铁蛋白能显著抑制宫颈癌Hela细胞生长,其抗肿瘤机制与诱导细胞凋亡、调控细胞周期、上调p53表达、活化Caspase-3有关.     

GSK126对犬乳腺肿瘤细胞上皮间质转化的影响

探讨Zeste基因增强子同源物2(enhancer of Zeste homolog 2,EZH2)抑制剂GSK126对犬乳腺肿瘤细胞增殖、迁移、凋亡及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响。取对数生长期的犬乳腺肿瘤细胞(canine mammary tumor cells, CHMm cells),将不同浓度的EZH2抑制剂GSK126(0、10、20、40μmol·L^-1)作用于体外培养CHMm细胞后,培养48 h,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)和细胞克隆形成试验检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞迁移能力变化,Annexin V-FITC/PI流式细胞仪检测细胞凋亡能力,qRT-PCR和Western blot方法检测CHMm细胞中凋亡相关因子Bcl-2和Bax、上皮间质标志物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、EZH2 mRNA和蛋白相对表达量。结果显示：与对照组相比,GSK126对CHMm细胞的增殖及迁移具有明显抑制作用,呈明显的剂量依赖性;与对照组相比...     

牛支原体P48蛋白诱导EBL细胞增殖和凋亡的研究

试验旨在研究牛支原体P48蛋白对胎牛肺（embryonic bovine lung,EBL）细胞增殖和凋亡的影响。收集不同时间段、不同浓度P48蛋白与EBL细胞共孵育的样品,通过MTT法检测细胞增殖率;DAPI染核法观察EBL细胞核形态变化;流式细胞技术检测该蛋白诱导EBL细胞的凋亡率;实时荧光定量PCR检测凋亡标志物的mRNA相对表达变化;Western blotting方法检测Bax和Beclin-1蛋白表达水平。结果显示：当作用时间为72 h,P48蛋白浓度在10 μg/mL时,对EBL细胞增殖有极显著的抑制作用（P<0.01）,在0.1和0.5 μg/mL时对EBL细胞的增殖的抑制作用不显著（P>0.05）;经蛋白诱导12 h细胞核形态未有明显变化,24 h细胞核形态发生皱缩和凝聚,48和72 h细胞核发生碎裂;凋亡标志基因mRNA表达在2和12 h没有明显提高,在24、48、72 h有显著提高,与作用时间呈正相关,同时凋亡相关蛋白Bax和Beclin-1的表达随之显著提高。流式细胞技术结果显示P48蛋白诱导EBL细胞凋亡率为48.44%。综上表明,牛支原体P48重组蛋白能够抑制EBL细胞的增殖,促进细胞凋亡,为进一步揭示牛支原体的致病机制提供参考依据。     

热应激对大鼠肠上皮细胞增殖和凋亡的影响

试验旨在探究热应激对IEC-6细胞增殖、凋亡、周期、凋亡及紧密连接蛋白表达的影响.试验采用体外细胞培养热应激模型,分别设置对照组(37℃)与热应激组(41℃)对细胞进行处理,每组3个重复,CCK-8法检测IEC-6细胞活性,流式细胞术检测IEC-6细胞凋亡率及周期,Western blot法检测凋亡相关蛋白(Bax、B...     

白藜芦醇缓解NEFA诱导的奶牛乳腺上皮细胞的周期阻滞和凋亡

围产期奶牛能量负平衡(negative energy balance, NEB)可引起高非酯化脂肪酸(non-esterified fatty acids, NEFA)血症。大量NEFA被乳腺组织吸收,可诱发细胞凋亡。白藜芦醇(resveratrol, RES)是一种非黄酮类多酚有机化合物,具有抗炎抗凋亡等作用。目前,尚不清楚RES对高NEFA处理的乳腺上皮细胞(MAC-T)的周期阻滞和凋亡的影响。因此本研究主要探讨NEFA对MAC-T细胞周期阻滞和凋亡的影响以及RES是否能改善高浓度NEFA对MAC-T的病理作用。添加不同浓度的NEFA处理MAC-T,利用CCK-8细胞活力检测试剂盒检测细胞活力,通过Western blot检测细胞凋亡相关分子Caspase-3、Bcl-2、Bax和细胞周期调节因子Cyclin D1的蛋白表达水平,采用qRT-PCR法检测细胞凋亡相关因子Caspase-3、Bcl-2、Bax的mRNA转录水平,利用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。结果显示,NEFA剂量依赖性地诱导MAC-T细胞凋亡,降低细胞活力,阻滞细胞周期。高NEFA显著增加Bax、Caspas...