广西猪伪狂犬病病毒GXA株的分离鉴定

从广西某猪场大批死亡的新生仔猪分离1株病毒，该病毒株在PK-15出现细胞病变，在电镜下可见到典型的伪狂犬病病毒粒子，细胞培养物接种家兔出现伪狂犬病症状。进而用所分离病毒的DNA作为模板，应用特异性引物，通过聚合酶链式反应扩增出伪狂犬病病毒gp50基因中433-651之间217bp长的特异性片段。分离的病毒为猪伪狂犬病病毒，并将其命名为猪伪狂犬病病毒GXA株。     

南京地区1株猪伪狂犬病毒的分离与鉴定

于2013年从南京某猪场送检发病仔猪脏器中分离获得1株病毒。病样组织液上清经BHK细胞分离培养后,利用PCR和间接免疫荧光反应进行鉴定,PCR可以扩增出PRV gE基因的全长片段,且在间接免疫荧光检测中呈现阳性荧光反应。将命名为NJ株的分离病毒接种家兔,被接种的家兔很快出现瘙痒、死亡等伪狂犬病症状。与以往发表的伪狂犬病毒gE基因序列比对及进化树分析结果显示,分离株属于一个相对独立的分支。由中国兽药监察所提供的伪狂犬病阳性血清对分离株有一定的中和能力。根据实验结果推测,南京某猪场流行的伪狂犬病毒存在一定的抗原变异。     

南京地区1株猪伪狂犬病毒的分离与鉴定

于2013年从南京某猪场送检发病仔猪脏器中分离获得1株病毒。病样组织液上清经BHK细胞分离培养后,利用PCR和间接免疫荧光反应进行鉴定,PCR可以扩增出PRV gE基因的全长片段,且在间接免疫荧光检测中呈现阳性荧光反应。将命名为NJ株的分离病毒接种家兔,被接种的家兔很快出现瘙痒、死亡等伪狂犬病症状。与以往发表的伪狂犬病毒gE基因序列比对及进化树分析结果显示,分离株属于一个相对独立的分支。由中国兽药监察所提供的伪狂犬病阳性血清对分离株有一定的中和能力。根据实验结果推测,南京某猪场流行的伪狂犬病毒存在一定的抗原变异。     

伪狂犬病毒HuB2020株的分离与鉴定

从临床病料中分离纯化1株猪伪狂犬病毒——HuB2020,并对其毒力、培养特性及遗传变异开展了一系列研究。结果表明,该毒株gE基因核苷酸序列与国内PRV毒株的核苷酸序列同源性在98.9%～99.9%。纯化后的病毒经测定其在PK15细胞上的TCID50为107.5/mL;对6周龄昆明小鼠的LD₅₀为1×10^5.7。组织嗜性分布显示,10^6.0TCID₅₀/0.1 mL、10^5.0TCID50/0.1 mL攻毒组对小鼠的神经嗜性均高达100%,且病毒在脑和心脏中的检出率均高于其他组织。     

猪伪狂犬病毒河南株的分离与鉴定

从疑似猪伪狂犬病的病料中分离到 1株病毒 ,通过电镜观察、免疫荧光检查、PCR方法检查 ,证明该分离株为猪伪狂犬病毒 ;用分离株研制出油乳剂灭活苗预防猪伪狂犬病 ,预防效果良好。     

二株江西地区猪伪狂犬病病毒的分离与初步鉴定

从江西省两猪场流行病学、临诊症状及病理变化差异较大的仔猪病例中分离到两株有囊膜的正二十面体病毒（命名为ＧＮ９８０１和ＧＮ９８０２）,经鉴定均为伪狂犬病病毒。ＧＮ９８０１毒株对猪的致病性及致鸡胚成纤维细胞的病变作用均比ＧＮ９８０２毒株强。     

猪伪狂犬病病毒粤A株的分离与鉴定

从广东番禺某猪场病死仔猪中分离到一株疑为猪伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）毒株,通过对其理化特性的鉴定,中和试验,实验动物回归试验,电镜观察,ＰＣＲ扩增及感染力测定,发现其对氯仿、乙醚均敏感,能中和Ｐｒ不标准阳性血清,实验兔接种该病毒后,发生瘙痒并麻痹致死,电中见病毒粒子呈示规则圆形并带有囊和纤窝。ＰＣＲ体外扩增可见其不Ａ株在同一水平位置上有相同的电泳带,用Ｍａｒｃ１４５测定其毒为１０＾７．５ＴＣＩＤ５０／     

猪伪狂犬病毒的分离与鉴定

从河南某发病猪场大批死亡仔猪的脾、肾及脑组织中分离到1株猪伪狂犬病毒(PRV)毒株,该毒株经细胞连续传代培养后,接种PK-15细胞能够产生明显的细胞病变(CPE),且能被PRV阳性血清中和.病毒对氯仿、乙醚敏感,56℃水浴30 min能使其灭活.将所分离的病毒接种家兔和小鼠,均出现明显的伪狂犬病临床症状.PCR鉴定结果表明,用gp50基因序列引物能够从该毒株上扩增出目的条带,将测序结果与GenBank中的5株PRV毒株进行比对分析,同源性达99％.证实所分离病毒为猪伪狂犬病毒.     

猪伪狂犬病病毒的分离鉴定

从山西某猪场发病猪的脑组织中分离到1株疑为猪伪狂犬病病毒(PRV)毒株,通过BHK-21细胞培养、病毒毒力滴定、中和试验、PCR检测病毒方法对该分离株进行了鉴定,结果发现:分离的病毒在BHK-21细胞培养盲传4代后出现典型细胞病变;用BHK-21细胞测定其毒价TCID50为10-8.042/0.1 mL;PCR体外扩增可见其扩增片段与预期目的条带相一致;据此分离病毒株的上述特征,鉴定该病毒为猪伪狂犬病病毒,并命名为SX09。     

猪伪狂犬病病毒HN株的分离鉴定

从河南省某猪场疑似猪伪狂犬病发病仔猪的脑及内脏中分离到1株病毒并进行了鉴定。该分离毒株在PK15细胞上连传5代,出现典型细胞病变;在电镜下可见到典型的伪狂犬病病毒粒子;能被伪狂犬病病毒标准阳性血清中和;病毒接种于家兔和小鼠,均出现典型的伪狂犬病发病症状;提取所分离病毒的DNA作为模板,应用特异性引物,以PCR方法可扩增出伪狂犬病病毒gE基因的特异性片段。     

猪伪狂犬病毒HX14株的分离与鉴定

采集临床疑似伪狂犬病例病料并分离到1株病毒。PCR鉴定仅能扩增出伪狂犬病毒特异性条带,其他常见的7种猪群疫病病毒为阴性。家兔接种试验能引起典型的神经症状,最终衰竭死亡,证实所分离病毒为强毒株,将分离到的伪狂犬病毒命名为HX14株。选取我国不同时期分离的伪狂犬野毒gE基因进行序列比对分析,结果显示,HX14株与参比序列同源性在93.8%~97.2%之间,同源性最高的是Min-A株,最低的是GZ-Z1株。氨基酸序列比较,HX14株和Ea、GDSH、HB-HS、HB-LF、HBJZ、LXB6、LXB88、Min-A、P-PrV、Yangsan株的同源性均为93.2%,与89V87同源性最低,为88.1%。HX14株在8个氨基酸位点上和参考毒株明显不同,分别是P~(12)→M~(12)、~(14)LRREPP19→~(14)CSARAA19、T~(115)→R~(115)。研究表明HX14株为gE基因变异较为明显的伪狂犬野毒强毒株。     

陕西省猪伪狂犬病流行病学调查和WG株的分离鉴定

应用gE-EL ISA法对陕西省部分地区6个集约化猪场的187份猪血清进行了伪狂犬病毒(P seu-dorab ies v irus,PRV)野毒感染检测,并对疑似伪狂犬病发病仔猪的内脏及脑组织进行了病毒分离鉴定。结果显示,陕西省猪PRV野毒抗体平均阳性率为28.76%,最高为48.98%,最低为0;分离毒株可致PK-15细胞出现典型的圆缩、集聚,脱落等细胞病变,连续传代后,CPE出现的时间稳定在20 h左右;细胞培养物和病料混悬液接种家兔均出现典型奇痒症状,PCR反应扩增出PRV gE基因中长度为612 bp的特异性片段。表明本试验分离的病毒为PRV,并将其命名为PRV W G株。     

猪伪狂犬病病毒泰州株的分离鉴定

从泰州市姜堰区某猪场发生的疑似伪狂犬病病猪中采集病料,接种PK15细胞,收取细胞病毒液并提取DNA,经PCR检测及间接免疫荧光鉴定,结果表明该分离株为猪伪狂犬病毒,命名为TAIZ130417。分离的病毒在PK15细胞上的生长滴度可以达到108.12TCID50/m L。将该病毒接种家兔,家兔很快出现奇痒并最终死亡等伪狂犬症状。     

一株新分离的猪伪狂犬病毒的评估

为了对一株经过鉴定、纯化的猪伪狂犬病毒(PRV)黑龙江省现地分离株进行评估,对现地分离株进行了继代培养和分离,以经典PRV Ra株为对照,测定不同培养时间的病毒含量,绘制毒株的生长曲线,同时利用分离株的细胞培养物对家兔、小鼠和分离动物进行致病力试验。结果显示:分离株比Ra株病毒含量先达到峰值,并且相同培养时间时病毒含量高于Ra株,同时确定其最佳培养时间为42 h;致病力试验中攻毒组动物均出现了不同程度的典型临床症状。说明PRV现地分离株致病性能良好。     

一株猪圆环病毒2型的分离与分子鉴定

利用PCR技术初步检测疑似PCV2感染的猪肺脏和淋巴结中的病毒.将样品处理后接种于PK-15细胞.从感染PK-15细胞PCR扩增PCV2基因片段,克隆入pMD18-T载体,并进行序列测定和比较.序列分析结果表明,分离病毒的PCR产物与国内多株PCV2核酸同源性大于98%,说明所分离的病毒为PCV2.     

猪伪狂犬病毒HN-LD株分离鉴定及部分毒力基因遗传进化分析

为了解湖南省伪狂犬病毒（PRV）病原特征及遗传变异情况,从湖南娄底某猪场采集疑似感染伪狂犬病（PR）病料,通过细胞传代、PCR鉴定、间接免疫荧光试验（IFA）等进行病毒分离鉴定;对该毒株的gC、TK和gE基因进行PCR扩增及测序,分析其变异情况。结果表明,临床病料接种PK15细胞后有1份样品出现细胞病变,经过PCR和IFA鉴定结果表明分离的毒株为PRV（命名为HuN-LD株）,盲传第6代病毒的滴度为10^7.5 TCID₅₀/mL。与参考PRV毒株相比,该毒株gE、TK和gC基因序列与国内流行变异株对应序列同源性最高,与其他毒株同源性相对较低。基于gC基因序列构建的系统进化数分析结果表明,该毒株与国内2011年后流行变异株亲缘关系最近,属于同一分支,但与国外流行的毒株（NIA3和Becker等）相隔较远,属于不同分支。提示成功分离得到1株PRV变异株,该结果可为湖南省PRV流行病学研究及疫苗研发等提供科学依据。     

猪伪狂犬病病毒的分离与鉴定

用猪睾丸细胞(ST细胞)从1只发病仔猪的脑组织中分离到1株病毒,第6代时的毒价为107.75 TCID50/mL.用猪伪狂犬病病毒特异性引物可从该病毒细胞培养物中扩增出与预期大小相同的gB基因部分核苷酸片段.测序结果表明:该gB基因的部分序列与GeneBank登录的5株PRV同源性为98.0％～99.5％.接种家兔后可观察到典型的伪狂犬病临床症状,ELD50为10-7.50/mL,分离毒可被PRV阳性血清中和.该分离毒为猪伪狂犬病病毒强毒株.     

猪伪狂犬病病毒的分离鉴定

从天津市郊县某猪场发病仔猪脑中分离到一株病毒。该病毒接种鸡胚绒毛尿囊膜有白色的痘斑出现,接种PK-15和BHK-21细胞出现典型的细胞病变,毒价(TCID50)为10-6/mL,且能被PRV阳性血清中和;将病毒给家兔注射后出现典型的伪狂犬病症状并导致死亡。通过上述试验结果证明,该分离毒株为伪狂犬病毒。     

猪伪狂犬病病毒的分离鉴定

通过鸡胚接种和鸡胚成纤维单层细胞培养相结合的方法从江西省某猪场死亡仔猪的脑、肺脏中分离到一株病毒。该病毒接种家兔48 h后开始表现不安,呈奇痒为特征的神经症状并死亡。病毒能在鸡胚绒毛尿囊膜上形成痘斑,在鸡胚成纤维细胞中增殖并使细胞出现病变、死亡。电镜观察到病毒粒子呈圆形,囊膜清晰可见,直径130~170 nm。根据已发表的伪狂犬病病毒(PRV)gE基因的序列,设计并合成了一对引物,采用PCR方法可扩增特异性953 pb DNA片段。证实分离的病毒株为伪狂犬病病毒,命名为伪狂犬病病毒GN0605株。