核桃JrLFY基因表达载体的构建及工程菌的筛选

为了研究核桃JrLFY基因的功能,利用RT-PCR技术扩增JrLFY基因ORF,设计含NdeⅠ/KpnⅠ酶切位点的引物获得该基因CDS区片段,用限制性内切酶NdeⅠ/KpnⅠ双酶切p RI 101-AN表达载体,利用In-Fusion技术成功构建p RI 101-AN·JrLFY表达载体,并将该表达载体转化农杆菌GV3101感受态细胞,成功获得工程菌,为其基因缺失或过表达等试验提供技术支持。     

核桃外果皮色素的特性分析

【目的】研究分析核桃外果皮色素的特性,为核桃外果皮的开发利用提供依据。【方法】以核桃外果皮为原料,经碱提酸沉法初步提取纯化色素,鉴定其主要化学成分,并研究pH、加热时间、增稠剂、辅色素对核桃外果皮色素的影响,以及核桃外果皮色素在不同干燥条件下的保存稳定性。【结果】核桃外果皮色素主要成分有生物碱、酚类、黄酮类、醌类等化合物;色素在碱性条件下显色效果较好,而加热易导致色素褪色;增稠剂黄原胶和辅色素没食子酸、葡萄糖、酪氨酸对核桃外果皮色素有一定的增色作用;冷冻干燥制备的核桃外果皮色素较真空干燥和热风干燥更稳定。【结论】辅色素和干燥方法是影响核桃外果皮色素增色效果和稳定性的主要因素,在应用加工过程中应选择利于核桃外果皮色素增色和稳定保存的辅色素与干燥方法。     

核桃叶柄体细胞胚胎发生及其细胞学观察

本试验采用组织培养方法诱导核桃叶柄体细胞胚胎发生,并对不同条件下产生的愈伤组织进行了细胞学观察。结果证明,核桃叶柄体细胞胚胎发生合适的培养基为:DKW 附加KT 2.0 mg/L、IBA 0.02 mg/L、谷氨酰胺250 mg/L、水解酪蛋白100 mg/L、20%硫代硫酸钠5 mL/L、蔗糖30 g/L、琼脂7 g/L。外植体接种方向以叶柄形态学上端露在空气中下端埋入培养基为宜。显微观察证明胚性细胞内出现大最油滴,非胚性细胞内则无油滴出现。     

核桃枝条电阻率与生长势的关系

探讨枝条电阻率作为核桃矮化性预选指标的可能性,为选择核桃矮化砧木提供理论依据。以核桃6年生不同品种嫁接树和3年生实生树为试材,研究了枝条电阻率与生长势的关系。结果表明:不同核桃品种嫁接树枝条电阻与生长势没有明显的相关性,但晚实核桃品种枝条电阻率大于早实品种。不同品种的核桃实生树枝条电阻分别与株高增长量、干周增长量、株高、干周呈显著正相关。枝条电阻可作为核桃实生树生长势的预选指标。     

不同栽培措施对早实核桃温185一年生枝条抗寒力的影响

[目的]研究不同栽培处理对新疆早实核桃温185(Juglans regia L.)枝条抗寒力的影响,从安全越冬的角度初步提出促进抗寒力的栽培措施基本参数,为制定合理的技术标准提供理论依据.[方法]设置4年生温185核桃的生长后期水肥控制、修剪调控和生长延缓剂处理共24个田间栽培处理,通过测定和分析各处理的田间冻害指数、一年生枝条-24℃胁迫的相对电导率、枝条组织活力、可溶性糖含量、游离脯氨酸含量和束缚水/自由水6个指标,以此评价不同栽培处理对枝条抗寒力的影响.[结果]田间冻害调查与室内抗寒力生理指标测定结果基本一致,适宜的生长延缓剂处理促进枝条可溶性糖与脯氨酸含量积累;生长后期浇水对枝条可溶性糖含量和束缚水比例影响较大;冬灌对可溶性糖含量影响较大;生长后期追肥和修剪可调控枝条束缚水/自由水.[结论]使用12 g/株的多效唑、生长季合理修剪、8月中旬和9月中旬浇水2次、8月底追施磷钾肥400 g/株·次、10月中旬冬灌等单项措施,均能不同程度的提高4年生温185核桃枝条抗寒力.     

一品红转化酶基因片段的克隆和序列分析

根据植物酸性转化酶基因的保守区序列,设计1对PCR引物,以一品红基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增出长约500 bp的DNA片段,克隆入pM D-18T载体,测序结果表明:获得1个一品红酸性转化酶基因家族的成员,该基因片段长523 bp,编码173个氨基酸,属于开放阅读框的一部分,不含内含子。在G enB ank中进行同源性检索的结果表明,该成员编码的氨基酸与其他植物细胞壁酸性转化酶编码的氨基酸同源性较高。     

核桃无融合生殖研究初报

通过去雄花和雌花套袋隔离,研究了我国１１个核桃品种（系）的无融合生殖现象。结果表明,在供试的１１个核桃品种（系）中,其中有４个品种（系）具有一定的无融合生殖能力,无融合生殖品种占供试品种（系）的３６．４％。４个无融合生殖品种（系）的无融合生殖率在１．５％～１３．０％之间,并表现出不同年份上的差异。     

不同部位芽片对核桃方块形芽接成活及生长的影响

为改进栽培措施,提高核桃方块芽接成活率,用香玲核桃枝条不同芽位的芽片作试材,研究了不同部位接芽对核桃方块形芽接成活及生长的影响.结果表明:5月29日、6月5日和6月12日嫁接时,下部接芽的成活率分别为91.4%、91.8%和90.5%,中部接芽的成活率分别为97.9%、97.5%和95.5%,上部接芽的成活率分别为93.0%、94.7%和92.2%.嫁接成活率均为中部芽最高,可显著高于其他部位接芽,上部次之,下部最低.嫁接后第10、15、20 d,中部芽片的嫁接苗生长最快,上部次之,下部最慢.     

核桃青皮抑真菌物质的分离鉴定与抑菌活性

[目的]分离鉴定出核桃(Juglans regiaL.)青皮中对植物病原真菌起抑制作用的化合物,并评价其抗菌活性.[方法]采用生长速率法依次测定核桃青皮乙醇粗提物,石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯萃取物以及石油醚相分离流分和活性化合物对葡萄蔓枯病菌(Cryptosporella viticola)等植物病原真菌的抑菌活性;结合抑菌活性追踪,采用硅胶柱层析、制备薄层层析分离纯化活性组分,核磁共振波谱(NMR)对活性物质进行结构鉴定.[结果]核桃青皮乙醇粗提物和3种萃取物以及石油醚萃取相的分离流分,分别对供试的10种、4种和3种植物病原真菌有抑制活性;流分Fr1-4和Fr1-5对葡萄蔓枯病菌(Cryptosporella viticola)、葡萄溃疡病菌(Botryosphaeria dothidea)和辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)3种病原真菌的抑制率显著高于其他4个流分,流分Fr1-4对葡萄蔓枯病菌的抑制率达70.08％;分别从Fr1-4和Fr1-5鉴定出1个环状二芳基庚烷化合物胡桃素和4,8-二羟基-1-四氢萘酮(胡桃酮);胡桃素对供试的葡萄蔓枯病菌和辣椒疫霉病菌均显示出抑制活性,对其菌丝生长抑制中浓度(EC50)分别为0.060、0.124 mg/mL.[结论]核桃青皮乙醇粗提物及其石油醚、三氯甲烷萃取物均对供试的植物病原真菌有良好的抑制活性,从中分离获得的胡桃素对葡萄蔓枯病菌有显著抑菌活性,对辣椒疫霉病菌有中等的抑菌活性.     

罗甸小米核桃叶绿素含量测定方法研究

研究了直接浸提法与Arnon法从罗甸小米核桃叶片中提取叶绿素的效率,并比较了两种方法的优劣。结果表明：用丙酮、乙醇浸提法提取叶绿素的效率比丙酮、乙醇Arnon法高,以乙醇与丙酮体积比1∶1的混合溶液为浸提剂时,叶绿素浸提效率最高;分别在温度50℃、料液比1∶50、浸提5 h的条件下浸提效果最好;在温度为50℃、液料比为1∶40的条件下提取6.5 h,叶绿素的提取效率最高,且3个主要因素对浸提结果影响次序依次为：浸提温度〉浸提时间〉浸提料液比。     

罗甸小米核桃抗氧化保护酶活性和丙二醛含量对干旱胁迫的响应

以罗甸小米核桃为研究对象,研究在不同水分处理下罗甸小米核桃叶片3种抗氧化保护酶(SOD、POD、CAT)活性及丙二醛(MDA)含量的变化。结果表明:随着干旱胁迫时间的延长,罗甸小米核桃保护酶SOD活性呈上升趋势,POD活性呈先上升后下降再上升趋势,CAT活性除重度胁迫外均呈W型变化,MDA含量除重度胁迫表现出先升后降之外,其他处理均呈降-升-降的变化。在重度干旱胁迫(W3)下,罗甸小米核桃各类保护酶的活性在总体上均高于正常供水、轻度干旱胁迫和中度干旱胁迫。干旱胁迫初期,CAT活性变化趋势与POD活性相反,说明3种保护酶能够相互配合协同作用,以降低膜脂过氧化程度,减少水分胁迫造成的伤害。     

四川核桃种质资源坚果的数量性状变异及概率分级

以四川金堂、汉源和石棉3个县的核桃种质资源圃的97份核桃坚果为研究对象,考察腹径、横径、果高、三径平均值、果形指数、单果重、仁重、出仁率、壳厚、粗脂肪和粗蛋白等11个主要数量性状。结果表明：四川核桃遗传多样性极其丰富,坚果性状的变异系数变幅为9.92%~32.94%; 仁重、单果重、粗蛋白和壳厚具有相对较高的变异系数,可作为核桃良种选育的重要参考指标; K–S检验结果表明,11个数量性状的Sig值均大于0.05,符合正态分布。对符合正态分布的数量性状用(X－1.281 8S)、(X－0.524 6S)、(X－0.524 6S)、(X－1.281 8 S) 4个点分级,1~5级出现的频率分别为10%、20%、40%、20%、10%,符合正态分布。     

河北省太行山中南部核桃栽植时期及栽植技术研究

于2001年10月~2003年10月连续进行了不同栽植时期以及栽植技术对核桃幼树成活及生长发育影响的研究。结果表明:秋栽后用聚乙烯醇涂干处理,成活率高达95%以上,翌春萌芽比春栽早10 d以上,新梢生长速度快,春季抽干高度短,平均枝条长可达45 cm以上,是最好的技术组合;秋栽不涂干处理,成活率较低,不足60%,并且抽干高度长,发枝部位低;春栽成活率高,但是缓苗期长,新梢发育慢,平均枝条长短,仅为20~30 cm。     

核桃林主要外生菌根菌生长研究

为探索核桃林外生菌根菌生长发育机制,为核桃林的经营提供理论与实践基础,采用温度、湿度、pH值等方面的调控对比实验进行了美味牛肝菌、紫色马勃、鸡油菌等外生菌根菌对核桃浸染的根际菌根形成及菌丝体生物量对比研究.研究结果表明,无论是菌根接种组还是非接种组(CK)菌根感染率均达到100％;各处理的最优组合为温度20℃、相对湿度70％、pH值6.0,菌丝体生物量均值为127.81 mg.     

基于AFLP分子标记的核桃核心种质的构建

【目的】构建核桃核心种质以便更好地保存、评价和利用丰富的核桃种质资源。【方法】利用AFLP分子标记,对131份核桃原始种质采用逐步聚类法建立候选核心种质,比较不同候选核心种质的多态性位点数、多态性位点百分率,结合形态学指标及地理来源,最终确定核桃核心种质,并进行评价。【结果】建立的核桃核心种质保留了原始种质10%的样品,分别为河北的天桥1号、陕西的西洛2号和西林1号、山西的晋龙1号、山东的丰辉、辽宁的辽宁8号和辽73013、新疆的温185、河南的绿波、北京的北京746、美国引进品种维纳、日本引进品种清香和朝鲜的品种安边1号。根据遗传多样性评价结果,与原始种质相比,核心种质的多态性位点保留率为75.4%。【结论】构建的核桃核心种质能较大程度地代表原始种质的遗传信息,符合核心种质要求。     

新疆核桃种质资源遗传多样性AFLP分析

用AFLP技术对取自新疆温宿、巩留、和田、若羌、叶城、库车、阿拉尔的122份核桃种质材料进行了遗传多样性和亲缘关系的分析,筛选出7对多态性引物对122份核桃种质材料进行选择性扩增,共获得21989条扩增带,其中8810条具有多态性,平均多态检出率为40．1％。根据AFLP标记的结果,用DPS统计软件分析了核桃种质间的遗传相似系数、遗传距离,并对分析结果进行UPGMA聚类,聚类结果将122份核桃种质材料分为两大类群。第一类群被分为5个亚类,“温81”单独成一个亚类;第二类群被分成2个亚类,叶城的“千年核桃王”和阿拉尔的“阿7”独立成亚类;122份材料的遗传距离变幅在0．12000—0．93103之间。聚类结果很好地将栽培种质和古老种质分开,表明新疆不同地区的核桃种质间存在明显的遗传多样性。还揭示了“温8１”、“温179”等优良栽培种质及南疆一些古老核桃种质的遗传基础。     

一株核桃树内生真菌的分离鉴定及活性研究

[目的]从核桃树皮内分离筛选具抑菌活性的内生真菌菌株。[方法]核桃树皮经自来水冲洗后置于培养基以产生真菌菌株,对获得的菌株进行形态学观察及抑菌活性测试。[结果]从核桃树皮内分离到一株产广谱、高活性抑菌物质的内生真菌。经测定对细菌、植物病原真菌和皮肤致病真菌共24种病原微生物有不同程度的抑制作用。形态特征表明,该菌株与拟青霉属Paecilomyces Bainier中的淡紫拟青霉Paecilomyces lilacinus的特征基本一致,ITS序列分析显示本菌株与各淡紫拟青霉同源性都高于99%,因此将菌株JY-1024命名为淡紫拟青霉Paecilomyces lilacinusJY-1024。[结论]该研究首次从核桃树皮内分离得到淡紫拟青霉并首次报道了其抑菌活性。