豌豆根瘤菌耐酸性评价筛选

研究了我国豌豆主产区豌豆根瘤菌的耐酸性,以期为选育优良菌株提供种质资源。对分离自食用豆产业技术体系各试验站示范区的豌豆根瘤菌进行了耐酸性的抗逆性试验。结果表明,豌豆根瘤菌菌株耐酸性鉴定的适宜pH值为3～4。以pH值为3.5对25份豌豆根瘤菌菌株进行耐酸性筛选,初步筛选出8个耐酸能力较强的菌株,分别为R19、R14、R25、R13、R27、R21、R18、R26,其中菌株R19的耐酸能力最强。     

豌豆根瘤菌SCAU P10的接种效果、促生特性及系统发育研究

【目的】为获得共生固氮能力强、抗逆促生效果好、宿主识别范围广的高效豌豆根瘤菌。【方法】以前期初筛的优良豌豆根瘤菌SCAU P10为材料,在四川省成都市金堂县和广元市剑阁县验证SCAU P10的田间接种效果,采用常规方法测定菌株的抗逆促生能力,用水培法研究菌株与四川主要豌豆品种“长寿仁”“中豌6号”“无须豆尖1号”“云豌91号”的共生匹配性,通过16S rRNA基因、持家基因、共生基因序列分析研究菌株的系统发育地位。【结果】金堂县豌豆接种供试菌株SCAU P10的鲜豌豆籽粒（青豌豆）显著增产32.3%,两试验地接种供试菌株的根瘤数、株高、绿肥产量（植株鲜重）、饲草产量（植株干重）、植株氮钾积累量均较不接种对照（CK）显著增加。抗逆促生特性试验表明,菌株耐酸耐碱能力均较强,可在pH 4.0～10.0条件下生长,耐盐能力较差,仅能在NaCl浓度0.01%～0.6%条件下生长,能分泌生长素（IAA）,具有较强的溶磷（卵磷脂、磷酸钙、磷酸铁、磷酸铝）和溶钾能力。匹配性试验表明,供试菌株SCAU P10与四川4个主要豌豆品种均高效匹配。16S rRNA基因、持家基因和共生基因综合分析表明,菌株SC...     

豌豆根瘤菌ohrB基因的抗氧化和共生固氮表型

采用基因敲除构建豌豆根瘤菌ohr B基因突变株,研究突变株的抗氧化和共生固氮表型。结果表明:ohr B基因不影响菌株在自生培养条件下的生长能力,但对氢过氧化枯烯(cumene hydroperoxyde,Cu OOH)、过氧化氢(H2O2)、次氯酸钠(Na Cl O)等氧化物敏感,且在Cu OOH胁迫下,相比野生型菌株,突变株的存活率显著下降。荧光定量RT-PCR结果显示,豌豆根瘤菌ohr B基因表达不受H2O2诱导,且ohr B基因的缺失对其他抗氧化基因的表达没有影响。共生实验表明,ohr B基因对根瘤菌共生固氮能力及根际定殖能力没有影响,但在7 d瘤龄的豌豆根瘤类菌体中表达水平显著提高,并对根瘤菌结瘤能力有影响。ohr B基因虽对豌豆根瘤菌的自生生长、共生固氮、根圈定殖没有影响,但在抗氧化及竞争结瘤中发挥重要作用。     

花生根瘤菌的分离筛选及应用

【目的】分离筛选高效结瘤固氮的花生根瘤菌,为花生根瘤菌的田间推广应用提供理论依据和候选菌种。【方法】采用植物捕获法从田间采集的土样中分离纯化根瘤菌,扩增其16S rDNA序列进行分子鉴定。经回接试验和匹配试验筛选优良菌株及最佳共生组合,并通过土壤盆栽田间试验探究优良菌株的接种效果。【结果】共分离纯化出15株花生根瘤菌,均属于α-变形菌纲的慢生根瘤菌属（Bradyrhizobium）。回接试验筛选出2株共生固氮性状优良的花生根瘤菌GDHS-5和GDHS-14。匹配试验表明这2个菌株具有广谱结瘤性,GDHS-5与粤油901的匹配效果最好,GDHS-14次之。土壤盆栽条件下接种GDHS-5显著提高了粤油901的地上部分高度、根瘤数量和根瘤鲜重（P<0.05,下同）,而接种GDHS-14与不接种对照（CK）无显著差异（P>0.05,下同）。田间条件下接种GDHS-5分别使单株荚果数、产量和花生蔗糖含量显著增加35.82%、9.92%、165.88%,接种GDHS-14与CK无显著差异。【结论】花生根瘤菌GDHS-5和GDHS-14共生固氮表现优异,其中GDHS-5能高效共生固氮,具...     

豌豆根瘤菌共生质粒pJB5JI对费氏中华根瘤菌共生固氮作用的影响

通过两亲本接合转移,将豌豆根瘤菌T83K3共生质粒pJB5JI转入费氏中华根瘤菌HN01及其质粒缺失突变株中,获得8个转移接合子,其中受体为HN01和pSfrHN01a缺失突变株HND28的接合子能够在大豆上形成有效根瘤,无论是人工传代还是与植物共生,外源质粒pJB5JI与受体菌内源质粒均能稳定存在,但不能在豌豆上结瘤,与大豆共生固氮能力和竞争结瘤能力与受体菌亲本相比没有明显变化.消除共生质粒的突变株HND29和共生质粒与pSfrHN01a质粒均消除的突变株HND100作受体菌的接合子,既不能在大豆上结瘤,也不能在豌豆上结瘤.研究结果表明,pJB5JI与HN01的3个质粒属于不同的不相容群.pJB5JI在HN01中的表达功能可能受到受体菌的共生质粒和染色体基因的共同影响.     

青海豌豆与蚕豆根瘤菌的初步研究

从豌豆和蚕豆植株根瘤中分离纯化根瘤菌２４株，以豌豆Ｖｐ－１，Ｖｐ－４和蚕豆Ｖｆ－２，Ｖｆ－４，Ｖｆ－５，Ｖｆ－８菌株结瘤较好，随机取Ｖｆ－２，Ｖｆ－４，Ｖｆ－５，Ｖｆ－８，Ｖｐ－１，Ｖｐ－４分离菌株试验表明，中性偏碱范围结瘤较好。在ｐＨ４．０的条件下，对植株生长、结瘤有明显抑制作用；在ｐＨ９．０条件下，除接种蚕豆Ｖｆ－５和豌豆Ｖｐ－１菌株的植株下受影响外，其余均不同程度地受到抑制。盐浓度在０．０１     

相思树根瘤菌优良抗逆性菌株的筛选

通过对10个根瘤菌菌株的温度、酸碱度、盐分、干旱和铝离子胁迫试验,筛选出在8℃低温时仍可生长的具有较强耐低温能力的茵株HJ01、HJ03、HM、LZJ和ZG;在pH 4的酸度条件下,生长良好的具有较强耐酸能力的茵株LZJ;在2.5NaCl处理下生长较好,具较强耐盐能力的菌株HJ02、HJ03和HM;在20PEG 6000处理下生长良好,具较强耐干旱能力的菌株JJ、HJ02和HJ03;在1000 μmol·L-1铝离子处理下仍可生长,具较强抗铝毒能力的菌株JJ.此外,不同菌株的耐胁迫能力差异较大,其抗逆能力与宿主来源无明显相关性,与土壤肥力关系密切.     

豌豆根瘤菌高效菌株的筛选

通过18株根瘤菌菌株的豌豆接种筛选试验,对植株干质量、结瘤数、株高以及开花结荚数等生长性状指标进行比较分析,发现菌株Hbu610006、Hbu610015的植株干质量相比空白对照分别增产82.35%、79.41%,根瘤数分别比对照增加67.43%、231.20%,其株高与对照相比,分别提高15.02%、13.75%。此外,菌株Hbu610006、Hbu610015的开花结荚情况也较其他菌株表现突出。因此,筛选出Hbu610006、Hbu610015这2株能与花叶豌豆高效结瘤固氮的菌株。     

牧草型木豆筛选试验初报

通过对37份牧草型木豆材料的农艺性状和品质性状进行调查及相关性分析,结果表明:7份材料的出苗率较对照的高,大部分材料的成活率达100%,平均株高变幅为114.4~178.6cm,主茎分枝数变化为8.0~24.8条;生物产量变化为1235.2~21439.3kg/hm2,除ICP 14145和ICPL 20092外,其余材料生物产量均高于对照品种;百粒重变化在7.10~18.60g之间,嫩枝叶含水量变化在71.14%~80.37%之间。此外,不同参试材料的单宁含量、蛋白质与可溶性总糖含量变化较大。相关性分析结果表明,牧草型木豆的生物产量与出苗率、株高、含水量呈极显著正相关,与单宁含量、蛋白质含量呈极显著负相关,与百粒重呈显著负相关。因此,根据不同育种要求,注意对不同性状进行优先选择,选择植株高大、粒型小、出苗率高的木豆材料,较易获高产量,但须注意与枝叶品质的协调。     

不同类型土壤中大豆与根瘤菌的匹配性研究

结合黑龙江省大豆主产区的生态环境,从而筛选出适宜当地土壤条件的大豆与根瘤菌的共生体。结果表明,处理S2V1R3和S1V2R1的产量最高,二者与处理S1V1R3间的差异达1%显著水平,为有效接种提供了一定的试验依据。     

机油降解菌的筛选及其特性研究

从福州祥坂污水处理厂的活性污泥中分离到12株机油降解菌,经复筛得到1株具有较强降解能力的菌株(命名为FZ5),初步鉴定为产碱菌属(Alcaligenessp.),并对菌株FZ5的生长和降解特性进行了研究.结果表明,该菌株最佳生长条件为:温度30℃,pH7.5,培养基装量为250 mL三角瓶装60 mL.在N46机油初始质量浓度为3.5 g.L-1时,培养48 h的降解率为21.86%,培养120 h的降解率为23.96%.此外,降解的广谱性研究发现,该菌株能降解链烷烃,对环烷烃和芳香烃不能降解.     

根瘤菌和丛枝菌根真菌单双接种对不同品系大豆生长的影响

为探索丛枝菌根真菌（abuscular mycorrhiza fungi, AMF）和大豆根瘤菌单双接种效果及其与不同品系大豆的匹配性,采用蛭石混土作为基质在光照培养室（26 ℃,16 h光照/8 h暗期,相对湿度75%）进行盆栽试验,探究根瘤菌与AMF单接种和双接种对我国大部分区域种植的10种不同品系大豆生长的影响。结果显示,根瘤菌Bradyrhizobium japonicum USDA110和菌根真菌Rhizophagus irregularis均能侵染10种品系大豆植株,形成共生结构。单接种根瘤菌和菌根真菌均能显著提高大豆地上部鲜质量,其中单接种根瘤菌能使品系大豆119、851、921植株地上部鲜质量增加102%~429%,单接种菌根真菌也能使大部分品系大豆地上部鲜质量增加39%~255%。根瘤菌和菌根真菌双接种条件下,菌根真菌的侵染共生表现出共生定殖延迟的现象;菌根真菌存在时,品系大豆985、851、115根系的单个根瘤体积增大,固氮酶活性增强。因此,相同接种方式对不同品系大豆影响不同,相同品系大豆经过不同接种方式处理,长势存在差异;985、115品系大豆采用双接种方式最佳,167、509、921、187品系大豆采用单接种根瘤菌方式效果最佳,119、909、045则可采用单接种根瘤菌或菌根真菌来提升产量。     

甘肃不同生态区域苜蓿根瘤菌表型多样性分析

对甘肃不同生态气候区域筛选出的促生能力好的31株分离自‘阿尔岗金’(Medicago sativa‘Alogon-quin’)和‘陇东苜蓿’(Medicago sativa‘Longdong’)2个紫花苜蓿品种的根瘤菌株,进行性状测定和聚类分析.结果表明:31株供试菌中,DL67、GL16、QA33B、QL31B、WA24和WL27菌株综合功能最强;聚类分析结果表明,31株供试菌和3株对照标准菌株均为中华根瘤菌属(Sinorhizobiumsp)根瘤菌,但GA26菌株与其它33株菌株分属不同类群.     

高产蛋白酶菌株的分离、筛选及鉴定

为了降解豆粕中的大分子蛋白为大豆肽,利用酪蛋白平板法作为筛选模型,从土壤中分离和筛选高产 蛋白酶的菌株,选取水解圈直径与菌落直径比值较大的菌株液体发酵后进行蛋白酶活力和大豆肽转化率的测定,结 果得到1 株蛋白酶活力和大豆肽转化率较高的菌株B1,其酶活力达到111.8 U/mL,大豆肽转化率达到37.2%。对该 菌株进行形态观察和生理生化特征分析,初步将其鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.）。     

高效木质素降解菌株的分离筛选

为筛选能高效降解木质素的菌株,从31份采集的朽木和土壤样品中分离纯化获得155株菌;将纯化获得的菌株接入到含愈创木酚的选择培养基上进行初筛,观察其颜色变化,根据菌落圈和变色圈直径的比值,筛选出9株可降解木质素的菌株;将这9株菌接入产酶培养基中进行液体静止培养并测定木质素酶活力,最终获得2株高产木质素酶的真菌菌株14-7和15-1.将这2株真菌培养7 d后,所产木质素过氧化物酶、锰过氧化物酶和漆酶的活力分别为0.087、0.060、0.144和0.070、0.059、0.000U·mL-1.     

不同根瘤菌、大豆品种、土壤类型对固氮酶活性的影响

本研究结合黑龙江省生态环境,采用盆栽试验方法分别在黑土和草甸土中对大豆品种V1和V2接种根瘤菌株R1、R2和R3,在盛花期通过乙炔还原法测定离体根瘤的固氮酶活性。单因素效应对固氮酶活性的影响高于因素间的作用,菌株与品种两因素间的交互作用大于其它交互作用。结果表明,处理R1V2S2和R1V1S1的固氮酶活性最高,二者都极显著高于两种阴性处理CK。     

纳豆芽孢杆菌的分离鉴定及纳豆激酶高产菌株的筛选

分别从北京、大连和日本三个产地的纳豆食品中分离纯化得到了9个具有纳豆芽孢杆菌典型菌落特征的芽孢杆菌单菌落,与模式菌株纳豆芽孢杆菌N1株分别从菌落形态、个体形态和生理生化试验三方面进行对比鉴定,结果表明,其中5株芽孢杆菌为纳豆芽孢杆菌。将这5株纳豆芽孢杆菌分别在酪素平板上划线初选,得到了298株具有蛋白酶活力的菌株,从中筛选出活性最高的5株命名为:NB、NC、ND、NE和NF,测定各株发酵液的纳豆激酶酶活力,结果表明NB、NC和ND3株具有较高纳豆激酶活性,酶活力分别达到了1041.37、1125.13和1804.64IU·mL-1。     

阿维菌素B1a组分高产菌株的高通量选育

为筛选阿维菌素高产菌株,建立了阿维菌素高产菌株的高通量初筛及复合诱变技术选育高产菌株的方法。初筛首先采用24孔板培养突变株,发酵培养5 d,甲醇直接浸提固体培养物,最后利用96孔板-酶标仪检测浸提液在紫外波段245 nm吸收。以阿维链霉菌(Streptromyces avermitilis)编号为AV-X-95的阿维菌素产生菌作为出发菌株,通过紫外线(UV)照射45 s和亚硝基胍(NTG)处理60 min的组合诱变方法对出发菌株的孢子悬液进行了连续的诱变处理。研究结果表明,1 728株突变子的经高通量初筛后得到8株高产菌株,经摇瓶复筛和稳定性考察得到高产菌株AW4-329,其B1a产量较出发菌株提高了15.1%。