用ELISA方法检测猪血清中PRRSV抗体

应用ELISA方法对信阳市10县区86个规模养殖场未进行PRRSV免疫接种的1 329份血清进行PRRSV抗体检测。结果显示,平均阳性率为49.5%,其中阳性率最高县区为65.9%。阳性率最低县区为27.8%;长白猪感染率最高为56.3%,本地淮南猪感染率最低为30%;小规模猪场感染率较高,大规模猪场感染较低。不同年龄段猪的感染率差异不大。     

间接ELISA检测猪血清中的猪囊虫抗体

猪囊虫病是一种危害严重的人畜共患寄生虫病,妨害公共卫生和养猪生产,在我省城市和农区分布很广。我们于２０００年６月用间接ＥＬＩＳＡ对我省平安县和大通县部分户养猪进行了血清中猪囊虫抗体的检查,现将结果报导如下。１材料与方法１．１材料１．１．１血样：采自平安县和大通县农村户养的３５９份２到５月龄的猪只,采血样后当即分离血清并冷冻,送实验室待检。１．１．２试剂：抗原,酶标记物,标准阳性血清和标准阴性血清稀释液和冲洗液由兰州兽医科学研究所提供,其它试剂均由市场购得,为化学纯有效试剂。１．１．３ＥＬＩＳＡ检…     

用ELISA检测猪血清中抗钩端螺旋体抗体

钩端螺旋体病是家畜特别是猪的一种在经济上有破坏性的疾病。其血清学诊断方法包括荧光抗体、凝集溶解、补体结合、血凝、溶血、肉眼凝集试验和显微镜凝集试验(MAT)。MAT 是优选的常用诊断试验,但该法操作费时、危险,有血清变型特异性,判读带主观性。因此需要一种对钩端螺旋体病客观的属特异性诊断     

ELISA和LAT检测猪血清弓形虫抗体的比较

应用弓形虫重组蛋白rMIC3为抗原建立的酶联免疫吸附试验(ELISA)和乳胶凝集试验(LAT)2种方法,平行检测来自36个猪场的471份猪血清中的抗弓形虫特异性抗体。结果显示,ELISA和LAT对母猪弓形虫抗体的阳性检出率分别为42.86%(21/49)和44.90%(22/49),2种方法的阳性检出符合率为95.45%(21/22);对育肥猪的阳性检出率分别为42.06%(135/321)和43.61%(140/321),2种方法的阳性检出符合率为93.57%(131/140);对仔猪的阳性检出率分别为29.07%(30/101)和45.54%(46/101),2种方法的阳性检出符合率为63.04%(29/46)。结果表明,ELISA和LAT可用于猪弓形虫病的诊断和血清学调查,LAT更适合于仔猪弓形虫病的检测。     

应用SPA—ELISA法检测猪血清弓形体抗体的报告

1979年 Madore 开始把葡萄球菌 A 蛋白用于酶联免疫吸附试验(SPA—ELISA),现已广泛应用于血清学诊断,由于 SPA 具有与人及多种哺乳动物血清 IgG 的 Fc 段非特异相结合的特性,在 ELISA 中代替第二抗体,但它与多种哺乳动物各种属的亲和力不同,其中与猪的 IgG 亲和力最强,我们应用 SPA-ELISA 检测猪血清弓形体抗体,并与间接血凝法(IHA)进行比较结果满意,现报道如下。     

Dot—ELISA检测猪血清中伪狂犬病病毒抗体方法的建立和评价

建立了检测猪血清中伪狂犬病病毒(PRV)特异抗体的斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA),并通过对人工感染和自然感染猪血清以及野外试验猪血清的检测与微量血清中和试验(MSN)作了比较。结果表明, Dot-ELISA具有特异性和敏感性,能检测出猪血清中PRV特异性抗体,与MSN检出符合率在95％以上。经统计分析,差异不显著(P>0.05)。Dot-ELISA可检出早期感染猪血清中PRV抗体,可应用于猪伪狂犬病的临床实验诊断。     

单抗捕获ELISA检测PRRSV抗体的方法的建立

以国内刚刚研制出的ＰＲＲＳＶ单克隆抗体为基础，建立了检测ＰＲＲＳ病毒抗体的单克隆抗体辅获抗原的ＥＬＩＳＡ法，其单抗包被浓度为１．１６μｇ／ｍＬ，粗提病毒反应浓度为１６．５０μｇ／ｍＬ，血清稀释度为１：４０。经与中和试验以及进口ＥＬＩＳＡ试剂盒比较，证明该法敏感性高，特异性良好，是一种有应用前景的方法。     

检测PRRSV抗体的间接阻断ELISA方法的建立

用大肠杆菌BL21（DE3）pLysS表达PRRSV重组N蛋白作为包被抗原,建立检测猪群PRRSV抗体的间接阻断ELISA方法,并对临床上采集的256份猪血清样本进行检测,结果66份呈阳性,用IDEXXPRRSV抗体检测试剂盒检测,检出的阳性血清为63份,两者的符合率为98.8%。Western blot检测结果58份阳性,两者的符合率为96.9%。试验结果表明,本试验所建立的间接阻断ELISA方法具有良好敏感性和特异性,可用于PRRS流行病学调查和疾病的诊断。     

PRRSV抗体竞争ELISA检测方法的建立与标准化研究

以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N蛋白)基因的原核表达产物重组N蛋白为包被抗原,利用兔抗重组N蛋白血清和PRRS猪血清竞争该抗原,建立间接竞争ELISA方法检测PRRS抗体。经研究确定重组N蛋白的包被浓度为0·3μg/mL,检测血清不用稀释,兔抗重组N蛋白血清的工作浓度为1∶3000,酶标抗体的工作浓度为1∶10000,包被液为0·05mol/L、pH9·6的碳酸盐缓冲液。该方法特异性强,稳定性和重复性好,整个检测过程可在3h内完成。以IDEXX试剂盒的检测结果为参照标准,该方法的敏感性为79·76%,特异性为90·9%,符合率为83·59%。将该方法按试剂盒要求标准化,4℃放置5个月,检测效果不变。     

应用EDTA血清凝集试验检测猪血清中布鲁氏菌抗体的观察

本文介绍了一种检测猪血清中布鲁氏菌抗体的血清学方法—EDTA(乙二胺四乙酸)血清凝集试验。并应用该试验检测了215份猪血清,并与常规血清凝集试验(SAT)配对试验进行了比较,结果发现在补体结合试验(CFT)阳性的猪血清中,两种试验阳性检出率相同(93%);而在CFT阴性猪血清标本中,EDTA和SAT法的阴性检出率分别为84%及72%。经统计学X~2测验(P<0.01)有极显著性差异。     

两种猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒对疫苗免疫猪血清抗体检测的比较试验

为了比较两种猪瘟病毒抗体检测试剂盒对猪瘟疫苗免疫抗体的检测结果,本试验将27头猪瘟抗体阴性仔猪免疫猪瘟活疫苗后7、10、14、17、20、23、27、30、34 d共9个时间点采血,分别用两种猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒进行抗体检测,同时采用OIE指定方法-荧光抗体病毒中和试验对检测结果进行验证。结果表明,虽然两种试剂盒均可在免疫后30 d 100%检测到免疫猪体内的猪瘟抗体,但国产试剂盒在疫苗免疫后第10天便可在6/21猪体内检测到猪瘟抗体,20 d时抗体检测全为阳性,而美国IDEXX公司的试剂盒在疫苗免疫后27 d才在11/21猪体内检测到猪瘟抗体,30 d时才全部变为阳性,而两种试剂盒对6头阴性对照猪血清连续跟踪检测34 d均为阴性。由此可以得出结论:国产试剂盒在疫苗免疫后的早期抗体检测中敏感性明显高于IDEXX公司的试剂盒。     

阻断ELISA与中和试验检测猪瘟疫苗免疫猪血清抗体的比较

应用阻断ELISA和中和试验2种不同的方法对猪瘟疫苗免疫前后的猪血清抗体进行了检测,在所检测的6头仔猪免疫前和免疫后的12份血清中,2种方法的检测结果相符.应用Western blot对部分血清进行了验证,结果与2种方法检测结果一致,表明阻断ELISA和中和试验结果确实、特异,能真实反映免疫猪群的抗体水平.     

青海省部分地区调入仔猪PRRSV抗体ELISA检测

采用ELISA方法对外省调入青海省西宁、湟中、湟源、互助、乐都、循化和民和等七个地区的449份仔猪血清进行PRRSV抗体ELISA检测，结果显示被检血清免疫抗体阳性率为2．5％，感染抗体阳性率为8．9％。其中原产地为甘肃、四川、江苏、重庆的仔猪分别占总体猪的87．3％、5．4％、5．1％、2．2％，其血清的PRRSV免疫抗体阳性率分别为1．3％、0％、0％、60％，感染抗体阳性率分别为9．2％、0％、17．4％、0％，表明外省调入青海省的仔猪RRRS的总体免疫状况不是很好，感染情况较为严重，对此病的检疫防控力度还需进一步加强。     

双山村猪血清抗体抽样检测结果分析

为了掌握我区农村规模猪场和散养农户饲养的种猪、育肥猪、哺乳仔猪猪瘟、猪口蹄疫免疫抗体水平,猪蓝耳病、猪伪狂犬病阳性率,有重点地开展相应的免疫预防,制定科学合理的免疫程序,2011年4月毕节地区畜牧兽医科学研究所在纳雍县沙包乡双山村随机抽取春防一月后80份猪血清,进行了猪口蹄疫(FMD)、猪瘟(CSF)、猪蓝耳病(PRRSV)、猪伪狂犬病(PRV)抗体检测,现将检测结果报道如下。     

以PRRSV Nsp2-399重组蛋白为包被抗原建立PRRSV抗体ELISA检测方法

为了获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2-399重组蛋白,以及利用Nsp2-399蛋白建立PRRSV早期感染的ELISA检测方法,试验克隆、原核表达了PRRSV DY株(GenBank登录号为JN864948)Nsp2-399重组蛋白,同时利用该蛋白建立并优化了ELISA检测方法。结果表明:成功克隆表达了PRRSV Nsp2-399重组蛋白,并建立、优化了Nsp2-399 ELISA检测方法。优化后的Nsp2-399 ELISA的最佳抗原包被浓度为1μg/mL,血清最佳稀释度为1∶40,最佳封闭液为10%胎牛血清,酶标二抗的最佳工作稀释度为1∶4 000,最佳显色条件为37℃、15 min。猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪细小病毒阳性血清样品用建立的Nsp2-399 ELISA方法进行检测,S/P值均小于0.21,ELISA方法特异性良好。用本试验建立的ELISA方法和IDEXX ELISA检测试剂盒分别检测血清样品125份,总符合率为94.40%。说明成功建立了Nsp2-399 ELISA抗体检测方法,可用于PRRSV的抗体检测。     

应用ELISA检测鸡血清外源性白血病病毒抗体

应用ELISA检测南京,扬州等地7个鸡群鸡血清中禽白血病病毒(ALV)抗体。在被检的335份血清中,阳性170份,占51％,所检的7个鸡群,均有不同程度的阳性检出率。