表达NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体的构建

将新城疫病毒(NDV)F48E9株融合蛋白(F)基因1700bp克隆到真核表达载体pIRES中,构建成表达F基因的载体pIRESF,然后将包含F基因及其上游的内含子和下游的polyA的2900bpDNA片段再克隆入包含gB启动子的SK载体中,并使其克隆到gB启动子600bp的下游,最后将包含gB启动子和F基因表达盒3500bp克隆到包含MDVCVI988非必须片段US10的载体SK中。该研究为进一步在细胞中转染并获得表达F基因的MDVCVI988重组病毒奠定了基础。     

编码结构域Tt APuX25基因片段的分离与克隆

[目的]将Tt apux25基因片段克隆到表达载体pET21a(t)中。[方法]以热产硫化氢高温厌氧杆菌菌液为模板,根据编码结构域Tt APuX25的基因片段Tt apux25设计1对特异引物进行PCR扩增。将Tt apux25克隆到表达载体pET21a(+)中,筛选阳性克隆并对其进行测序鉴定。[结果]通过PCR扩增获得一个250～500bp的扩增片段。对获得的阳性克隆进行筛选和测序鉴定,发现所得阳性克隆为表达载体pET21a(+)中插入有序列正确的Tt apux25片段。阳性克隆中的重组质粒被命名为pEX25,并将其转化进表达宿主菌大肠杆菌Tuner感受态细胞中。[结论]该方法直接将Tt apux25基因片段克隆到表达载体pET21a(+)中,操作简便并取得了较好的效果。     

鸡、鹅肌肉生成抑制因子基因的克隆及序列分析

采用反转录．聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从鸡胚、鹅胚中扩增得到肌肉生成抑制因子基因,分别克隆到pGEM-T Easy载体中进行序列测定．结果表明,克隆得到的MSTN基因序列均由1128个核苷酸组成,MSTN基因序列同源性为94．6％,推导相应氨基酸序列的同源性达97．9％．     

猪Annexin A2基因真核表达载体的构建及表达

根据猪的Annexin A2基因序列设计引物,通过PCR方法扩增Annexin A2基因cDNA,并将其克隆到pGEM-T载体后进行测序分析,然后将测序结果正确的Annexin A2基因cDNA亚克隆到pEGFP-N1表达载体上,成功构建了表达载体.将表达载体瞬时转染Marc-145细胞,结果表明:表达载体pEGFP-N1 -ANXA2可以在Marc-145细胞中表达.     

利用重组PCR技术构建大肠杆菌肠毒养LTB—STI融合基因

利用重组PCR技术将从原始菌种中扩增得到的LTB、STI基因片段连续起来，构建了LTB-STI融合基因。并将其克隆到pUCm-T载体上，转化到大肠杆菌DH5a中，得到克隆T-LS，序列分析表明该克隆具有正确的基因序列和阅读框，具有起始密码子ATG和终止密码子TAA，可以插入到原核表达载体中进行表达。     

玉米淀粉分支酶sbe2a基因反义载体的构建及其转基因初步研究

应用PCR技术克隆了玉米淀粉分支酶sbe2a基因片段,并将其克隆到pMD18-T载体,对重组子进行PER检测和限制性内切酶分析,并进行序列比对.结果表明:克隆片段长度为562 bp.将该基因反向插入到pWGLL载体Aetin-pro启动子下游,构建高效反义表达载体,通过花粉管通道法将其导入玉米自交系"铁7922",经PCR检测初步证明外源基因已整合到玉米基因组中.     

苜蓿MtCDPK1基因序列分析、克隆及表达载体构建

[目的]克隆苜蓿MtCDPK1基因,对其进行序列分析,并构建其表达载体。[方法]根据MtCDPK1基因的全长序列设计引物来克隆该基因,并用生物信息学方法对该基因表达的蛋白序列进行分析,最后通过酶切、连接、转化构建该基因的表达载体。[结果]试验成功克隆到了MtCDPK1基因,并证明MtCDPK1蛋白属于Ca2+依赖的蛋白激酶,同时成功构建了该基因的表达载体。[结论]该研究为苜蓿的遗传转化提供了良好的基础。     

猪TLR3胞外区片段重组载体的构建、表达和多克隆抗体的制备

为制备猪TLR3(poTLR3)胞外区蛋白的多克隆抗体,从poTLR3克隆载体扩增胞外区基因序列连接到pGEX-4T-1载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下,表达GST-poTLR3融合蛋白,将表达的融合蛋白纯化,免疫家兔制备抗体,并以间接ELISA法测定抗体效价,利用Western-blot和细胞免疫荧光验证抗体与真核表达蛋结合的白特异性.结果表明:制备的多克隆抗体的效价可达1∶128 000,poTLR3胞外区蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,并且制备的多克隆抗体特异性好、滴度高.     

齿兰环斑病毒外壳蛋白的原核表达、抗体制备及检测应用

齿兰环斑病毒(Odontoglossumringspot virus,ORSV)是感染兰花的主要病毒之一.用RT-PCR方法从感染ORSV兰花中克隆到该病毒的477 bp外壳蛋白基因(CP),外壳蛋白基因再亚克隆到原核表达载体pET-32a中构建重组原核表达载体pET-32a-CP;将重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,Ni2+-NTA亲和柱纯化获得分子量约为37 ku含硫氧还蛋白的融合蛋白.以纯化的重组蛋白为抗原免疫新西兰大白兔制备ORSV外壳蛋白的多克隆抗体,并用制备的多抗建立了可靠、灵敏、特异的检测ORSV的免疫捕获RT-PCR及dot-blot ELISA方法,为该兰花病毒病的诊断、兰花抗病育种和脱毒苗的建立打下了基础.     

不结球白菜L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶基因(GLDH)cDNA片段克隆与RNAi表达载体构建

根据植物中hpRNA(hairpin RNA)原理,选择GLDH基因cDNA序列同源性较低区域设计1对携带双酶切位点的特异引物,以不结球白菜‘苏州青’叶片为材料提取总RNA,利用RT-PCR技术克隆了GLDH基因片段。构建中间克隆载体,经过3次亚克隆将测序正确的GLDH基因片段分别以正向和反向两种形式插入到间隔基因YYT的两端,经鉴定已插入到植物表达载体中,成功地构建了干扰GLDH基因表达的RNAi植物双元表达载体pRNAi-GLDH,并将表达载体转化到农杆菌菌株LBA4404中,为深入研究GLDH基因功能提供有效的工具。     

弱光下不同黄瓜品种生理适应性的研究

在弱光条件下测定了5个黄瓜品种的生理性状。结果表明,津优30号叶面积增加最多,津优2号较多,寒月居中,绿宁3号和北极星最少;津优30号和寒月叶绿素含量增加较多,绿宁3号和津优2号居中,北极星最少;寒月光抑制程度较轻;津优30号和津优2号光合产物转化受抑最轻,叶片淀粉累积量最高;津优30号干物重累积量最多,寒月较多,津优2号居中,绿宁3号和北极星最少。综合比较得出,津优30号的适应性最强,寒月、绿宁3号和津优2号居中,北极星适应性最差。     

河北北沟林场落叶松林分物种多样性

为了更好地对目标林分进行经营抚育,对河北北沟林场落叶松林分的物种多样性进行分析。结果表明:在各林分的乔木层物种多样性中,样地D的Menhinnick指数和Margalef指数最高,样地A则为最低;样地C的4个多样性的指数是4个林分中最大,最小的为样地A,其它居于中间;样地D的Alatalo指数和Pielou指数最高,最低的为样地A。在各林分的灌木层物种多样性中,样地D的Menhinnick指数和Margalef指数最高,样地A则为最低;在4个多样性的指数中样地B除了Billouin多样性指数外都是4个林分中最大的,而样地D的Billouin最大,多样性的4个指数最小的都为样地A;样地C的Alatalo指数最高,样地B的Pielou指数最高,两个指数最小的为样地A。在各林分的草本层物种多样性中,样地D的Menhinnick指数和Margalef指数最高,样地A的Menhinnick指数最低,样地B的Margalef指数最低;在4个多样性的指数中样地D除了Billouin多样性指数外都是4个林分中最大的,而样地A的Billouin最大,多样性的4个指数最小的都为样地B;样地C的Alatalo指数和Pielou指数最高,样地B指数最小。     

江苏盐城农区棉盲蝽监控新技术的研究进展

通过对当地棉花重大的致灾害虫棉盲蝽进行了历时17年的研究,取得显著进展,主要包括11个专题：（1）明确了盐城农区棉盲蝽40多年的演变过程,（2）明确了棉盲蝽新近的暴发机制,（3）明确了多种因子对棉盲蝽种群形成与发展的干扰作用,（4）明确了盐城农区棉盲蝽的生物生态学特性,（5）明确了近年两种棉盲蝽优势种群比例变化的原因,（6）明确了棉盲蝽对不同长势Bt棉幼铃的危害特点,（7）明确了棉田天敌种群的消长与保护利用措施,（8）研制了Bt棉田棉盲蝽防治指标,优化了棉盲蝽防治对策,（9）明确了两种棉盲蝽的转移规律与虫源性质,（10）改进并提高了棉盲蝽测报预警的准确率,（11）在两种棉盲蝽的多食性特点研究方面：一是明确了棉盲蝽在当地的寄主范围、生态区划及发育和产卵趋性,二是明确了两种棉盲蝽寄主适合度及其表达的影响因素,三是明确了两种棉盲蝽的区域性生态分布。     

牛线粒体D-loop的序列分析及进化关系

牦牛存在两处10bp和7bp的缺失．10个品种的20条D-loop序列中共有18种单倍型，共检测到164个突变位点，346个突变碱基，其中转换突变235个，颠换突变55个，插人和缺失突变56个．基于聚类分析显示本试验所检测的黄牛中除了鲁西黄牛以外都起源于欧洲原牛，鲁西黄牛来源于两个母系，一个是欧洲原牛，另一个是瘤牛型原牛．牦牛与黄牛起源于不同的母系．     

烟草钟器腐霉的分子鉴定与致病力测定

从河南省嵩县送检的烟草茎黑腐病样本上分离获得1株腐霉菌,为明确该菌的种类及对烟草的致病力,对所得菌株进行形态学鉴定、DNA序列分析和致病性测定。结果表明,菌株菌落呈放射状型,并逐渐变为花瓣型,菌丝无隔;孢子囊球形、梨形;藏卵器球形;雄器钟状或不规则;rDNA-ITS序列测定分析,该菌序列与GenBank上登录号KC014615.1和GU133597.1等的序列同源性大于99%,鉴定为钟器腐霉(Pythium vexans de Bary)。对培育到10叶期的‘中烟100’品种接种,7天后该菌的病情指数为48,对照瓜果腐霉(P. aphanidermatum)的病情指数为62.7,表明其对‘中烟100’的致病力不及瓜果腐霉。     

五味子绿枝扦插繁殖的影响因素研究

以五味子当年绿枝为试材,研究了激素种类、IBA浓度、采穗母株树龄、扦插基质对扦插效果的影响.结果表明,激素处理对扦插效果影响较大,其中IBA处理生根效果最好,ABT1和NAA处理也明显优于CK(清水);IBA不同浓度诱导生根差异显著,其中1 000 mg/kg处理生根早、生根率最高,效果最好,500、1 500和2 000 mg/kg处理效果也较好,100和200 mg/kg处理效果较差,但也优于CK;采穗母树的年龄对扦插效果有明显影响,1～2年生低龄母树采集的插条生根早、生根率高,4～5年生成龄母树的插条生根较差;扦插基质对扦插效果影响显著,混合基质扦插生根成活率优于单一基质,其中以珍珠岩+草炭+蛭石生根率高、根系发达,单一河沙扦插效果最差.     

山药原植物薯蓣及其近缘种的分子鉴别和亲缘关系研究

采用CTAB法提取总DNA,应用PCR产物直接测序法,测定了山药原植物薯蓣及其近缘种共10个种和1个变种的trnL-F和rbcL序列.序列分析结果表明:薯蓣及其近缘种trnL-F序列长689～834 bp,当空位始终作缺失处理时,有变异位点67个,其中信息位点11个,占序列总长度的1.43%;种间碱基差异百分率为1.6%,其中转换率为0.6%,颠换率为1.0%;序列的G C含量为32.5%.薯蓣及其近缘种rbcL序列长1 096～1 160 bp,存在变异位点42个,其中信息位点10个,占序列总长度的0.93%;种间碱基差异百分率为0.6%,其中转换率为0.3%,颠换率为0.3%;序列G C含量为44.1%.基于2个序列分别重建了薯蓣及其近缘种的系统发育树.结果表明2个系统树的结构基本一致,均支持经典分类方法对薯蓣及其近缘种的亲缘关系的划分.同时,本研究也证实叶绿体基因组序列测定是鉴定山药原植物薯蓣及其近缘种的快速、可靠、有效的方法.     

猪源大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶的检测及其耐药性分析

为了解辽宁地区猪源大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况及耐药情况,采用纸片扩散法对从辽宁地区分离到的65株大肠埃希菌进行ESBLs检测及耐药性分析,并用PCR方法对确证的产ESBLs大肠埃希菌进行TEM、CTX-M、OXA和SHV基因型检测。结果发现,在65株大肠埃希菌中,20株大肠埃希菌产ESBLs,阳性率为30.77%;在20株产ESBLs大肠埃希菌中,9株为TEM型,1株为CTX-M型,8株为同时携带TEM型和CTX-M型,1株为同时携带TEM型和OXA型,1株为同时携带TEM型、CTX-M型和OXA型。药敏试验结果表明,产ESBLs菌株的耐药率明显高于非产ESBLS菌株,且产ESBLs菌株均为多重耐药菌株。可见,辽宁地区产ESBLs猪源大肠埃希菌的检出率较高,流行的主要基因型为TEM型和TEM+CTX-M型。     

保健馒头制作工艺研究

[目的]为研制营养丰富的绿色保健食品提供理论依据。[方法]在发酵面团中添加适量的仙人掌汁、砂仁汁和柠檬酸制作保健馒头。[结果]在250g面粉中加入50g4m仙人掌汁、30g砂仁汁蒸制的馒头色泽、弹性不佳,表面不光滑;加入70g仙人掌汁时馒头的弹性延伸性不好：加入90g仙人掌汁时,馒头的弹性佳,表面光滑。加入25g砂仁汁时馒头的结构好,异味较小;加入30和35g砂仁汁时馒头的比容较大,弹性较好,但馒头中有异味。加入0．6％柠檬香精时馒头的比客气味改良和口感比较好。影响馒头品质的因素为：砂仁汁〉仙人掌汁〉柠檬酸。最好的组合为：面粉250g＋仙人掌汁90g＋砂仁汁25g＋柠檬香精0．6％。[结论]该研究为药食资源的综合开发奠定了基础。     

温度和pH对公子小丑鱼幼鱼消化酶活性的影响

研究了温度和pH 对人工养殖下的公子小丑鱼（Amphiprion ocellaris）幼鱼的胃、肝脏、肠道中蛋白酶、淀 粉酶、脂肪酶活性的影响,并对各部位消化酶活性进行比较。结果表明,在胃、肝脏、肠道中均可以检测出蛋白酶、淀 粉酶、脂肪酶的活性,其中蛋白酶活性顺序为胃跃肠道跃肝脏,淀粉酶活性顺序为肠道跃肝脏跃胃,脂肪酶活性顺序为肠 道跃肝脏跃胃。胃、肝脏、前肠、中肠、后肠蛋白酶的最适pH 值分别为2.2、7.5、7.0、7.0 和8.0;淀粉酶肝脏的最适pH 值 为6.0,其余部位均为7.0;脂肪酶肝脏的最适pH 值为7.0,其余部位均为7.5。胃、肝脏、肠道的蛋白酶最适温度均为 40益;胃淀粉酶最适温度为40益,肝淀粉酶最适温度为35益,肠道淀粉酶最适温度为30益;胃、肝脏、肠道的脂肪酶的 最适温度均为40益。