单抗介导的银加强金标免疫技术检测传染性支气管炎病毒

利用胶体金标记纯化的羊抗鼠IgG,建立了一种银加强金标免疫技术(SECGA)检测IB抗原.检测抗原时先将抗原点样于硝酸纤维素膜(NCM)中央,封闭后浸于1:40 IBV单抗中作用10 min,洗涤后再浸于1:4金标羊抗鼠IgG液中作用1 h,银染10 min后观察,在膜上出现灰黑斑点的为阳性结果,反之,不出现斑点为阴性结果.SECGA对IB抗原最低检测量为0.703 ng/点(2 μL),对含毒尿囊液的最低检测量为102.9 EID50,检测IBV M41在鸡胚中繁殖时以36～54 h含毒量最高;检测SPF鸡气管粘液,至少于感染后3 d内检出病毒.结果表明,SECGA检测抗原可用于IBV早期诊断,具有群特异性、快速、敏感、简便,不需特殊设备、结果易判定等优点,尤适于基层实验室或现场应用.     

间接Dot—ELISA检测猪细小病毒抗原的研究

本文成功地建立了间接斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）用于检测ＰＰＶ抗原体对纯化ＰＰＶ抗原的最低检出量为２．５ｎｇ／点。ＰＰＶ阳性猪血清的特异性阻断试验及交叉反应试验证明，该方法对ＰＰＶ抗原的检测具有特异性。以该方法检测ＰＰＶ人工感染兔样本和自然染猪样本，ＰＰＶ抗原的阳性检出率分别为肾样本１００％（１７／１７）、８１．８２％（９／１１），肝样本１００％（１６／１６）、５６．５２％（１３／２     

聚合酶链式反应检测猪细小病毒方法的研究

本研究依据编码猪细小病毒结构蛋白VP2基因序列,合成了一对寡核苷酸引物,通过减少病毒核酸的提取时间、费用及优化聚合酶链式反应(PCR)的条件,成功地从猪细小病毒(PPV)感染的细胞中扩增出预期的158 bp片段,经EcoRⅠ酶切鉴定,证实了该扩增片段的特异性.经敏感性试验测定,PCR的最低检出量为0.008病毒血凝(HA)单位.这些结果表明本试验建立的PCR对PPV的检测人有快速、简便、经济、灵敏度高和特异性强的特点.     

猪细小病毒的危害检测与防控

猪细小病毒(porcine parvovirus，PPV)是Mayr和Mahnel(1966)进行猪瘟病毒组织培养时首先发现的，并认为是细胞内潜伏感染的病毒。Cartwright和Huck(1967)首次从猪流产的胎儿中分离到了PPV，证明了它的致病作用。     

猪细小病毒PCR检测方法的建立及应用

根据已报道猪细小病毒基因组序列,设计合成了一对特异引物,通过对影响PCR扩增因素的筛选,确定PCR检测的最佳条件,成功扩增出预期的1980bp片断。特异性和敏感性试验结果发现:该方法特异、敏感,可以检测到0.9TCID50、0.001个HA的病毒。用该方法对用ZH株免疫妊娠母猪后第7、14、21天血液及胎儿样品进行检测,在血液和所采组织样品中均未检测到PPV病毒抗原,说明ZH株免疫后不产生病毒血症,也不能通过胎盘垂直传染给仔猪。     

猪细小病毒基因组结构及检测技术研究进展

猪细小病毒是引起母猪繁殖障碍性疾病的主要病原体之一,对猪细小病毒的基因组、转录、编码的结构蛋白和非结构蛋白、转录的调控及血清学诊断、分子生物学检测技术方面的研究进展予以综述,以期对其进一步研究有参考价值。     

猪瘟病毒猪细小病毒猪伪狂犬病病毒 PCR检测方法的建立

猪瘟、猪细小病毒感染和猪伪狂犬病是3种最为常见的、引起猪繁殖障碍的传染性疾病，在世界范围内广泛流行，给养猪业带来严重的经济损失。在兽医临床上这3种疾病有时呈混合感染，且临床表现相似，给临床诊断造成很大困难。目前对这3种疾病的确诊方法都存在着繁琐、耗时、特异性差等缺点，因而有必要建立一种特异、快速、灵敏的诊断方法用于这些疾病的临床诊断和检测。     

猪细小病毒PCR检测方法的建立与应用

根据已报道的猪细小病毒基因组序列，设计并合成了1对寡核苷酸引物，通过对影响PCR扩增因素的筛选，成功地从猪细小病毒感染的组织和细胞中扩增出445bp片段，回收该片段用EcoR I酶切得到了预期的结果，证实了该扩增片段的特异性。敏感性试验表明，该方法可以检测出10^-4个TCID50的病毒含量。利用该方法对临床上24份流产病科的检测，查出阳性16份，而同时利用HA检测阳性只有10份。这些结果说明本试验建立的PCR诊断方法灵敏度高、特异性强。     

猪细小病毒PCR检测与分离研究

根据猪细小病毒(PPV)结构蛋白VP2基因序列,设计合成1对引物,建立了检测PPV的PCR方法。检测14份临床组织,检出阳性11份,阳性检出率为79.5%。阳性样品扩增产物用EcoRⅠ酶切得到了预期的结果,对PCR产物进行测序,测序结果与已发表的PPV基因核苷酸序列比较,同源性达99%~100%,所编码的氨基酸同源性为93%~100%。从PCR检测阳性的一份病料组织中分离出1株PPV。试验证明,建立的PPVPCR检测方法特异性强、敏感性高,适用于临床样品的快速检测。     

猪细小病毒分离,核酸探针研制及应用

采用分子克隆技术制备了ＰＰＶ－ＤＮＡ－Ｃ片段（ＰＰＶ－ＲＦ－ＤＮＡ,经Ｐｓｔ Ｉ／Ｈｉｎｄ Ⅲ的双酶切片段,称为Ｃ片段）及含Ｃ片段的ＰＵＣ１９重组质粒（ＰＵＰ）,利用地高辛标记,分别制备探针２和探针１。对猪细小病毒ＤＮＡ进行斑点杂交,两种探针均为阳性,而对照的猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、乙型脑炎病毒及ＰＫ－１５细胞的核酸均为阴性。并且后一种探针的敏感性高于前者,两种探针的ＤＮＡ检出限量分别为４０ｐｇ和     

二乙烯亚胺对猪细小病毒的灭活作用

使用新型灭活剂二乙烯亚胺(binary ethylenimine,BEI)对猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)进行了灭活试验,通过ST传代细胞接种法观察病毒灭活后是否出现细胞病变,并结合血凝试验检测灭活效果,确定最佳灭活方法。用3～5日龄乳鼠检测BEI灭活后的病毒培养物和相应制备疫苗的安全性,并用豚鼠检测该灭活工艺制备疫苗的效果,与传统甲醛灭活进行了比较。结果显示,终浓度为1‰的BEI在32℃情况下经20 h即可彻底灭活PPV病毒;BEI灭活的病毒制备的疫苗免疫豚鼠较甲醛灭活病毒产生较高的血凝抑制抗体。     

秋季初产母猪死胎预防方法的研究

根据我们1982～1987年的研究,认为秋季初产母猪死胎主要是由PPV和JEV两种病毒所致。本项预防方法的研究,是在四川、广西、广东和河北四省区进行的。通过301头秋季初产母猪的试验,证明PPV灭活苗JEV弱毒苗组是预防秋季初产母猪死胎的最佳组合,预防效果极显著,死胎率和死仔率显著下降,活仔率上升至95.92％、96.04％,平均每窝多生仔猪3.37头,净增仔猪2.59头,死仔率由对照组68.57％、40.65％下降至4.08％、3.96％,P<0.01。     

猪博卡病毒PCR检测方法的建立及其应用

猪博卡病毒是最新发现的一种DNA病毒,于2009年首次在瑞典患仔猪断奶后多系统衰竭综合征的猪体内被鉴定。为了及时地评估其在我国的流行情况,本研究根据GenBank上递交的唯一一条猪博卡病毒核苷酸序列设计了一对特异性引物,并首次建立了猪博卡病毒的PCR检测方法。该方法特异性强,敏感度高,重复性好,对2009年我国部分省市猪场的191份临床样品进行检测,结果75份为猪博卡病毒阳性,这表明我国猪群中猪博卡病毒相当流行。本研究建立的PCR方法可以作为猪博卡病毒在临床上的一种诊断技术。     

猪细小病毒NS1基因密码子偏爱性分析

为给猪细小病毒（Porcineparvovirus,PPV）主要非结构蛋白（NS1）基因选择良好的宿主表达系统提供参考依据,本研究运用EMBOSS在线分析软件的CHIPS和CUSP程序对PPVNS1基因进行密码子偏爱性分析。结果显示PPVNS1基因的CAI值为0．642,ENC值为39．703,这表明NS1在密码子使用上存在较明显的偏爱性,且第三位核苷酸尤其偏爱A或T;从与PPVNS1基因密码子使用频率比值上看,使用频率差异较大的在大肠杆菌有33个、酵母有26个、人有27个;PPVNS1基因共有71个大肠杆菌稀有密码子,并且还有多个稀有密码子多次串联成簇出现的情况。结果表明酵母等真核生物与其密码子偏爱性较为接近,可作为该基因体外表达宿主的首选。     

间接血凝诊断家畜日本血吸虫病试剂的改进研究

目的提供便于在现场诊断家畜血吸虫病的试剂。方法在原"间血"国家标准的基础上,将提取虫卵方法改为胰蛋白酶和胶原酶消化的方法,并将水剂抗原改为冻干抗原制备。结果按改进方法制备的诊断试剂(冻干)提高了诊断的准确性,阳性和阴性符合率均在95%以上,达到了诊断试剂检测家畜血吸虫病的药政要求[1],且更易保存。结论按新方法制备的诊断试剂可作为我国疫区家畜血吸虫病检测和传播阻断地区疫情监测的首选。     

用点酶法检测鱼类致病性嗜水气单胞菌HEC毒素

本试验建立的检测嗜水气单胞菌HEC毒素的点酶法,可在嗜水气单胞菌培养上清和临床病料中检出HEC毒素,可检出的最低水平为95ng/ml。用该法检测大肠杆菌、沙门氏菌、鳗弧菌、荧光假单胞菌、温和气单胞菌等的培养上清及患草鱼出血病的病鱼病料,均为阴性反应,仅与豚鼠气单胞菌、杀鲑气单胞菌新亚种及吕克氏耶尔森氏菌有轻度的交叉反应。对72株病鱼分离菌及33份病鱼组织的检测结果表明,点酶法与溶血试验的符合率分别为80.7%和90.9%。以上试验重复3次,结果完全一致。综上可见,用点酶法检测嗜水气单胞菌HEC毒素,无须作复杂的细菌鉴定,并能直接用于病料,是一个快速、敏感、特异、有效的方法,显示出广阔的应用前景。     

TaqMan荧光定量PCR检测猪流行性腹泻病毒方法的建立与初步应用

根据GenBank中公布的猪流行性腹泻病毒Ⅳ基因序列,设计了一对特异性引物和探针,扩增长度为186bp的片段。以克隆Ⅳ基因的质粒作为阳性标准品,建立了一种快速检测猪流行腹泻病毒含量的TaqMan荧光定量PCR方法。该方法在10^9-10^1copies／μL范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中10copies／μL的质粒DNA,以猪圆环病毒、猪乙脑病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒为模板时,均检测不到荧光信号,而重复性实验中其变异系数均小于2％,表明此方法具有很好的特异性和重复性。应用此方法对采集的60份,陆床样品进行检测,其阳性检出率为92％,而用常规RT-PCR方法进行检测,阳性检出率仅为80％。表明荧光定量RT-PCR方法的敏感性明显高于常规PcR检测方法。     

应用间接荧光抗体染色法监测鸡传染性支气管炎抗体的研究

本文对间接荧光抗体染色法监测鸡传性支气管炎抗体进行了研究。试验结果表明感染鸡性染性支气管炎病毒的鸡成纤维细胞（ＣＥＦ）不适宜做ＩＦＡ方法的抗原，而感染ＩＢＶ后３６－４８小量的鸡胚肾细胞制做ＩＦＡ抗原效果很好。应用１０％犊牛血清封闭并适当改进洗涤条件要非特异性荧光。本试验将所建立的ＩＦＡ方法与美国ＫＰＬ生产的ＩＢＶ－ＥＬＩＳＡ进行了比较。应用ＩＦＡ方法第七天查出血清抗体。通过对十二个鸡群进行流行病调     

猪应激敏感性生化遗传标记的研究

８３头猪用于ＰＨＩ，ＰＧＤ，ＰＯ２生化多态性分析，结果显示，在３种表型分布内，氟烷阳性猪发生率，背最长肌ｐＨ值，系水力等肉质性状差异极显著（Ｐ〈０．０１），同一个优良基因数目与氟烷敏感性，肉质指标呈现线性关系，对四种亲本交配组合共计１９窝１３２头猪的亲子代进行了ＨＭ单倍型推断的遗传分析，结果表明，前三种交配组合可以根据亲子代的ＰＨＩ，ＰＯ２，ＰＧＤ表型及子代的氟烷测验结果对ＨＭ单倍型进行推断，Ｈａ