用ELISA和PCB对猪、牛血清中HBV抗原、抗体及DNA的检测

用三个厂家生产的乙型肝炎（ＨＢ）ＥＬＩＳＡ试剂盒及聚合酶链反应（ＰＣＲ）对牛、猪和羊血清分别进行了乙型肝炎病毒抗原（ＨＢＶ－Ａｇ）、抗体（Ａｎｔｉ－ＨＢＶ－Ａｂ）及ＤＮＡ的检测。ＥＬＩＳＡ共检出阳性牛血清１３份（１３／１３６），其中ＨＢ＿ｓＡｇ阳性８份，ＨＢ＿ｅＡｇ阳性５份；阳性猪血清４份（４／３６），其中有ＨＢ＿ｓＡｇ阳性３份，ＨＢｅＡｇ阳性１份。全部阳性血清和部分阴性血清共１２０份经用ＰＣＲ检测ＨＢＶＤＮＡ均为阴性，未扩增出特异性ＤＮＡ片段。此结果初步表明，无论家畜血清中有无ＨＢＶ－Ａｇ，均无感染性ＨＢＶ粒子存在，因此没有足够的证据担心家畜会在ＨＢＶ的传播上对人类构成威胁。     

病鸡血清中鸡传染性贫血病病毒DNA的PCR扩增及抗体的ELISA检测

根据鸡传染性贫血病病毒的基因结构，设计并合成一对限制扩增长度为０．６８ｋｂ的ＰＣＲ引物，直接对临床可凝病鸡的血清进行靶ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增。     

用RPHA与ELISA检测牛血清中的类HBsAg物质

用ＲＰＨＡ和ＥＬＩＳＡ检测２４６头份牛血清中的ＨＢｓＡｇ。结果，ＲＰＨＡ检出阳性率为３６．６０％，ＥＬＩＳＡ检出阳性率为７．３％，将ＲＰＨＡ检出阳性牛血清与人的ＨＢｓＡｇ阳性血清比较，其阳性滴度远比人的低。牛血清经５７℃１小时热处理后，阳性率明显下降。牛血清中ＨＢｓＡｇ不能被ＨＢｓＡｂ完全抑制，表明，用ＲＰＨＡ检测血清中ＨＢｓＡｇ时，存在较高的非特异性。     

用ELISA法检测犬细小病毒抗体

本文采用吸附豚鼠犬细小病毒（ＣＰＶ）多克隆抗体的微量板，进行间接酶免疫测定（ＥＬＩＳＡ）检测犬血清中的ＣＰＶ抗体。结果，ＥＬＩＳＡ抗体效价比血凝抑制抗体（ＨＩ）效价高，与ＨＩ效价的相关系数ｒ＝０．７８。     

应用ELISA双抗体夹心法检测＼猪细小病毒抗原的研究

研究建立了从胎猪脏器中检测猪细小病毒（ＰＰＶ）抗原的ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法。试验方法的最侍工作条件为，抗体浓度１：４００，酶标抗体浓度１：５０。５４份胎猪样品阳性检出率为５９．３％，不同脏器的阳性检 出率分别为，心３６．４％、肝脏７２．２％、肺脏６６．７％、肾脏６６．７％。     

用SPA介导ELISA检测猪抗轮状病毒抗体

本文介绍一种快速、简便的检测猪抗轮状病毒抗体的标记SPA介导的酶联免疫吸附试验(PPA-ELISA),具有重复性、灵敏性好的特点。与反向间接血凝抑制试验(RPHI)比较具有极显著的相关性(r=0.7,P<0.01),以多份病毒吸收血清的混合物为阴性对照,PN≥2判阳性对检测的150份随机采集的成年猪血清样品进行分析:35%为阳性,65%为阴性,表明自然界中广泛存在轮状病毒的感染。     

间接Dot—ELISA检测猪细小病毒抗原的研究

本文成功地建立了间接斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）用于检测ＰＰＶ抗原体对纯化ＰＰＶ抗原的最低检出量为２．５ｎｇ／点。ＰＰＶ阳性猪血清的特异性阻断试验及交叉反应试验证明，该方法对ＰＰＶ抗原的检测具有特异性。以该方法检测ＰＰＶ人工感染兔样本和自然染猪样本，ＰＰＶ抗原的阳性检出率分别为肾样本１００％（１７／１７）、８１．８２％（９／１１），肝样本１００％（１６／１６）、５６．５２％（１３／２     

用ELISA方法检测猪血清中PRRSV抗体

应用ELISA方法对信阳市10县区86个规模养殖场未进行PRRSV免疫接种的1 329份血清进行PRRSV抗体检测。结果显示,平均阳性率为49.5%,其中阳性率最高县区为65.9%。阳性率最低县区为27.8%;长白猪感染率最高为56.3%,本地淮南猪感染率最低为30%;小规模猪场感染率较高,大规模猪场感染较低。不同年龄段猪的感染率差异不大。     

用ELISA检测猪细小病毒(PPV)血清抗体

采用差速离心、透析、聚乙二醇(PEG)浓缩方法纯化猪细小病毒(PPVDK7113)制备抗原。用纯化的PPV抗原包被聚苯乙烯微量反应板，建立了检测PPV血清抗体的间接ELISA。抗原最佳包被浓度为6．3μg/ml，被检血清最佳稀释度为1：200。用建立的ELISA检测山东、东北、广东等地的426份血清，结果阳性率为36．2％。与华中农大病毒室提供的猪细小病毒乳胶凝集试验试剂盒相比，其结果符合率为98．6％。通过阻断试验、交叉试验，说明本方法在特异性上达到了较为满意的结果，且易于操作，适用于血清学定性诊断、检疫和大规模的血清流行病学调查。     

双抗体夹心ELISA检测牛病毒性腹泻病毒的研究

建立了从粪便中检测牛病毒性腹泻（ＢＶＤ）病毒抗原的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ。试验方法的最佳工作条件为，抗体包被量为１００μｇ／孔，酶标抗体的浓度为１：４００。对不同地区牛、羊、鹿粪样检测结果，牛的ＢＶＤＶ感染率为１６．５％￣８９．０％，羊为１４．６％￣８３．３％，鹿为１９．６％￣４４．４％，并且从许多地区的牛、羊同时检测到ＢＶＤＶ，表明本病在国内某些地区存在着严重的感染。     

用ELISA检测猪伪狂犬病血清抗体

用ELISA对青海部分存栏猪进行了猪伪狂犬病血清抗体检测。共检测了5县（市）的920份猪血清，其中阳性150份，阳性率为16．30％。说明我省猪群中有猪伪狂犬病的存在。     

大豆抗原蛋白血清抗体间接ELISA检测方法的建立

旨在建立检测血清大豆抗原蛋白抗体的间接ELISA方法。经琼脂糖凝胶层析纯化大豆抗原蛋白,以不同剂量皮下注射免疫小鼠,采用方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度及血清稀释度,并对其他条件进行优化,最终建立检测血清大豆抗原蛋白抗体的间接ELISA方法,利用该方法检测小鼠免疫后血清抗体水平。通过方阵滴定法确定11S蛋白最佳包被浓度为5.0μg/mL,血清稀释倍数为1∶800;7S蛋白抗原最佳包被浓度为2.5μg/mL,血清稀释倍数为1∶1 600;两者的批内、批间系数均小于10%,重复性较好,通过ELISA法确定11S和7S蛋白的最佳免疫次数为2次,免疫剂量为1 000μg/kg。结果表明本试验初步建立大豆抗原蛋白抗体检测间接ELISA方法,具有很强的特异性、敏感性和重复性,可用于大豆抗原蛋白过敏反应的临床检测。     

应用ELISA(双抗体夹心法)检测猪流行性腹泻病猪粪便中的病毒抗原

应用猪流行性腹泻(PED)—ELISA直接法(双抗体夹心法)对120头健康猪和5头猪传染性胃肠炎(TGE)病猪粪便标本进行检测,均不出现交叉反应;对15头PED病毒实验感染仔猪粪便标本检测,全部呈阳性;将对3(?)份ELISA阳性粪便标本和3份阴性标本的检测结果与电镜观察结果比较,其阳性符合率为97.37％,阴性符合率为100％;对在PED发病季节从不同地区采集的腹泻病猪粪便标本112份检测结果,阳性率为60.71％,而阴性反应的标本,绝大多数是在病愈后15～20d采集的。     

用ELISA检测猪生殖和呼吸综合症血清抗体

用ＥＬＩＳＡ对青海部分猪群进行了ＰＲＲＳ血清抗体检测。检测了１１个县的３８个猪场和４乡６村３３农户，共计９７８份猪血清，检出ＰＲＲＳ阳性血清３３１份，阳性率为３３．８４％。说明青海省猪群中可能存在ＰＲＲＳ。     

间接ELISA检测猪流行性腹泻病毒的抗体水平

本研究以猪流行性腹泻病毒细胞培养物中提纯的抗原,组织毒兔获得的高兔血清建立了间接ＥＬＩＳＡ检测ＰＥＤＶ抗体水平。结果表明：包被怕浓度为１：２００００,酶标羊抗猪ＩｇＧ浓度选用１：２５０为测定抗ＰＥＤＶＩｇＧ抗体的最达工作浓度。田间检测结果与临床发病预期结果一致。