马耳它布氏杆菌bp26基因缺失株的构建及鉴定

为了建立马耳他布氏杆菌M5-90株弱毒疫苗株与野生株的鉴别诊断,本研究以bp26基因作为重组靶位点,以M5-90为亲本,利用bp26基因ORF外侧序列作为同源序列,将卡那霉素抗性基因(Kan')整合到细菌基因组中,双交叉重组阳性菌株,经SDS-PAGE和western blot试验表明迁移率约为29 ku的BP26蛋白在亲本菌中表达并可被鼠抗BP26高免血清识别,而突变株M5-90-26反应结果为阴性,表明BP26蛋白在突变疫苗株M5-90-26中未表达.M5-90-26具备从血清学角度区分M5-90-26免疫与野生型布氏杆菌感染,对布氏杆菌病防制、监测及净化具有重要的意义.     

巢式PCR检测乳中布氏杆菌

本研究建立了检测乳中布氏杆菌omp22基因的巢式PCR方法,经过反复操作验证该检测方法有较好的重复性和稳定性。对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、棒状杆菌、绿脓杆菌等羊常见菌及羊基因组检测阴性,表明此方法有很好的特异性。该方法有较强的敏感性,羊乳中布氏杆菌的检测灵敏度可达到40CFU/mL乳汁。     

布氏杆菌微滴数字PCR方法的建立

为建立一种布氏杆菌微滴数字PCR qPCR方法,对布氏杆菌病的定量诊断提供技术支持,在实时荧光PCR (qPCR)检测方法(T/CVMA 20-2020)的基础上,建立了布氏杆菌微滴数字PCR方法,并对方法的反应条件进行了优化,同时对其敏感性、特异性、重复性进行了评估.结果 显示:本方法的最低检测下限为2.6 copi...     

牛布氏杆菌病的检疫与防控

牛布氏杆菌病是由布氏杆菌引发的一种慢性人畜共患传染病,不仅威胁养牛业安全与经济效益,还会影响人类健康,因此做好布病的检疫与防控十分关键.本文从牛布氏杆菌病流行特点、检疫工作及防控三个方面来分析论述牛布氏杆菌病.     

羊布氏杆菌的分离与鉴定

从一患睾丸炎公山羊中分离到一株革兰氏阴性短小杆菌,该菌经柯兹洛夫斯基鉴别染色红色,在普通绵羊血琼脂、巧克力平板上生长缓慢,对该菌的16S rDNA进行PCR扩增,测序,BLAST比较,结果显示该菌与羊布氏杆菌的16S rDNA有100%的同源性,菌体与布氏杆菌标准阳性血清起强凝集反应。结果显示,该分离菌为布氏杆菌。     

牛布氏杆菌PCR检测方法的建立

根据GenBank上公布的牛布氏杆菌外膜蛋白OMP31的基因序列设计特异性引物,对牛布氏杆菌样品进行PCR扩增并将产物克隆到pMD18-T载体后测序。结果表明,扩增的目的片段大小为602 bp,与预期扩增序列同源性为99.7％;该PCR检测体系的特异性强,不能在非布氏杆菌 DNA中扩增出条带;敏感性高,最低检测的DNA含量为0.9 pg/μL。该检测体系的成功构建为牛布氏杆菌病的检测、鉴定和流行病学调查提供了有力的技术支持。     

羊种布鲁菌分离株bp26及omp10基因的分子进化与变异分析

为了解羊种布鲁菌内蒙古分离株和疫苗株的遗传变异情况,对羊种布鲁菌分离株B1、B2、B3、B4以及疫苗株M5、S2、A19的bp26及omp10基因进行了扩增、克隆和序列分析,并与国内外的代表性毒株进行了序列比对。结果显示:4株分离株的bp26序列长度均为900bp,开放阅读框为753bp,与疫苗株M5同源性为100%,疫苗株S2和A19的同源性为99.99%;分析发现所有序列中共有4处变异,A19 bp26基因的CDS区第304位A→G和第405位C→T突变,S2 bp26基因的第498位C→T和727位G→A突变;其中304位的A→G的变异导致其编码的氨基酸发生了从天冬酰胺(N)到天冬氨酸(D),727位G→A的变异导致氨基酸发生了缬氨酸(V)到异亮氨酸(I)的变化;而分离株和疫苗株M5未发生变异。4株分离株的omp10序列长度均为513bp,开放阅读框为396bp,同源性为99.99%,与疫苗株S2和A19同源性为100%;分析发现疫苗株M5的omp10基因序列发生了1处变异,第144位C→T,但没有引起氨基酸改变,其他菌株没有发生变异。     

8株布氏杆菌BCSP31基因的序列分析

参照GenBank中布氏杆菌的全基因组序列，设计一对特异性引物，通过PCR方法，扩增了8株来自3个布氏杆菌种的布氏杆菌表面蛋白31（BCSP31）全基因。PCR产物经克隆和序列分析后发现，该基因非常保守，8株不同菌株间的同源性高于99．3％；进化关系分析显示，5株中国来源的菌株（S2，M5，M111，M28，A387）显示了最近的同源关系，其中2个弱毒菌株S2和M5的BCSP31基因序列100％同源。3株外国来源的菌株（S19，2308，Rev．1）中，S19和2308同源性为100％。Rev．1与其他7株布氏杆菌BCSP31基因均有较大的差异。序列分析结果表明，BCSP31基因序列差异与布氏杆菌的种属和毒力无相关性。     

布氏杆菌病疫苗研究进展

布氏杆菌病是由布氏杆菌引起的人兽共患病,患病母畜流产、胎衣滞留、子宫炎、阴道炎和乳腺炎等;患病公畜表现为睾丸发炎、肿大、上缩,精索粗硬,附睾炎、阴囊肿大。而目前防控布氏杆菌病的重要手段就是通过疫苗进行防控,近些年来布氏杆菌病疫苗发展迅速,主要介绍了4类重要的布氏杆菌病疫苗,期望对布氏杆菌病的预防提供帮助。     

浅析布氏杆菌病的防控

布氏杆菌病由布氏杆菌引起的人、畜共患传染病,全称是布鲁氏杆菌病.在家畜中最常发生于牛羊猪,并可由牛羊猪传染于人和其他家畜.威胁着牲畜的健康影响牲畜的生殖系统,并且对人的健康也会造成威胁,严重的甚至会导致失去生育能力.加上布氏杆菌病是一种传染疾病,如果防控不及时会引发严重的后果.本文主要针对布氏杆菌的防控进行讨论,分析了它的现在在防控时存在问题并提出防控措施.     

沈阳地区鹿布氏杆菌病的血清学调查

采用血清学方法,对沈阳地区的梅花鹿群未注射布氏杆菌病疫苗的541份血清进行了检测,阳性率为26．62％。结果表明鹿群中仍然存在布氏杆菌病。     

布氏杆菌胞内生存机制研究进展

布氏杆菌病(也称马尔他热)是由布氏杆菌感染引起的一种严重的人畜共患病。在不同的宿主细胞内生存时,布氏杆菌能建立布氏杆菌小体,从而躲避机体正常的免疫应答。本文主要综述了布氏杆菌对不同宿主细胞的侵袭及在胞内运输和复制等生存方式的研究进展。     

我国部分地区犬布氏杆菌感染流行病学调查

为了了解我国部分省市犬感染布氏杆菌的情况。用血清样品用虎红平板凝集试验(RBT)和OIE标准间接酶标试验(i-ELISA)初筛,初筛阳性样品用试管凝集试验(SAT)复核,对SAT判定为阳性血清所对应的脾脏或新鲜全血进行布氏杆菌分离与培养。结果显示,4 750份犬血清中60份为阳性(29份检测到粗糙型布氏杆菌抗体:牧区2份、农区4份、城区23份;31份检测到光滑型布氏杆菌抗体:牧区19份、农区2份、城区10份),个体阳性率为1.26%(牧区6.69%,农区1.53%,城区0.84%);3份脾脏和1份新鲜全血经接种培养后,从1份全血中分离到1株菌,经AMOS-PCR方法鉴定为犬布氏杆菌。试验结果表明,调查的部分省市均有犬感染布氏杆菌,牧区个体阳性率最高、农区居中、城区最低,且存在粗糙型和光滑型布氏杆菌混合感染的现象。     

锦州不同地区奶牛布氏杆菌病血清学调查

为了了解锦州不同地区布氏杆菌病的流行情况.对11个不同规模奶牛场5817份奶牛血清采用RBT与SAT相结合的检测方法.结果发现RBT检测阳性率为1.63％,SAT检测阳性率为1.44％,而且不同奶牛场布氏杆菌病感染情况不一.奶牛布病呈现高发趋势.建议采用RBT进行初筛,采用SAT进行确认.     

新疆北疆地区不同奶牛群布氏杆菌感染情况调查

采用琥红平板凝集试验(RBPT)与试管凝集试验(SAT)方法,对2011年4月新疆北疆地区A、B两个规模牛群布氏杆菌病进行检测,阳性率分别为0和6.8%。相隔25 d后对阳性牛再用试管凝集试验方法进行复查,2次试验结果一致率93%。30 d后对受威胁牛再次进行全群布病复检,阳性率为1.06%。通过调查,流产牛中的布病感染率45.1%。