软枣猕猴桃果肉花色苷关键光响应调节因子AaMYB1的筛选

【目的】从前期‘天源红’不同发育时期果肉转录组测序结果中筛选了与全红型软枣猕猴桃果肉着色相关的14个转录因子基因,鉴定在套袋过程中的表达特征,并筛选关键光响应转录因子。【方法】以全红型软枣猕猴桃品种‘天源红’盛花后8个时期的果肉样品为试材,在盛花后30 d对果实进行套袋处理,以不套袋果实作对照;使用日本柯尼卡美能达可携式色差计CR-400进行色差指标测定,采用超高效液相色谱串联质谱法检测花色苷组分及总含量,利用实时荧光定量PCR技术检测14个转录因子基因的表达量并对其进行相对定量;通过表型、基因表达量与花色苷含量的相关性分析,综合筛选关键光响应转录因子。【结果】随着果实生长发育,果肉颜色均由绿变红,在盛花后120 d红色最深,未套袋果肉红色明显深于套袋果肉,色泽比和色度角的测定结果与表型鉴定结果一致。果肉主要呈色物质是矢车菊素-3-O-半乳糖苷和矢车菊素-3-O-木糖-半乳糖苷,二者与总花色苷含量呈极显著相关;盛花后120 d,矢车菊素-3-O-半乳糖苷和总花色苷含量在套袋与不套袋果肉中差异显著。实时荧光定量PCR结果显示,MYB1在盛花后120 d未套袋果肉中的表达水平显著高于套袋果肉,并且与未套袋果肉矢车菊素-3-O-半乳糖苷和矢车菊素-3-O-木糖-半乳糖苷含量呈显著正相关,与套袋处理果肉不相关。【结论】筛选到软枣猕猴桃花色苷形成响应光照的关键转录因子AaMYB1;套袋处理可能通过抑制AaMYB1的表达从而抑制花色苷(主要是矢车菊素-3-O-半乳糖苷)的合成与积累,从而阻碍果实正常着色。     

云南玉溪地区主栽蓝莓果实花色苷定性检测及其组成分析

以云南澄江蓝莓主产区蓝莓鲜果为试材,以甲酸甲醇溶液提取花色苷,利用高效液相色谱法(HPLC)和加标定性测定法对蓝莓果实中花色苷的组成及相对含量进行比较,以期探索云南主栽蓝莓果实花色苷的组分及特征.结果 表明:6个品种蓝莓果实中共检测到10种花色苷.其中,“比洛克西”中总花色苷含量最高,是含量最低品种“夏普蓝”的27倍.且“夏普蓝”“灿烂”“密斯提”3个品种中的芍药素-3-O-葡萄糖苷的相对含量最高,分别为23.62％、29.85％、20.76％,均高于20％;“比洛克西”“绿宝石”“莱格西”中芍药素-3-O-葡萄糖苷和飞燕草素-3-O-半乳糖苷的相对含量也相对较高,其中,芍药素-3-O-葡萄糖苷的相对含量分别为16.25％、12.26％、10.61％,飞燕草素-3-O-半乳糖苷的相对含量分别为20.3％、10.52％、16.89％,均高于10％.6个品种蓝莓果实的飞燕草素-3-O-半乳糖苷的相对含量均高于10％.说明云南主栽的6个品种蓝莓中含有极为丰富的花色苷资源.     

白东魁和东魁不同发育阶段果实花青苷组分及含量差异分析

白东魁是从东魁杨梅群体中发现的粉色果实变异株系,为研究东魁和白东魁果实色泽差异的形成机理,运用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术分析两个品种(系)果实不同发育阶段中果实花青苷种类和相对含量。结果表明,两个品种(系)成熟果实中均可以检测出7种花青苷,分别为矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、矢车菊素-3-O-阿拉伯糖苷、矢车菊素-3-O-鼠李糖苷、飞燕草素-3-O-葡萄糖苷、飞燕草素-3,5-O-二葡萄糖苷、天竺葵素-3-O-葡萄糖苷和芍药色素-3-O-葡萄糖苷;在幼果期和转色期,东魁和白东魁果实中均未检测出飞燕草素-3,5-O-二葡萄糖苷。白东魁成熟果实中除矢车菊素-3-O-鼠李糖苷外,其他6种花青苷含量均显著低于东魁;尤其杨梅果实中最主要的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷,白东魁果实中的含量只有东魁的13.93%,从而导致两个品种(系)成熟果实色泽的差异。     

丝棉木叶片花色苷的提取、稳定性和成分研究

以秋冬季丝棉木的红色叶片为材料,研究叶片中花色苷的提取工艺和不同条件下的稳定性,并采用高效液相色谱法对其成分做出鉴定。结果表明:丝棉木叶片中花色苷的最佳提取方法为以90%甲醇-0.1 mol·L~(-1)盐酸作为提取液,提取温度为60℃,提取时间为3 h,料液比为1∶40 g·mL~(-1)。花色苷对日光敏感,在酸性条件下稳定,60℃以下比较稳定,Pb~(2+)、Fe~(2+)、Fe~(3+)和Cu~(2+)对花色苷有破坏作用,不耐氧化剂和还原剂,麦芽糖对其稳定性也有较大影响。花色苷的主要成分为飞燕草素-3,5-二葡萄糖苷和矢车菊素-3-半乳糖苷。     

蜡梅的花色和色素组成及其在开花过程中的变化

以蜡梅的4个变种为材料,对其在开花过程中的花色、花色素组成及含量的变化进行研究。花色测定采用英国皇家园艺学会比色卡（RHSCC）和分光色差计,色素的定性及定量分析采用高效液相色谱 —二极管阵列检测技术（HPLC-PAD）和高效液相色谱—电喷雾离子化—质谱联用技术（HPLC-ESI-MS）。结果表明,在开花过程中,各蜡梅变种的花色呈明显变化。黄色外瓣和红色内瓣彩度C* 值均变小,黄色外瓣色相角h增大,由黄色向浅黄方向变化,而红色内瓣色相角h变小,由红色向深红方向变化。在蜡梅红色内瓣中检测到2种花青苷和3种黄酮醇,在黄色外瓣中检测到与红色内瓣相同的3种黄酮醇。其中花青苷为：矢车菊素 3-O-葡萄糖苷和矢车菊素 3-O-芸香糖苷;黄酮醇为：槲皮素 3-O-芸香糖苷、山奈酚 3-O-芸香糖苷和槲皮素苷元。首次检测出蜡梅花瓣中含有矢车菊素 3-O-芸香糖苷。蜡梅各变种间及每个变种的各开花阶段,色素种类没有差异,但色素含量发生了明显变化。从蕾期到初花期,黄色外瓣和红色内瓣的总黄酮醇（TF）含量迅速减少,花朵开放后变化平稳。红色内瓣的总花青苷（TA）含量在开花过程中较稳定。     

文冠果花瓣变色原因分析

以文冠果初花期及盛花期花瓣为试材,用薄层层析色谱法(TLC)、紫外-可见分光光度计(UV)和高效液相色谱仪-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)对花瓣中的色素进行定性定量分析,确定开花过程中花色变化的原因,以期为文冠果花色育种提供理论参考。结果表明:文冠果花瓣内含有叶绿素、类胡萝卜素、类黄酮物质,开花过程中色素组成及含量均存在变化使其花瓣呈现变色现象,叶绿素、类胡萝卜素及类黄酮含量均呈现增长趋势。在盛花期时检测到初花期花瓣中未检测到的2种花青苷飞燕草素-3-阿拉伯糖苷和矢车菊素-3-半乳糖苷是其花瓣基部呈现红色的重要原因,其含量分别为3.61mg·g^-1和9.95mg·g^-1。     

不同基因型越橘果实中4种花色苷含量的研究

 采用反相高效液相色谱法测定了越橘2个野生种和3个栽培品种中4种花色苷的含量。结果 表明：总花色苷含量最高的是‘芝妮’，其它依次是CA-206、NB-3、笃斯越橘和红豆越橘。果实所含花色苷的种类和含量因种和品种而不同，其中矢车菊色素-3-半乳糖苷普遍存在的，而矢车菊色素-3-葡萄糖不存在于笃斯越橘和红豆越橘果实中，红豆越橘果实中只含4种花色苷的1种。     

莲雾花色苷组分鉴定及其稳定性和抗氧化性

【目的】鉴定莲雾花色苷类物质种类及其组成,并研究其呈色稳定性和抗氧化性,为莲雾果实色泽形成机制研究和花色苷的开发利用提供科学依据。【方法】以'黑珍珠’和'紫红’莲雾为材料,利用液质联用技术(HPLC-ESI-MSn)测定其果皮中的花色苷组分,探讨pH值和温度对其稳定性的影响,采用羟自由基和DPPH自由基清除法探讨其抗氧化能力。【结果】鉴定出莲雾中4种花色苷,分别为矢车菊-3, 5-O-葡萄糖苷、矢车菊-3-O-葡萄糖苷、芍药素-3,5-O-葡萄糖苷和芍药素-3-O-葡萄糖苷。2个品种所含花色苷种类、含量和比例不同',黑珍珠’主要含芍药素-3-O-葡萄糖苷和矢车菊-3-O-葡萄糖苷',紫红’莲雾以矢车菊-3-O-葡萄糖苷含量最高。莲雾花色苷稳定性随pH值升高而下降,在酸性条件下较稳定;对高温敏感,在4～50℃的环境中较为稳定。在试验范围内,对羟自由基和DPPH自由基的清除能力随质量浓度增加而增大。【结论】莲雾所含花色苷以矢车菊素和芍药素为主,不同品种所含组分和含量有差异,同时莲雾花色苷具有较高的稳定性和较强的抗氧化性,具有开发价值。     

红树莓花色苷的提取与鉴定

以"秋福"红树莓果实为试材,对其花色苷提取条件进行优化,并采用高效液相色谱质谱联用分析鉴定其花色苷组成成分。结果表明:"秋福"红树莓花色苷最佳提取条件为1.5%的盐酸-甲醇溶液,料液比1∶30 g·mL~(-1),提取时间3 h,提取温度35℃,此时花色苷含量可达4.49 mg·g~(-1)。高效液相色谱-质谱联用分析鉴定出"秋福"红树莓中花色苷共有6种组成成分,其中含量最多为花青素-3-葡萄糖苷,其次为花青素-3-槐糖苷和花青素-3-芸香糖苷,三者含量总和占花色苷总含量的93.03%。     

黑莓果实次生物质及花色苷组分的研究

以黑莓“三冠王”品种为试材,采用溶剂萃取法和质谱法对黑莓次生物质和花色苷结构进行鉴定,以期为今后更好地开发和利用黑莓资源提供理论支持.结果表明:黑莓含有酚类、鞣质、多糖及其苷、黄酮及其苷、氨基酸、多肽、蛋白质、挥发油等次生物质.以质谱法分离鉴定花色素苷结构,由矢车菊3-O-阿拉伯糖苷、矢车菊3-O-芸香糖苷、矢车菊3-O-草酸酐酰葡萄糖花色苷、锦葵色素3-O-葡萄糖苷、矢车菊3-O-丙二酸酰葡萄糖花色苷、矢车菊3-O-葡萄糖苷组成.     

Delayed harvest improves red blush development and quality of ‘Cripps Pink’ apple

The poor red blush development on ‘Cripps Pink’ (Malus x domestica Borkh.) apple fruit at commercial maturity (CM) reduces the economic return to apple growers in warmer regions of the world. The effects of delayed harvest maturity up to 6 weeks following CM on the development of red blush and fruit quality of ‘Cripps Pink’ apple were investigated at two locations in Western Australia during 2003 and 2004. The red blush, export-grade fruit, total anthocyanin, cyanidin 3-galactoside, chlorogenic acid, catechin, and epicatechin of apple fruit skin tissues increased with advancement of harvest maturity at both locations in both years, whereas hue angle, concentration of phloridzin, fruit firmness, and titratable acidity (TA) of apple fruit tissues decreased with delayed harvest. The internal ethylene concentration was elevated with the delayed harvest. The concentrations of quercetin 3-galactoside, quercetin 3-arabinoside, quercetin 3-rutinoside, quercetin 3-rhamnoside, and quercetin 3-glucoside increased up to 2 weeks following CM, and then declined in 2003 at both locations and at Perth Hills in 2004. Delayed harvest resulted in improved development of red blush on the fruit surface, accumulation of total anthocyanin, cyanidin 3-galactoside, chlorogenic acid, catechin, epicatechin, and quercetin glycosides in fruit skin, SSC:TA ratio and reduced fruit firmness possibly due to the increased ethylene production.     

草莓和蓝莓果实花青素提取及定量方法的比较

 本研究旨在比较果实花青素提取液的提取效果以及花青素分析方法的准确性。用丙酮-水-甲酸（A）、乙腈-乙酸（B）、乙醇-水-乙酸（C）、甲醇-水-乙酸（D）以及含有盐酸的甲醇（E） 等5种提取液分别提取了草莓和蓝莓果实中的花青素,用比色法和液相色谱法分别测定了花青素的含量。试验结果表明：由于提取液中有机溶剂和酸种类的不同,提取效果差异甚大。提取草莓花青素时,以D的提取效果最好,其次是E、C、A,B的提取量最低,还不到D的1/3。提取蓝莓花青素得到的结果与草莓相似。用比色法分析,D、E、C提取液提取的草莓和蓝莓果实的花青素含量明显低于液相色谱分析的结果, 但B提取液比液相色谱结果高2倍以上,A提取液提取蓝莓时比色法与液相色谱法的结果相近,而提取草莓时比色法比液相色谱结果高出约50%。建议花青素的定量方法应尽量使用液相色谱法,对同一种果实,尤其是以低沸点醇类作提取液时可以用比色法。     

贴梗海棠花青苷组成及其与花色的关系

 以贴梗海棠[Chaenomeles speciosa（Sweet）Nakai]不同花色的24份种质为材料,调查了其花色在CIE L*a*b*表色系的分布状况,利用高效液相色谱—光电二极管阵列检测（HPLC–DAD）和高效液相色谱—电喷雾离子化—多级质谱联用技术（HPLC–ESI–MSn）定性定量分析其花青苷组分,运用多元线性回归方法分析了花色与花青苷组成之间的关系。结果表明,贴梗海棠花瓣中共含有6种花青苷,分别是矢车菊素–3–O–半乳糖苷（Cy3Ga）、矢车菊素–3–O–葡萄糖苷、天竺葵素–3–O–半乳糖苷、天竺葵素–3–O–（半乳糖葡萄糖苷）[Pg3（Ga-G）]、矢车菊素–3–O–（半乳糖葡萄糖苷）以及矢车菊素–3–O–琥珀酸–阿拉伯糖苷（Cy3SucAra）。Cy3SucAra为首次发现。其中,Cy3Ga、Pg3（Ga-G）和Cy3SucAra是决定贴梗海棠花色的主要色素,这3种色素含量的增加导致花色显著变红。基于花青苷的组成信息,探讨了贴梗海棠的花色改良和蓝色花创制的策略。     

迎红杜鹃的花色素组成及花色在开花过程中的变化

分析了迎红杜鹃（Rhododendron mucronulatum Turcz.）的花色素组成,调查了其在开花过程中花色、花色素组成和含量的变化。采用英国皇家园艺学会比色卡和分光色差计测量了不同开花阶段的花色。结果表明,开花过程中花色的明度增加,彩度变小,由红紫（70B）变为淡紫红色（84B）。用高效液相色谱—光电二极管阵列检测技术（HPLC - PAD）和高效液相色谱—电喷雾离子化—质谱联用技术（HPLC - ESI - MS）分析花瓣中花青苷和黄酮醇的组成及含量。在520 nm和350 nm波长下,共检测到15种化合物：5种花青苷、8种黄酮醇和2种芳香酸,推定出了其中10种化合物。花青苷：锦葵素 3-阿拉伯糖苷-5-葡萄糖苷;黄酮醇：杨梅黄素3-半乳糖苷和杨梅黄素3-鼠李糖苷;槲皮素3-半乳糖苷、槲皮素3-葡萄糖苷和两种槲皮素-鼠李糖苷以及山奈酚3-鼠李糖苷;芳香酸：绿原酸及其异构体。未检测到酰基化色素及5-O-甲基化黄酮醇。在6个开花阶段中,虽然花色变化明显,但花色素种类不变,其含量在各阶段差异极显著。从小蕾期到初开期,总花青苷含量（TA）和总黄酮醇含量（TF）迅速减少,花开放后变化平稳。基于花色素组成信息,探讨了耐寒杜鹃的花色育种策略。     

MdMYB10对苹果果皮苯丙氨酸代谢的影响

MdMYB10对苹果果皮花青苷合成起重要作用,但对苯丙氨酸代谢途径中其他酚类物质合成是否起作用尚不清楚。从‘粉红女士’苹果（Malus ? domestica‘Pink Lady’）果皮中克隆了MdMYB10,分别构建其过表达载体pCAMBIA2301-MdMYB10和沉默载体pTRV2-MdMYB10,在套袋苹果果皮下注射农杆菌诱导MdMYB10过表达和沉默,分析MdMYB10对解袋后苹果果皮苯丙氨酸代谢的影响。结果表明,在过表达MdMYB10的果皮组织中,MdMYB10表达量上调了19.62倍,MdPAL、MdCHS、MdF3H、MdDFR、MdANS、MdUFGT、MdFLS、MdANR均有不同程度的上调,只有MdLAR无显著变化;沉默MdMYB10的果皮组织中,MdMYB10表达量降低了87%;MdCHS、MdF3H、MdDFR、MdANS和MdUFGT均有不同程度的下调,其中MdANS和MdUFGT下调最多,分别下调83%和82%。在过表达MdMYB10的果皮中,花青苷含量升高了3.05倍,槲皮素–3–O–半乳糖苷、表儿茶素、原花青素B2、绿原酸、对香豆酸含量均有不同程度升高,根皮苷含量无明显变化;在沉默MdMYB10的果皮中,花青苷含量降低了83%,槲皮素–3–O–半乳糖苷和表儿茶素含量分别降低58%和52%,原花青素B2、根皮苷含量无明显变化,而绿原酸含量升高了24%,对香豆酸含量升高了21%。可见,MdMYB10不仅调控苹果果皮中花青苷合成,同时还调控苯丙氨酸代谢中绿原酸、对香豆酸、槲皮素–3–O–半乳糖苷、表儿茶素和原花青素B2等物质的合成,但对根皮苷的形成作用不明显。     

Effects of light on flavonoid and chlorogenic acid levels in the skin of ‘Jonagold’ apples

The objective of our work was to determine how fruit position on the tree affects flavonoid and chlorogenic acid contents. Light was measured at different positions within the canopy of 10-year-old ‘Jonagold’ apple trees on M.9 rootstock raised as slender spindles. Fruit from the top of the canopy contained the highest percentage of blush and the highest levels of cyanidin 3-galactoside (anthocyanin) and quercetin 3-glycosides, followed by fruit from the outside of the canopy, and then those from the canopy interior. There were no significant differences in the levels of catechins, phloridzin and chlorogenic acid among fruit from the different canopy positions. Light level was directly correlated with the levels of cyanidin 3-galactoside and quercetin 3-glycosides and with the percentage of blush in the fruit skin. Light in the interior of the canopy was poorer in UV-A, blue, green and red but richer in far-red light than at all other positions. Consequently, the FR/R ratio was much larger at the interior of the canopy than at all other positions. Both anthocyanin and quercetin 3-glycoside concentrations were clearly related to light level, and there was a critical FR/R ratio of about 1 below which no anthocyanin and only minimal quercetin 3-glycosides were formed.     

葡萄果皮花色素的提取及其理化性质

以红地球葡萄品种为试材,研究了葡萄果皮中花色素的提取方法及色素理化性质。结果表明,1%盐酸-无水甲醇的提取葡萄果皮色素效率最高,其次是95%乙醇-4.7%盐酸(v/v=85/15)、1%盐酸-无水乙醇;以1%盐酸-无水乙醇为提取液,葡萄果皮质量与提取液的料液比宜为1∶5～1∶10(m∶v,g/mL)。光谱特性分析表明,葡萄皮花色素属于花色素苷类,其稳定性受溶液的pH值影响最大,当溶液pH≥9时,特征光谱消失。葡萄花色素具有一定的热稳定性,但在光下降解速度加快,受热后在光下降解更快;Fe3+对葡萄花色素的不良影响大于Zn2+、Ca2+;高浓度的蔗糖、果糖对花色素有一定的护色效应,而葡萄糖对其影响不明显;维生素C、苯甲酸钠对花色素有不良影响。     

‘紫红1 号’红肉苹果果肉抗氧化性及花色苷分析

 ‘紫红1号’是新疆红肉野苹果[Malus sieversii f. neidzwetzkyana（Dieck）Langenf.]与‘富士’苹果杂交的F₁代中的一株果肉全红的株系。以其为试材,测定其果肉的花色苷、多酚、类黄酮含量及其抗氧化能力,结果表明其果肉花色苷含量为228.3 mg · kg^-1 FW,总酚含量为2 523 mg · kg^-1 FW,类黄酮含量为2 514 mg · kg^-1 FW,其抗氧化能力（ferric reducing antioxidant power,FRAP）为13.39 μmol · g^-1。利用液质联用（UPLC-PAD-/MS/MS）鉴定了红肉苹果果肉花色苷的主要组分有9种,其中4种分别为矢车菊3–O–葡萄糖苷、矢车菊3–O–半乳糖苷、矢车菊3–O–木糖苷、矢车菊3–O–阿拉伯糖苷,其中矢车菊3–O–半乳糖苷占73.37%,另外5种暂不能确定其结构。本研究表明花色苷的稳定性,发现该色素在pH 1 ~ 3,40 ℃以下比较稳定,高温加速花色苷的降解。花色苷对光照敏感,暴露在室内自然光下15 d其残留率为41.53%。     

紫山药中花色苷的快速溶剂萃取

通过正交实验和方差分析,采用快速溶剂萃取(ASE)法研究紫色山药中花色苷的提取温度、循环次数、冲洗体积及静态时间等因素对提取效率的影响.结果表明:快速溶剂萃取技术萃取紫山药花色苷的最佳提取条件为:温度80℃,循环提取4次,冲洗体积120％,静态时间2 min,影响提取效率的主要因素是温度.该技术与常规溶剂提取法相比,具有提取时间短、溶剂用量少、萃取效率高等优点,具有潜在的开发应用价值.