草莓花药愈伤组织类型与状态调控研究

在草莓花药愈伤组织诱导及继代培养过程中,主要出现了3种类型愈伤组织：I型愈伤组织表现为生长缓慢、淡绿色、块状或粒状;Ⅱ型愈伤组织表现为生长旺盛、鲜白色、松软状;Ⅲ型(胚性)愈伤组织表现为生长较旺盛、鲜黄色、松脆状。草莓花药在F NAA0．2mg／L BA2．0mg／L 水解酪蛋白300mg／L培养基上诱导的愈伤组织多为I型,I型愈伤组织在含2,4-D浓度较高(3．0mg／L)的MS培养基上培养,转变成Ⅱ型愈伤组织,Ⅱ型愈伤组织在MS 2,4-D0．5～1．0mg／L BA0．05～0．1mg/L 水解酪蛋白400mg/L 谷氨酰胺150mg/L KCl 400mg/L培养基上培养,提高了其质量,而后将质量好的Ⅱ型愈伤组织转到附加KNO3 1140mg／L的MS培养基上,培养40d后在愈伤组织块边缘出现了黄色、颗粒状愈伤组织,将此状态的愈伤组织在MS 2,4-D 1．0mg/L NAA 1．0mg/L ZT 0．2mg/L 水解酪蛋白400mg/L 谷氨酰胺150mg／L KCl 400mg／L培养基上培养获得了Ⅲ型(胚性)愈伤组织。I型愈伤组织和Ⅱ型愈伤组织不适合建立细胞悬浮系,而Ⅲ型(胚性)愈伤组织很容易建立细胞悬浮系,并诱导出大量胚状体。I型愈伤组织能再生植株．Ⅱ型愈伤组织不能再生植株,Ⅲ型(胚性)愈伤组织经状态调控成I型愈伤组织后也能再生植株。     

黑莓松散型胚性愈伤组织的诱导

为了诱导出黑莓松散型胚性愈伤组织,试验采用黑莓试管苗叶片、叶柄和茎段为外植体,在含有不同2,4-D及分裂素的MS培养基上进行愈伤组织的初步诱导,从中筛选出松散型愈伤组织的最佳培养基配方;再将诱导出的黑莓松散型愈伤组织转移到含有不同激素种类和浓度的MS培养基上进行松散型胚性愈伤组织的诱导,从中筛选出最佳培养基配方。结果表明,在1/8 MS+3 mg/L 2,4-D+100 mg/L Vc+10 g/L蔗糖的培养基上可以诱导出松散的黑莓愈伤组织;先在MS+2 mg/L 2,4-D+1 mg/L KT+100 mg/L Vc+30 g/L蔗糖的培养基上进行胚性愈伤的诱导继代2~3次,然后转移到MS+0.5 mg/L 2,4-D+2 mg/L KT+100 mg/L Vc+30 g/L蔗糖的培养基上继续培养并继代3~5次后即可诱导出黑莓的松散型胚性愈伤组织。试验结果将为采用黑莓体细胞诱变育种研究奠定基础。     

文冠果细胞悬浮培养技术研究

[目的]建立文冠果体细胞胚胎发生和快速成苗的悬浮培养体系,为文冠果的产业化和规模化发展提供参考。[方法]以文冠果新旧种子为材料,诱导体胚发生,进行文冠果细胞悬浮培养。[结果]适合胚性愈伤诱导的最佳培养基为MS＋6-BA1．0mg／L＋NAA0．5mg／L＋2,4-D0．5mg／L＋3％蔗糖;适合胚性愈伤组织不定芽诱导培养的最佳诱导培养基为MS＋6一BA1．0mg／L．4-NAA1．0mg／L＋3％蔗糖,且萌芽率最高;适合单细胞团再生植株培养的最佳培养基为MS＋6-BA0．5mg／L＋NAA0．2mg／L＋3％蔗糖。[结论]NAA和2,4-D混合使用有利于胚性愈伤组织的形成;一定浓度的NAA对文冠果愈伤组织萌芽培养有较大的促进作用。     

高淀粉专用型甘薯品种悬浮体系的建立及植株再生

利用目前四川省主推的6个高淀粉甘薯品种进行悬浮培养及有效植株再生的研究,对以MS为基础的10种胚性愈伤培养基进行分析,结果表明,茎尖分生组织培养基在添加1.8 mg/L 2,4-D、30 mg/L蔗糖的MS培养基上诱导的胚性愈伤组织最多。胚性愈伤组织在添加1.8 mg/L 2,4-D、30 mg/L蔗糖的MS培养基上进行震荡培养建立悬浮细胞系,悬浮培养40周后,进行植株再生培养,比较了3种以MS为基础的再生培养基,将直径大于1cm的大细胞团放在添加1.5 mg/L ABA、30 mg/L蔗糖的MS上获得再生植株最多,再生率为96%。     

弱光条件下茄子花药培养再生体系的建立

以七叶茄为供试材料 ,在弱光下进行花药培养 结果表明 :弱光下茄子花药愈伤组织诱导的适宜培养基为MS +2 ,4 -D 0 2 5mg/L +ZT 1 0mg/L 愈伤组织分化不定芽的适宜培养基为MS +NAA 0 0 2mg/L +ZT 2 0mg/L 在MS +IAA 0 0 2mg/L的培养基上再生不定根 ,弱光下愈伤组织的诱导与分化需要较高浓度的细胞分裂素 ,培养基中添加AgNO3能促进弱光下愈伤组织的分化     

无种质基因型限制结缕草组培快繁体系研究

结缕草从愈伤组织发育成胚性愈伤再进一步分化为完整植株一直是该领域的研究重点与难点.本研究通过试验建立起一套完善的无种质基因型限制的结缕草组培快繁体系.结果表明,愈伤组织诱导培养基为MS+2 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L 6-BA+40 g/L蔗糖最为合适,体胚细胞诱导培养基为改良MS+2 mg/L 2,4-D...     

小麦“5389”悬浮细胞系建立的条件摸索

以小麦"5389"的幼胚为外植体诱导愈伤组织,研究了培养基中2,4-D、KT、ABA及其配比对愈伤组织诱导和愈伤组织继代培养的影响。结果表明:以MS+2,4-D 3.0 mg/L培养基的诱导效果最好,出愈率最高达93.42%;在MS+2,4-D 1.0 mg/L+KT 0.1 mg/L培养基上进行继代培养获得松脆型愈伤组织,以MS+2,4-D1.0 mg/L+KT 0.1 mg/L培养基进行液体培养建立了状态良好的悬浮培养细胞。     

不同甘薯材料胚性愈伤组织的诱导与再生

用5个甘薯品种(系),分别用含有2种不同激素的培养基诱导胚性愈伤组织和进行再生能力试验.结果表明:苏薯9号和苏薯11号的胚性愈伤组织的诱导率和再生力较高,适合作为受体材料用于转基因研究,宁51 -5和宁51 -14的胚性愈伤组织诱导率和再生率较差,而苏薯12号不能诱导出胚性愈伤.添加2mg/L2,4-D和0.2 mg/L6 - BA的MS固体培养基比仅添加2mg/L2,4-D的MS固体培养基更适合作为甘薯胚性愈伤组织的诱导培养基,能明显增加胚性细胞的诱导效率.     

枇杷胚乳愈伤组织诱导和不定芽发生的研究

以枇杷人工授粉 5～ 8周的幼果为材料 ,取细胞形成期的胚乳进行培养 ,结果表明 :低温处理的幼果的胚乳形成愈伤组织的频率有所提高 ;来自预培养在MS分别附加 6 -BA ,GA3 ,2 ,4 -D的 3种培养基中 2～ 4d的胚乳愈伤组织诱导频率明显提高 ;6 -BA、2 ,4 -D、GA3 对愈伤组织诱导频率有显著影响 ,其中 2 ,4 -D是诱导胚乳愈伤组织的主导因素 ,在 3种激素的共同作用下 ,诱导率最高达 33 3%。经 1～ 2代增殖的愈伤组织在培养基MS +ZT2mg/L+NAA 0 1mg/L和MS +ZT 3mg/L +NAA 0 1mg/L中分化芽苗数最多 ,芽苗分化率最高达 18 0 4 %。     

郑麦9023胚性悬浮细胞系的建立和植株再生

为建立高效稳定的小麦遗传转化体系,以小麦郑麦9023的幼胚为外植体诱导愈伤组织,研究了培养基中不同质量浓度2,4-D、KT对愈伤组织诱导和愈伤组织继代培养的影响,进而完成整个植株再生的进程。结果表明:以小麦郑麦9023的幼胚作为外植体来诱导愈伤组织,诱导效果最好的培养基是含有3.0 mg/L 2,4-D的MS培养基,出愈率最高达92.5%;愈伤组织进行继代培养的最佳培养基是含有1.0 mg/L 2,4-D和0.1 mg/L KT的MS培养基;最佳的悬浮培养基是含有1.0 mg/L 2,4-D和0.1 mg/L KT的MS培养基;最佳的悬浮系继代时间为16 d;悬浮系中的成熟胚在基本培养基上可以发育成正常的植株。所建立的悬浮系可以用来进行小麦基因工程遗传改良和体细胞无性系突变体的筛选。     

不同激素对甘薯胚性细胞悬浮系植株再生的影响

以甘薯品种济薯21和徐薯18的茎尖为材料,采用不同激素配比,对甘薯胚性愈伤组织的诱导及高效植株再生进行了研究。结果表明,济薯21和徐薯18较适宜的茎尖胚性愈伤组织诱导培养基分别为MS+0.5 mg/L 6-BA+2.2 g/L KC l+2.0 mg/L 2,4-D和MS+2.0 mg/L 2,4-D;济薯21胚性细胞团在MS+1.0 mg/L ABA+1.0 mg/L GA3培养基上植株再生率最高,达到96%,徐薯18胚性细胞团在MS+1.0 mg/LABA培养基上的植株再生率最高,达到91%。     

巴东红三叶胚性细胞悬浮系的建立

以红三叶(Trifolium pratense)野生品种巴东红三叶的叶片为外植体,在MB-1至MB-9的固体培养基上诱导愈伤组织,筛选出最佳培养基MB-9.愈伤组织形成以后,均经MB-9固体培养基上继代培养3～4次后,获得胚性愈伤组织,然后转至改良的MB-9液体培养基中,经强化培养两个月后,获得胚性细胞悬浮系.结果表明,缩短换液时间,每隔3～4d换液1次,可加快胚性细胞悬浮系的建立.     

葡萄胚珠诱导成苗的研究

通过对葡萄几个品种胚珠愈伤组织的诱导、再分化,以胚状体发生途径实现植株再生。结果表明:以葡萄的胚珠为外植体,在附加不同浓度的2,4-D与6-BA的MS、B5和NN-1969培养基上培养,愈伤组织诱导以NN+2,4-D0.5mg/L+6-BA1.0mg/L培养基最佳,诱导率为84.1%,胚性愈伤组织诱导率为79.5%;将胚性愈伤组织置于含NAA0.03mg/L和6-BA0.5mg/L的NN培养基中,胚状体诱导率为6%～15%;胚状体在无激素MS培养基中的成苗率为0%～20%。     

多花黑麦草原生质体培养和再生白化苗

本文报道从多花黑麦单(Lolium multiflorum Lam.)原生质体培养获得愈伤组织并再生白化苗的试验结果。利用多花黑麦草幼穗在MS 3mg/L2.4-D的培养基上诱导出愈伤组织,并在MS 2mg/L2.4-D的液体培养基中振荡培养,产生悬浮细胞系。从悬浮细胞制备原生质体,用看护培养,琼脂糖固体平板培养和液体浅层培养均获得了再生细胞团。这些细胞团在MS 1mg/L2.4-D 60g/L蔗糖的培养基上形成愈伤组织和胚状体,并在分化培养基上再生出白化苗。试验还对有关培养基进行了研究。     

药用植物草麻黄细胞的悬浮培养

[目的]对草麻黄的子叶诱导出的愈伤组织,进行悬浮培养。[方法]采用组织培养的方法进行了愈伤组织诱导、愈伤组织继代和悬浮培养研究。[结果]MS+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA为诱导子叶形成愈伤组织的理想培养基;MS+1.5 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L6-BA是愈伤组织的适宜继代培养基;2.0 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L 6-BA+300 mg/L水解酪蛋白(CH)是愈伤组织悬浮培养的适宜培养基,愈伤组织干重增加量为0.80 g。[结论]初步选择出草麻黄愈伤组织细胞的悬浮培养条件,为麻黄细胞扩大培养及有效成分提取奠定基础。     

鸡骨草悬浮细胞系建立与植株再生研究

以鸡骨草（Abrus cantoniensis Hance）茎段为试材,进行了细胞悬浮培养及植株再生诱导的研究。结果表明：MS＋2.0mg/L 2,4-D＋1.5mg/L 6-BA培养基适合从茎段诱导生长迅速、质地疏松的愈伤组织;将获得的愈伤组织置于MS＋2.0mg/L 2,4-D＋0.1mg/L NAA＋1.5mg/L 6-BA液体培养基中振荡培养,建立细胞悬浮培养体系,随后继代4次,分化出芽;分化芽诱导生根后形成小植株。     

萝卜诱导愈伤组织的影响因素

以萝卜种子为试材,研究了不同外植体、不同激素、不同激素浓度及继代培养对萝卜外植体形成愈伤组织的影响。结果表明:(1)诱导萝卜愈伤组织最好的外植体为子叶。(2)不同的生长素诱导效果不同,诱导效果为NAA>2,4-D>IBA;(3)萝卜子叶和下胚轴诱导愈伤组织的最佳初代培养基均为MS 3 mg/L 6-BA 0.5 mg/L NAA 3%蔗糖 0.8%琼脂。(4)继代培养能促进愈伤组织的形成,子叶和下胚轴的最佳继代培养基分别为:MS 6 mg/L6-BA 0.5 mg/L NAA 3%蔗糖 0.8%琼脂和MS 4 mg/L 6-BA 0.5 mg/L NAA 3%蔗糖 0.8%琼脂。     

西番莲愈伤组织诱导研究

以紫果西番莲的花蕾为材料,进行组织培养愈伤组织诱导的研究．结果表明：直接剥取子房可快速有效诱导愈伤组织产生,在MS＋2,4-D2．0＋KT2．0培养基中,愈伤细织诱导率为90％,在MS＋2,4-D0．5中培养,愈伤组织增殖倍数为8．98。