牙鲆格氏乳球菌感染症及其病原

对一次养殖牙鲆（Paralichthys olivaceus L. Temminck et Schlegel）发生的病害进行了临床特征和病理变化等方面的检验.以5尾病（死）牙鲆做病变组织中的细菌检查及细菌分离,对分离做纯培养的10株菌（T030817-1至T030817-10）进行形态特征、理化特性等较系统的表观分类学指征鉴定;同时择代表菌株（T030817-1）进行16S rRNA基因分子鉴定,测定16S rRNA基因序列、分析相关细菌相应序列的同源性、构建了系统发生树.结果表明,10株分离菌均为乳球菌属（Lactococcus Schleifer et al 1986）的格氏乳球菌（L.garvieae）.择代表菌株（T030817-1）做对健康牙鲆的人工感染试验,表明所分离鉴定的格氏乳球菌在被检牙鲆病例中具有相应原发病原学意义及较强的致病作用.药敏试验结果显示,在供试37种抗菌药物中,对青霉素G等14种药物高度敏感,对链霉素等5种药物敏感,对苯唑青霉素等18种药物耐药.[中国水产科学,2006,13（3）：403-409]     

迟钝爱德华氏菌对牙鲆半致死浓度的测定

腹水病是牙鲆常见的细菌疾病之一,具有感染率高、死亡严重、流行速度快、前期症状不明显,难以防治等特点,给我省的牙鲆养殖业造成很大的损失.本实验中用迟钝爱德华氏菌对牙鲆进行了感染实验,被感染的牙鲆出现了腹水病相似的症状,表明迟钝爱德华氏菌是牙鲆腹水病病原之一.迟钝爱德华氏菌对牙鲆的半致死浓度为2.1×105 CFU/mL.     

牙鲆腹水病药物筛选及防治措施探讨

从具有典型腹水病症状的牙鲆腹水、肝脏、肾脏分离出病原体,分离纯化后对牙鲆进行人工感染,证明分离病原菌为牙鲆腹水病致病菌。对注射感染患病鱼进行病原菌分离、培养,并进行药物敏感试验,提出有效防治措施。     

养殖牙鲆致病性弧菌的鉴定及药敏分析

2020年丹东东港市某养殖厂养殖1龄牙鲆(Paralichthys olivaceus)突发病害,表现为腹水病症状。取患病的5尾养殖牙鲆的鳃、肝、脾、肠道、腹水为材料进行细菌分离及纯培养,选择优势菌株通过全自动细菌分析仪及16S rDNA序列分析对该菌株进行鉴定,结果表明分离纯培养的14株菌(DS200401-DS200414)共鉴定出2种,其中1种为该病的致病菌:弧菌属灿烂弧菌(Vibrio splendidus)。随后进行人工感染试验和药敏试验。用12种抗菌药物对3种菌进行药敏试验,结果显示在不同菌株间无明显的敏感与耐药性差异。     

迟钝爱德华氏菌耐药表型及4种耐药基因检测

从7起牙鲆迟钝爱德华氏菌感染病例中分离到130株致病菌,每个病例挑选5株共计35株,用K-B纸片扩散法检测其耐药表型;用PCR方法检测!-内酰胺类TEM基因、氨基糖苷类ant(3")-Ⅰ基因、磺胺类Sul3基因和四环素类tet(A)基因,分析耐药基因与耐药表型间的关系,以查明牙鲆源致病性迟钝爱德华氏菌不同类型常见耐药基因的携带状况,探讨耐药基因与耐药表型之间的相关性。结果显示,所检的35株迟钝爱德华氏菌均携带TEM基因和ant(3")-Ⅰ基因,62.9%(22/35)携带Sul3基因,未检出tet(A)基因;所有菌株均具有多重耐药性,大部分菌株耐抗菌类药物达7~9种;耐药基因的携带与耐药表型间存在较密切的相关性,但并非完全对应。     

牙鲆病原迟钝爱德华氏菌的药物敏感性测定与分析

对分离并经鉴定的牙鲆病原迟钝爱德华氏菌进行了常用抗菌类药物的敏感性测定,结果表明供试的35株迟钝爱德华氏菌,均对所测定的37种抗菌类药物中的头孢唑啉等20种药物高度敏感、对青霉素G等5种药物耐药、对氨苄青霉素等12种药物表现在株间存在差异。     

牙鲆仔鱼肠道白浊病病原菌的分离鉴定

对工厂化育苗中患肠道白浊病的牙鲆仔鱼进行了病原菌的分离与特性鉴定,从众多患病仔鱼的肠 道中均分离到几乎纯一的细菌,并对仔鱼的分离培养物进行形态特征检查及理化特性鉴定,结果初步表明所 分离鉴定的病原菌为鳗弧菌(Vibrio anguillarum),为牙鲆仔鱼肠道白浊病的致病菌,测定了对常用抗菌类药 物的敏感性,结果表明分离菌株对环丙沙星等11种药物高度敏感,对林可霉素等4种药物中度敏感,对利福 平等3种药物耐药。     

癸甲溴铵对褐牙鲆的急性毒性及抑菌试验

通过药浴方式,进行了癸甲溴铵对褐牙鲆的急性毒性试验;采用二倍稀释法,进行了癸甲溴铵对鳗弧菌、副溶血弧菌的体外抑菌试验;探讨了癸甲溴铵对鳗弧菌引起的褐牙鲆细菌性疾病的防治效果。结果表明,在19.0～21.0℃和24.5～25.5℃时,癸甲溴铵对褐牙鲆的24、48h半数致死浓度(LC50)和安全浓度(Sc)分别为6.35、4.84、0.84和2.43、2.14、0.5mg/L。通过对中毒死亡褐牙鲆的病理组织学观察表明,癸甲溴铵对褐牙鲆的鳃损害最严重,其次是肝脏,对肾脏的损害相对较轻,特别是对鳃的损害与鱼的死亡有很大的关系。在24和32℃,癸甲溴铵对鳗弧菌、副溶血弧菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)分别为10、20和5、10mg/L。防治效果试验表明,癸甲溴铵0.3mg/L浓度药浴可有效防治鳗弧菌引起的褐牙鲆细菌性疾病。     

鲤鱼细菌性败血症病原菌的研究

从具有典型细菌性败血症症状的病鱼或濒死鱼中分离到2 株优势菌,经分离培养、人工感染试验、毒力因子、16S rRNA基因序列的测定及药敏试验,研究分离菌的生理生化特征、致病性及药物敏感性.根据2 株分离菌的菌落形态、生化特性和16S rRNA基因序列的测定结果(同源性为99%),确定为嗜水气单胞菌.人工感染试验的症状与自然发病相似,且再次感染后又分离到该菌株.2 株菌对阿米卡星、氨曲南、头孢噻肟等15 种药物均敏感,对氨苄西林均耐药,对复方磺胺表现出菌株差异.对其敏感的15 种药物可作为防治鲤鱼细菌性败血症的首选药物.     

牙鲆鱼腹水病病原的研究

随着牙鲆工厂化养殖及海水网箱养殖规模的不断扩大,各种疾病开始频繁发生,其中以牙鲆腹水病的危害最为严重,该病从苗种到成鱼均有发生,死亡率可达50%-80%,而且尚无有效的治疗方法,因此,给养殖者造成巨大经济损失。根据国内外研究发现,牙鲆鱼腹水病的病原菌为迟钝爱得华氏菌和嗜水气单胞菌。本研究系统地完成了病原菌的分离、纯化、人工感染、生理生化测定,同时,进行了药敏试验及防治试验,在理论上为牙鲆疾病的研究奠定了基础,在实践中为大规模养殖牙鲆提供了比较有效的防治方法。     

近江牡蛎养殖水体中细菌产酶能力的研究

为了解近江牡蛎养殖水体中细菌的产酶特性 ,筛选出有应用潜力的有益菌 ,本实验从近江牡蛎养殖水体中分离到 32株菌。革兰氏染色表明 ,10株为革兰氏阳性菌 ,2 2株革兰氏阴性菌。在此基础上研究了它们蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶的产酶能力。结果表明 ,6 1.9% ( 17株 )的菌株能分泌蛋白酶 ,71.9% ( 2 3株 )菌株能分泌脂肪酶或淀粉酶 ,34.4 % ( 11株 )的菌株产纤维素酶。这些产酶菌株均以革兰氏阴性菌为主。在这 32株菌中 ,产四种酶的有 5株菌 ,产三种酶的有 9株菌 ,产两种酶的有 9株菌 ,产一种酶的有 9株菌 ,也就是说 ,所有的菌株都能产酶。由此表明近江牡蛎养殖水体中细菌在该环境物质循环中的重要地位。     

虾源哈维氏弧菌的致病性与生物学特性比较分析

哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是导致养殖对虾暴发弧菌病的重要病原之一。从我国南方养殖凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)分离、鉴定了10株哈维氏弧菌(Vh00947、Vh00949、Vh11011、Vh11014、Vh21217、Vh21218、Vh21220、Vh21229、Vh21231和Vh31487),分别肌注感染健康凡纳滨对虾后发现,菌株Vh21229致病性很弱,Vh00949其次,其它菌株毒力较强;对8种哈维氏弧菌常见毒力基因(Vh1、Vh2、Vh3、Vh4、tox S、hcp、zot和pap6)的检测显示,南方虾源哈维氏弧菌无论强弱毒株都很少携带zot、pap6、toxs和4种Vh基因(≤10%),表明这10个菌株的致病性与这7种常见毒力因子的相关度很低;hcp基因在所有菌株中均有检出,其中强毒株中检出率较高(50%),在较弱毒株(Vh00949)中也存在,表明hcp基因与这些菌株的致病性密切相关,但不是决定性因子。因此,这10株南方虾源哈维氏弧菌菌株的致病性差异应由这8种常见毒力因子以外的未知或未检测到的因子所决定。生化特征分析显示,所有菌株中只有弱毒株Vh21229不能利用D-甘露糖、蔗糖、D-海藻糖,而且只有其赖氨酸脱羧酶反应至阳性,而其它菌株均为阴性,推测导致哈维氏弧菌菌株生化特性改变的某种因子可能对菌株的致病性也产生了影响。药敏实验表明,10株哈维氏弧菌均对环丙沙星、氯霉素、恩诺沙星、美罗培南、头孢曲松、多西环素、头孢吡肟、诺氟沙星敏感,而对氨苄西林耐受性强,表明在虾类养殖过程中应当严格规范和控制抗菌药物尤其是青霉素类药物的使用。     

日本鳗鲡败血腹水病病原研究

2000年3月中旬，自福建仙游某日本鳗鲡（Anguilla japonica)养殖场患败血腹水症的发病日本鳗鲡的肝脏及腹水处分离到四株细菌，经鉴定其中一株为迟钝爱德华氏菌（dwardsiella tarda)，一株温和气单胞菌（Aeromomas sobria)和两株嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila)溶血试验，小鼠攻毒试验显示，上述四株细菌都有较强制 毒力，综合分析，上述菌株可能是引发这次日本幼鳗败血腹水病之病原菌。     

Genetic diversity and structure of domesticated strains of red sea bream,Pagrus major,inferred from microsatellite DNA markers

The genetic diversity and structure of nine domesticated strains of red sea bream used in a private hatchery were studied and compared to a wild population. A total of 313 individuals were genotyped at eight microsatellite loci. Average number of alleles per locus ranged from 5.5 to 9.4 in domesticated strains, but that of the wild population was 28.4. Heterozygosity of domesticated strains (ranged 0.697–0.804) was also lower compared to the wild population (0.952). Estimated Ne also decreased in all domesticated strains (ranged 10.3–126.0) compared to the wild population (1422.5). The UPGMA tree and 3‐D FCA showed that there were two main clusters containing domesticated strains, and the wild population was at the middle of both of the domesticated clusters. The STRUCTURE analysis also supported the phylogenetic analysis, and revealed three sub‐clusters in the domesticated strains. Pairwise F_ST revealed that all domesticated strains were statistically different from the wild population, and also the differentiation between domesticated strains was all statistically significant. Information on genetic diversity and structure of domesticated strains of red sea bream obtained in this study will be useful for future broodstock management and selective breeding programmes.     

27株嗜水气单胞菌致病性及ERIC—PCR指纹图谱分析

从福建省淡水养殖鱼类体内分离到27株嗜水气单胞菌,根据嗜水气单胞菌16SrDNA基因和气溶素基因（aerolysin）的保守序列,设计2对引物,对所分离到的27株嗜水气单胞菌进行双重PCR扩增,扩增结果表明,其中18株为含有Aer毒力基因的潜在致病性嗜水气单胞菌,占总菌数的66．67％。应用ERIC-PCR分型技术对27株嗜水气单胞菌菌株进行分析,以相似度54．00％为限,所有菌株可分为Ⅰ和Ⅱ两大聚类,以76．00％相似度为界,27株嗜水气单胞菌可分为11个聚类,同一个聚类中菌株分离区域基本相同。分析结果表明,分离的嗜水气单胞菌基因型的多样性和分离地域具有一定的关联,也表明ERIC-PCR可以有效应用于嗜水气单胞茵分子流行病学调查。     

九孔鲍消化道及养殖水体中弧菌胞外毒力因子的分析

从汕尾健生鲍鱼养殖场成鲍养殖水体和消化道中分离筛选到22株弧菌,其中14株来自成鲍消化道,8株来自养殖水体。本文对这两种不同来源的菌株进行了致病因子(胞外酶及溶血毒素)的分析比较,同时采用API条带法对其进行了种类鉴定。结果发现,消化道中除1株溶藻弧菌和3株最小弧菌外,其余均为河流弧菌;而水体中除副溶血弧菌和创伤弧菌各1株外,其他也均为河流弧菌。实验还发现,在5株胞外酶分泌能力最强的弧菌中,只有Sh031株是副溶血弧菌,另外4株(Bh14、Sh02、Sh08、Sh05)均为的河流弧菌。结果显示,无论是养殖水体还是消化道,河流弧菌都应视为一种海水养殖贝类(鲍)的主要条件致病菌,是能力较强的胞外致病因子生产者。     

滇池与洱海鱼腥藻的分离纯化及其生长特性的初步研究

本研究分别于2004年、2005年和2006年分离纯化滇池和洱海主要鱼腥藻种类,选取其中7株藻株,通过研究生长状况、色素组成及光合效率,分析比较了它们在相同实验室培养条件下的生长差异。研究结果表明,培养期间各藻株生长状态良好,但各藻株在实验室培养条件下的生长优势状况与在自然水体中明显不同;光合色素含量与生长状况明显相关;培养期间,各分离藻株均保持了较高的Yield、rETRmax和Alpha值,说明各藻株生长状态良好;在光合色素含量相对较低时,为保证藻株正常生长,光系统Ⅱ（PSⅡ）的光量子产量（Yield）、最大相对电子传递速率（rETRmax）和P-I曲线初始斜率（Alpha）相对增大,补偿光合作用。本研究结果为滇池和洱海两湖泊鱼腥藻生态生理学的后续研究提供了基础资料。     

Aquabirnaviruses isolated from marine organisms form a distinct genogroup from other aquabirnaviruses

A phylogenetic tree of aquabirnaviruses, including marine birnaviruses (MABV) and infectious pancreatic necrosis virus (IPNV), was developed based on the nucleotide sequences and deduced amino acid sequences of the polyprotein and VP5 genes of genomic segment A. In the polyprotein of MABV strains, the amino acid sequences were very similar, with identities of 98.3-99.7%. Twenty-one unique amino acid residues were found in the deduced amino acid sequences of the polyprotein gene of MABV strains. The phylogenetic tree based on the nucleotide sequence of genomic segment A and polyprotein sequences showed that 31 aquabirnavirus strains were clustered into seven genogroups. All MABV strains isolated in Japan and Korea were clustered into one genogroup which was distinct from other aquabirnaviruses. The seventh genogroup containing all MABV strains showed amino acid sequence similarities of 80.7-90.6% with other genogroups. In VP5, four unique residues were found in MABV strains when compared with IPNV strains. The MABV strains exhibited amino acid sequence similarities of 63.9-86.4% with IPNV strains. The amino acid sequences of VP5 were conserved among MABV strains, but differed from those of IPNV strains. The MABV strains isolated from different host species and different geographical areas were very similar to each other, suggesting that the MABV are distinct from the other genogroups.     

Detection and molecular characterization of infectious spleen and kidney necrosis virus from major ornamental fish breeding states in Peninsular Malaysia

‘Gold standard’ OIE reference PCR assay was utilized to detect the presence of infectious spleen and kidney necrosis virus (ISKNV) in freshwater ornamental fish from Malaysia. From total of 210 ornamental fish samples representing 14 species, ISKNV was detected in 36 samples representing 5 fish species. All positive cases did not show any clinical signs of ISKNV. Three restriction enzymes analyses showed that the fish were infected by identical strains of the same virus species within Megalocytivirus genus. Major capsid protein (MCP) genes of 10 ISKNV strains were sequenced and compared with 9 other reference nucleotide sequences acquired from GenBank. Sequence analysis of MCP gene showed that all strains detected in this study were closely related to the reference ISKNV with nucleotide sequence identity that was ranging from 99.8% to 100%. In addition, phylogenetic analysis of MCP gene revealed that viruses from genus Megalocytivirus can be divided into three genotypes: genotype 1 include reference ISKNV and all other strains that were detected in this study, genotype 2 include viruses closely related to red sea bream iridovirus (RSIV), and genotype 3 include viruses closely related turbot reddish body iridovirus (TRBIV).     

中国南方地区罗非鱼无乳链球菌的分子流行病学研究

从广东省以及海南省等地区养殖的患病罗非鱼体内分离、收集到多株致病菌,经生化分析和分子生物学鉴定,均为无乳链球菌。对这些菌株分别进行了耐药谱测定、分子分型试验以及分子血清型分析。药敏试验结果表明,2007—2010年分离到的无乳链球菌耐药谱基本相似;多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)试验中,选择5个高变异指数的可变数目重复位点(VNTR)进行分子分型,结果表明,所有鱼源无乳链球菌菌株为同一MLVA型,而作为对照的牛源无乳链球菌则明显不同;为了对这些菌株进一步分型,分别进行了分子血清型和表面蛋白抗原基因的检测,结果表明,鱼源无乳链球菌的分子血清型均为Ⅰa型,表面蛋白抗原均为alpha-C蛋白。这进一步说明了不同年份和不同地区的鱼源无乳链球菌在基因水平上为同一分子类型,具有相同的起源或传染源。同时也说明,我国南方地区罗非鱼无乳链球菌在这几年中未发生明显的遗传变异。这些结果为罗非鱼无乳链球菌病疫苗研制,疫病监测及药物防治的研究提供理论依据。