棉花耐盐胚性细胞系筛选及其植株再生

 继代1年以上的棉花品种珂字201下胚轴产生的胚性愈伤组织，转入加有不同浓度[0、8.56×10#+(-2)、1.71×10#+(-1)、2.57×10#+(-1)、3.42×10#+(-1)、5.13×10#+（-1）、6.84×10#+（-1）mol/L]NaCl的筛选培养基上培养，经过3代筛选，获得耐盐胚性细胞系和再生植株。NaCl显著抑制了愈伤组织的存活和生长，NaCl半致死浓度在8.56×10#+（-2）～1.71×10#+（-1）mol/L之间，致死浓度为6.84×10#+（-1）mol/L。NaCl浓度影响着体细胞胚的发生和发育，影响着体细胞胚的萌发和植株再生。添加1.71×10#+（-1）mol/L NaCl培养基，筛选出的愈伤组织生长较好，并能分化出体细胞胚和正常再生植株。在本实验中，笔者获得了耐3.42×10#+（-1）mol/L NaCl的体细胞胚和耐1.71×10#+（-1）mol/L NaCl的正常再生植株。     

HAL1基因转化烟草及其耐盐性

利用含HAL1基因的高效植物表达栽体pAHF转化根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens．LBA4404),用农杆菌介导的叶圆盘法对烟草(Nicotiana tabacum L．)叶片进行遗传转化。在含卡那霉素的MS分叱培养基上选择转化体和植株再生,转化植株可在含卡那霉素的生根培养基中生根。经PCR检测发现,在8个转化子中有6个转化子获得特异性扩增条带。耐盐试验表明,在被检测的900株转化子中有481株可在含0．80％～1．50％NaCI的生根培养基中生根,生根率为53．45％,对照烟草植株只在低于0．80％NaC1的生根培养基中生根,生根率为73．75％。由此证明HAL1基因的转入提高了烟草的耐盐性。     

大叶蒲公英愈伤组织耐盐突变体诱导与鉴定

为获得大叶蒲公英耐盐突变体,以其叶片为外植体,进行了愈伤组织耐盐突变体的筛选。结果表明,愈伤组织诱导和增殖的最佳培养基分别为MS+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 0.04 mg/L与MS+6-BA 0.4 mg/L+2,4-D 0.02 mg/L+NAA 0.2 mg/L。将继代培养5次的愈伤组织接种在含有不同质量浓度盐的诱导培养基上,经过4次耐盐胁迫,筛选出了耐盐的愈伤组织突变体。通过RAPD检测发现,在NaCl质量浓度为8、10、12 g/L的培养基上愈伤组织扩增条带与不含NaCl的培养基(对照)有差异,证明耐盐的愈伤组织中确实产生了DNA的突变。     

NaCl胁迫对两种锦鸡儿种子萌发的影响

[目的]研究不同NaCl浓度胁迫下两种锦鸡儿种子的耐盐性.[方法]分别采用0、0.05、0.1、0.15、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8和1 mol/L NaCl溶液对白皮锦鸡儿和镰叶锦鸡儿种子萌发进行胁迫处理,测定指标.[结果]在0～0.3 mol/LNaCl盐溶液范围内,镰叶锦鸡儿种子萌发率达到70;以上,白皮锦鸡儿达到90;以上,说明白皮锦鸡儿比镰叶锦鸡儿具有更强的耐盐性;镰叶锦鸡儿种子耐盐适宜值为0.107 1 mol/L,临界值为0.325 8mol/L,极限值为0.544 5 mol/L;白皮锦鸡儿种子耐盐适宜值为0.199 6 mol/L,临界值为0.420 1 mol/L,极限值为0.640 6 mol/L.[结论]不同浓度的NaCl胁迫对白皮锦鸡儿和镰叶锦鸡儿种子的萌发均有抑制作用,总趋势均为随NaCl浓度的增加而降低,在无盐处理中获得最大的萌发率;根据两种锦鸡儿植物种子萌发耐盐性比较,两种锦鸡儿植物均具有较强的耐盐性.     

花生上胚轴为外植体的植株再生及转化研究

以8 d龄花生无菌苗的上胚轴为外植体,进行植株再生和农杆菌介导遗传转化研究.结果表明,上胚轴能高效诱导花生植株再生,外植体在MS 3 mg/L TDZ 6 mg/L 6-BA 1.5 mg/L NAA培养基上能高效诱导不定芽分化,10 d时诱芽率达100%;不定芽接种到MS盐 B5维生素 3mg/L TDZ 0.01%酵母粉培养基中15 d诱导出大量丛生芽;MS 0.5 mg/L NAA培养基较适合诱导丛生芽生根,25 d时生根率达82%.筛选确定35 mg/L潮霉素浓度为转化筛选压,以含AtRD29Ap::GUS融合基因的根癌农杆菌侵染8 d龄上胚轴10 min,共培养3 d,经上述再生体系,以潮霉素筛选获得1株拟转化再生植株.     

驱蚊香草快繁体系的建立及工厂化育苗主要影响因素研究

以驱蚊香草的幼嫩叶片作外植体,在含不同激素的不同培养基上进行丛生芽的诱导、芽的继代增殖、芽生根与移栽研究,以快速获得再生植株。结果表明,丛生芽诱导培养基以MS 6-BA1.0mg/L NAA0.1mg/L较好,诱导率为96%;增殖培养基以MS(B5) 6-BA0.5mg/L NAA0.1mg/L较好,增殖系数达8倍以上,且增殖芽生长好;壮苗培养基为MS(B5) 6-BA0.1mg/L NAA0.2mg/L为好;生根培养基以1/2MS NAA0.1mg/L和MS IBA0.2mg/L为最佳,生根率达100%,幼苗生长势旺。影响工厂化育苗的主要因素有激素浓度、继代次数和移栽管理。     

基因枪法介导的魔芋遗传转化研究

利用基因枪轰击法建立了魔芋的遗传转化体系。试验结果表明,氦气压力／轰击距离以7．58 GPa／9cm最适。在轰击前4 h和轰击后16 h用附加有0．4 mol／L甘露醇的MS培养基进行高渗处理、轰击后恢复培养6～7 d,有利于减少逆境伤害,增加转化成功的几率。早期选用1 mg／L Basta作为选择压,而后期的筛选使用2 mg／L较高浓度的Basta可以获得真正的转化子。对获得的91株抗性植株进行了PCR检测,结果显示21株呈阳性,表明PAT基因和AGPS1反义基因均已整合进魔芋基因组。     

植物抗病基因snc1在超级杂交稻父本0293中的遗传转化

以超级杂交稻父本0293为材料,利用农杆菌介导基因转化法研究植物抗病基因snc1在超级杂交稻父本中的遗传转化。结果表明:0293成熟胚愈伤组织的最适诱导培养基为NMB诱导培养基,2,4–D和6–BA的最适质量浓度分别为3.0和0.2 mg/L;以LB液体培养的农杆菌转化能力最强,抽真空转化方式获得的抗性愈伤率较高,最适共培养时间为2 d;麦芽糖为抗性愈伤组织分化的最适碳源,NMB+KT 0.4 mg/L+6–BA 2.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+IAA 0.5 mg/L为较适合的分化培养基;通过优化农杆菌介导的遗传转化条件,共获得6株含目的基因snc1的转化植株。     

用ro/B基因转化大红甜橙的初步研究

为建立大红甜橙的再生及遗传转化体系,提高转化芽的成株率,以30d龄的大红甜橙(CitrussinensisOsbeck)实生苗上胚轴为材料,导入rolB基因,进行遗传转化研究.结果表明:MS+3.0mg/L6-BA培养基诱导不定芽的效果最好,达95%以上.遗传转化时,采用培养基Ⅱ(MS+3mg/L6-BA+200μmol/LAs)+培养基Ⅳ(MT+3mg/L6-BA+50mg/LKan+500mg/LCef)组合的抗性芽诱导最快,诱导率为51%.用微芽嫁接的方法,将抗性芽嫁接到卡里佐枳橙上,成苗良好,已获得19株转rolB基因植株,盆栽在温室中生长良好.     

甘蓝型油菜雄性不育系B2子叶和下胚轴高频再生体系的建立

【目的】探索甘蓝型油菜雄性不育系B2子叶和下胚轴的最佳离体培养条件。【方法】以甘蓝型油菜雄性不育系B2无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,研究了苗龄、预培养时间、预培养基和分化培养基中激素配比等对甘蓝型油菜雄性不育系B2子叶和下胚轴高频再生的影响。【结果】4因素对甘蓝型油菜雄性不育系B2子叶和下胚轴的再生均有明显影响。4 d苗龄,在MS+6-BA 1mg/L+2,4-D 1mg/L预培养基上预培养3 d后诱导分化,子叶在添加NAA 0.02 mg/L+6-BA 3.0 mg/L的分化培养基中分化率最高,达80.45%,下胚轴在添加NAA 0.05 mg/L+6-BA 3.0 mg/L的分化培养基中分化率最高,达69.33%。【结论】建立了甘蓝型油菜雄性不育系B2子叶和下胚轴稳定高效的再生体系,为其遗传转化奠定了基础。     

高温纤维素分解菌筛选及JSU-5产纤维素酶特性研究

[目的]为产纤维素酶菌株的选育和产酶研究提供参考依据。[方法]从牛粪和麦秸秆堆肥中筛选出高温纤维素分解菌,对其产纤维素酶的条件：碳源、氮源、pH值、NaCl浓度、装液量等进行研究,并用正交试验确定最佳发酵条件。[结果]从筛选出的分解纤维素的11株高温菌种中选出产酶活性较高的JSU-5。其高温产酶条件优化结果表明,当pH值在6左右时,产酶活性最高;培养时间为5 d时,产酶活性最高;以麦草为碳源,产酶活性最高;以黄豆饼粉为氮源,产酶活性最高;较为适合的钠盐浓度为0.2%。培养基组分中影响纤维素酶活性的主要因素为碳源、水分和氮源。[结论]菌株JSU-5产纤维素酶培养基的最佳营养组成为麦草装量50 g/L,黄豆饼粉30 g/L,NaCl2 g/L,装液量60 ml,pH值为6.0,发酵温度为50℃。该条件下所产酶活力为113.4 U/ml。     

海洋产几丁质酶菌株的筛选及发酵条件优化

通过透明圈法初筛、DNS复筛,从大连近海海域的海泥中分离出一株高产几丁质酶的菌株,经初步鉴定为扩展短杆菌(Brevibacterium linens).采用不同碳源、氮源、温度、pH值等对培养条件进行了优化及正交试验.结果表明:该菌产酶最适条件是在28℃、pH7.0、蛋白胨1g/L、胶体几丁质10g/L、NaCl 20g/L条件下,几丁质酶活力可达0.508 U/mL,比优化前其产酶活力提高了9倍.     

紫晶蜡蘑的营养优化及生长模型

选出紫晶蜡蘑菌株(Laccaria amethystea-0704;简称L.a.-0704)适宜培养基,在L.a.-0704碳源及氮源营养选择的基础上,采用通用旋转回归设计进行培养基配方优化。得到L.a.-0704菌丝体培养的最佳配方为麦芽浸粉4.1 g/L,尿素1 g/L,蔗糖4.3 g/L,酵母浸膏3.5 g/L,CaCl20.05 g/L,(NH4)2HPO40.25 g/L,NaCl 0.025 g/L,MgSO4.7H2O 0.15 g/L,KH2PO40.5 g/L,FeCl3(w=1%)2 mL/L,VB1100μg/L,水1 000 mL,琼脂粉12 g/L。L.a.-0704营养利用范围广,不仅能利用单糖、低聚糖和无机氮等速效碳、氮源,而且能利用多糖、多元醇和有机氮等长效碳、氮源,L.a.菌丝生长符合Loginstic模型,其菌丝生长最适碳、氮源分别为麦芽浸粉和尿素。     

解磷巨大芽胞杆菌液体发酵的培养基优化

为得到高密度发酵的最优培养基组成,以一株分离自土壤的解磷巨大芽胞杆菌为研究对象,以发酵液OD600为判断活菌数依据,进行响应面法优化试验。首先进行单因素试验筛选培养基中的碳源、氮源、碳源浓度、氮源浓度、无机盐及无机盐浓度,得到单因素最佳值;然后利用响应面设计,通过3步试验,即部分因子试验、最陡爬坡试验和中心组合试验对培养基进行优化。结果表明：该株巨大芽胞杆菌的最佳培养基质量组成为：乳糖6 g/L,蛋白胨7.45 g/L,NaCl 5 g/L,MgSO4·7H2O 2.46 g/L,CaCl2 1.22 g/L,K2SO4 0.087 g/L。在此最优培养基条件下培养,发酵液最终活菌数达到2.0×109 cfu/mL以上。运用此培养基配方进行发酵,可为农业生产提供高密度的磷细菌菌剂。     

河南省豆科植物根瘤菌表型多样性研究

在河南省根瘤菌资源调查的基础上 ,选取 2 9株快生根瘤菌和 34株参比菌株 ,进行了 10 2项表型性状测定和聚类分析。结果表明 :不同地理来源、甚至同一地理来源或同种寄主的不同菌株在碳氮源利用、抗生素抗性、耐逆性等方面存在着较大的多样性。有 7株菌对链霉素、青霉素和白霉素有较强的耐受性 ;有 2 3株和 2 5株菌可分别耐受 2 .0 g/ L的香酚兰和中性红 ;有 2株菌可在含 5 0 g/ L Na Cl的 YMA培养基上生长 ;有 6株菌在 p H值 11条件下能够生长。在 84 %的相似性水平上未知菌株构成了 2个独立的表观群 ,其中 Cluster 1有 7株菌 ,中心菌株为 H 0 38;Cluster 2有 3株菌 ,中心菌株为 H0 2 6。     

苏云金杆菌以色列亚种L-10菌株培养基优化研究

利用单因素筛选和正交试验,对苏云金杆菌以色列亚种Bti-L-10高毒菌株的发酵培养基进行了优化,得到其最佳培养基配方为:淀粉3%,氮源B 0.50%,氮源C 0.75%,氮源D 4.00%,氮源G 1.00%.通过200 L和40 000 L发酵罐分别发酵,发酵液效价分别为379 ITU/mg和327 ITU/mg,发...     

基于计算机视觉的肉质大理石花纹含量的测定

 针对传统的肉质分级方法测定大理石花纹含量存在成本高、主观性强、准确性低等问题,本文以计算机视觉技术为基础,运用统计学中的最大方差法去除了黑色背景,使用二值法对大理石花纹进行了提取,并对其含量进行了测定。研究结果表明,运用计算机视觉技术可以很好地实现胴体图像中大理石花纹区域的分割和大理石花纹含量的测定,为肉质自动分级打下基础。     

宁夏产枸杞根际固氮菌分离筛选研究

[目的]从宁夏枸杞根际筛选出适合宁夏气候特点和固氮特性表现较好的有益工程菌株。[方法]采用NFM（无氮培养基）分离具有固氮能力的菌株,测定枸杞的根表、根表土壤、根际土壤的菌株分离及固氮菌株菌落生长情况。[结果]从根表分离出菌株的个数、生长速度、单个菌株增殖数量均比从根际土壤和根表土壤分离出的多。3个部位经纯化筛选后,共得到47株具有固氮能力的菌株,其中根表分离菌株最多。[结论]宁夏枸杞根表的菌株最多,根际土壤次之,根表土壤最少。     

蛹虫草原生质体的制备和再生研究

研究了不同渗透压稳定剂、酶的种类及浓度、温度、pH、β-巯基乙醇预处理等条件对蛹虫草原生质体制备的影响,以及不同培养基对原生质体再生的影响。结果显示蛹虫草菌株原生质体的最佳制备和再生条件为:0.7 mol/L氯化钠作为渗透压稳定剂,纤维素酶5 mg/dL、蜗牛酶5 mg/dL、溶菌酶5 mg/dL、溶壁酶10μL混合酶解6 h,酶解温度为30℃,最佳pH 5,再生培养基为PDA(添加0.7 mol/L氯化钠)。     

1株产耐盐碱高温淀粉酶嗜盐菌的筛选和鉴定

[目的]研究极端嗜盐菌SYM菌株的形态和生理生化特点及其所产胞外淀粉酶性质。[方法]从江苏省盐城市射阳盐场筛选得到1株极端嗜盐菌SYM菌株,对其进行形态、生理生化和分子水平的鉴定,并对其产生的淀粉酶部分酶学性质进行研究。[结果]SYM菌株能在饱和NaCl浓度下生长,菌体细胞壁含有嗜盐古细菌特征性的甘油二醚衍生物,菌体形态为球状,菌落显橙红,经生理生化和16 SrD-NA基因序列同源性分析鉴定为嗜盐古细菌嗜盐深红菌属。SYM菌株淀粉酶最佳反应条件为1.15 mol/L NaCl、pH值7.0和温度70℃。NaCl浓度为2.65 mol/L时,酶活可以保持最高酶活的61%;80℃时,酶活可保持最高酶活的69%;pH值13.0时,酶活可保持最高酶活的76%。[结论]SYM菌株产生的淀粉酶是一种能耐受高盐高碱高温的极端酶。