柑桔花叶病毒的一种新的鉴别寄主——枸头橙

在枸头橙上接种柑桔花叶病毒（ＣｉＭＶ），以后抽发的春梢幼嫩期表现黄化症状，随着春梢叶片的伸展产生花叶症状。而在枸头上接种类似病毒温州蜜柑萎缩病毒（ＳＤＶ），以后抽发的春梢表现正常。故认为枸头橙是ＣｉＭＶ的一种新的鉴别寄主，可以区分开ＣｉＭＶ和ＳＤＶ.     

柑桔体细胞杂种的抗性研究

以４个柑桔体细胞杂种哈姆林甜橙＋飞龙炽（ＣｉｔｒｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓＯｓｂ．ｃｖ．Ｈａｍｌｉｎ＋ＰｏｎｃｉｒｕｓｔｒｉｆｏｌｉａｔａＲａｆ．ｃｖ．ＦｌｙｉｎｇＤｒａｇｏｎ）、哈姆林甜橙＋粗柠檬（Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓＯｓｂ．ｃｖ．Ｈａｍｌｉｎ＋Ｃ．ｊａｍｈｉｒｉＬ．）、伏今夏橙＋宁波金柑（Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ，Ｏｓｂ．ｃｖ．Ｖａｌｅｎｃｉａ十ＦｏｒｔｕｎｅｌｌａｃｒａｓｓｉｆｏｌｉａＳｗｉｎｇｌｅｃｖ．Ｍｅｉｗａ）、伏令夏橙＋宜昌橙（Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓＯｓｂ．ｃｖ．Ｖａｌｅｎｃｉａ＋Ｃ．ｉｃｈａｎｇｅｎｓｉｓＳｗｉｎｇｌｅ）及其融合亲本为试材，对其抗寒性、耐热性和抗脚腐病性能进行了研究，并从叶片膜脂脂肪酸成分分析了体细胞杂种的抗寒性和耐热性。研究结果表明，哈姆林甜橙＋飞龙枳杂种表现抗脚腐病、抗寒（－１４℃）、耐热（５２℃）、矮化、半落叶、扦插易生根，是极有希望的新砧木类型；伏令夏橙＋宜昌橙杂种表现抗寒（－１２℃）；哈姆林甜橙＋粗柠檬杂种表现耐热（５３℃）。４个体细胞杂种的抗性较之抗性弱的亲本一方都有提高。     

枸头橙茎陷点病种子带毒的鉴定（初报）

枸头橙茎陷点病种子带毒的鉴定（初报）陈国庆，王洪祥，严森祥（浙江省科学院柑桔研究所３１７４００）由柑桔衰退病毒（ＣｉｔｒｕｓｔｒｉｓｔｅｚａＶｉｒｕｓ，ＣＴＶ）引起的茎陷点病是目前世界上为害柑桔最严重的病害之一。长期以来一直认为该病可通过嫁接和几种蚜...     

温州蜜柑船形叶病因研究再报

试验表明我国田间温州蜜柑上的船形叶多数不是由温州蜜柑萎缩病毒（ＳＤＶ）所致，其中部分具有嫁接传染性，经ＥＬＩＳＡ检测带柑桔衰退病毒（ＣＴＶ）。用ＣＴＶ接种温州蜜柑，可致船形叶症状。推测我国田间温州蜜柑船形叶症状主要系ＣＴＶ所致。     

温州蜜柑船形叶病因研究再报

试验表明我国田间温州蜜柑上的船形叶多数不是由温州蜜柑萎缩病毒（ＳＤＶ）所致，其中部分具有嫁接传染性，经ＥＬＩＳＡ检测带柑桔衰退病毒（ＣＴＶ）。用ＣＴＶ接种温州蜜柑，可致船形叶症状。推测我国田间温州蜜柑船形叶症状主要系ＣＴＶ所致。     

北京地区番茄病毒病毒原种类的监测与黄瓜花叶病毒株系的鉴定

北京地区番茄病毒病的主要毒原种类有番茄花叶病毒（ＴｏＭＶ）、黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）、马铃薯Ｘ病毒（ＰＶＸ）、马铃薯Ｙ病毒（ＰＶＹ）、烟草蚀纹病毒（ＴＥＶ）和苜蓿花叶病毒（ＡＭＶ），分别占样本的６５．２％、３０．１％、６．８％、２．５％、１．３％和１．２％。保护地及春露地番茄生长前期主要受ＴｏＭＶ的侵染，５月底以后ＣＭＶ的为害显著加重，甚至造成夏番茄绝产。番茄上ＣＭＶ可划分为４个株系，即轻花叶株系、重花叶株系、坏死株系及黄化株系。分别占分离物的２３．５％、６４．７％、５．９％和５．９％。     

提高草莓茎尖组织培养脱毒效率研究

采用茎尖２次脱毒法，对宝交早生等６个草莓品种茎尖进行组培脱毒，经检测可全部脱除草莓斑驳病毒（ＳＭｏＶ）、草莓轻型黄边病毒（ＳＭＹＥＶ）、草莓镶脉病毒（ＳＶＢＶ）和草莓皱缩病毒（ＳＣｒＶ）。茎尖２次脱毒法，操作简便、易掌握，脱毒率达１００％，分化率达７９％。     

大蒜花叶病原病毒的鉴定和茎尖脱毒效果

用洋葱黄矮病毒（ＯＹＤＶ）等９种酶标抗体，以常规酶联夹心法检测国内外５７份大蒜品种带病毒状况，同时，以诱捕修饰免疫电镜技术复核酶联法进行检测，结果表明，被检的５７份大蒜品种带有：洋葱黄矮病毒，韭葱黄条病毒（ＬＹＳＶ），亚实基隆葱潜隐病毒（ＳＬＶ），马铃薯Ｙ病毒（ＰＶＹ），马铃薯Ａ病毒（ＰＶＡ），马铃薯Ｓ病毒（ＰＶＳ），马铃薯Ｍ病毒（ＰＶＭ），康乃馨潜隐病毒（ＣＬＶ）和烟草花叶病毒（ＴＭＶ）等９种病毒。 诱捕修饰免疫电镜图象表明，用上述９种病毒包被的电镜载网诱捕到大量的同源病毒粒子，这些病毒粒子又分别被同源抗体分子修饰，形成连续完整的抗体分子外套。用洋葱黄矮病毒等９种酶标抗体检测茎尖组织培养再生的８０株大蒜试管苗看出，完全脱掉９种病毒的试管苗占３０％，完全未脱掉病毒、带９种病毒的试管苗占５％其余的试管苗都程度不同地脱掉了所带的几种病毒。     

转基因马铃薯外源CP基因转录表达与病毒在寄主体内复制关系

以表达马铃薯卷叶病毒（ＰＬＲＶ）外壳蛋白（ＣＰ）基因的转基因条件下马铃植株为供试材料，在接种病毒后续发感染条件下提取转基因植株ＲＮＡ，用克隆的病毒ＣＰ基因ＣＤＮＡ为探针进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析，用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）测定病毒含量，结果表明，转基因植株体内病毒积累量明显低于未转基因的对照植株，转基因植中外源ＣＰ基因的转录表达水平与病毒在体内的复制呈负相关。     

主要蔬菜病毒病害的对策

蔬菜病毒病种类繁多，为害日趋严重，给蔬菜生产带来了很大的威胁。如十字花科的蔬菜的ＴｕＭＶ（芜菁花叶病毒）。ＣＭＶ（黄瓜花叶病毒），茄科蔬菜的ＴＭＶ（烟草花叶病毒），ＣＭＶ，ＰＶＸ（马铃薯Ｘ病毒），ＰＶＹ（马铃薯Ｙ病毒），ＰＬＲＶ（马铃薯卷叶病毒），葫芦科蔬菜的ＣＭＶ，ＭＭＶ（甜瓜花叶病毒），ＷＭＶ（西瓜花叶病毒），ＣＧ－ＭＭＶ（黄瓜绿斑驳花叶病毒），豆科蔬菜的ＣＭＶ，ＢＭＶ（菜豆花叶病毒），ＢＹＭＶ（菜豆黄花叶病毒）等，这些病毒的严重危害引起了世界各国植物病理学家和蔬菜栽培及育种学家的广泛重视。…     

柑橘褪绿矮化相关病毒LAMP检测体系的建立

根据GenBank登录的柑橘褪绿矮化相关病毒(Citrus chlorotic dwarf-associated virus,CCDaV)的移动蛋白(MP)基因序列设计了一组特异性引物,经体系优化,建立了CCDaV的环介导等温核酸扩增(LAMP)检测方法。结果显示该方法能特异扩增CCDaV,与其他5种柑橘病原物(柑橘衰退病毒、柑橘碎叶病毒、柑橘裂皮病类病毒、温州蜜柑萎缩病毒和柑橘黄龙病菌)不发生反应;灵敏度为PCR的100倍,与实时荧光PCR的灵敏度相同。用LAMP方法对50个田间样品进行检测,与PCR和实时荧光PCR的检测结果一致,证明该方法可用于田间样品的检测。该LAMP检测方法可特异、灵敏、快速地对CCDaV样品进行检测。     

运用实时荧光RT-PCR技术检测柑橘碎叶病毒

柑橘碎叶病是由橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)引起的一种重要的柑橘病害,为更快、更准确的检测CTLV,合成了一对特异性引物ASG-Pf和ASG-Pr,建立了运用SYBRGreenI荧光染料法检测CTLV的实时荧光RT-PCR体系,并对该体系的特异性、灵敏性和适用性进行了测试。结果表明,该检测体系能特异的检出CTLV,对测试的衰退病毒、温州蜜柑萎缩病毒和鳞皮病毒都不能检出;灵敏度比常规PCR高100倍;适用性广,可检测出多种柑橘类植物中的CTLV。实时荧光RT-PCR检测整个过程完全闭管,无需PCR后处理,且SYBR GreenI荧光染料成本较低,适用于检测柑橘体内含量较低的CTLV病毒。     

冬瓜人工接种5种病毒后的症状观察

选择5种在葫芦科作物上常见的病毒病原：小西葫芦黄花叶病毒（Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV ）、西瓜花叶病毒（Watermelon mosaic virus,WMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）、番木 瓜环斑病毒（Papaya ringspot virus,PRSV）、南瓜花叶病毒（Squash mosaic virus,SqMV）,人工接种子叶 期的冬瓜幼苗,观察分析5种病毒在冬瓜上的症状差异。结果表明：这5种病毒均可侵染冬瓜,且不同病毒在冬瓜 上的发病时间、发病率及症状存在明显差异：显症最早的是SqMV,最迟的是WMV;发病率普遍较低,都在30 %以下 ,ZYMV的发病率仅为4 %。     

利用siRNA高通量测序和RT-PCR技术鉴定引起茄子斑驳紫花病的病毒种类

为了明确引起茄子斑驳紫花病的病毒种类,利用小干扰RNA(si RNA)高通量测序技术,结合生物信息学方法寻找茄子样本中的病毒序列,发现存在烟草轻型绿花叶病毒(Tobacco mild green mosaic virus,TMGMV)和番茄斑驳花叶病毒(Tomato mottle mosaic virus,ToMMV)。为了验证该结果,对待测样品中TMGMV和ToMMV的外壳蛋白(coatprotein,CP)全长基因进行RT-PCR扩增和系统进化分析,分别得到500bp的TMGMV-CP和482bp的ToMMV-CP特异性条带,与GenBank中TMGMV和ToMMV序列相似性分别达到98%～100%和100%,说明待测样品中确实存在TMGMV和ToMMV。对采自山东、河南、辽宁、河北等地的23份疑似斑驳紫花病茄子样品,分别采用特异性引物524-F/R和ToMMV-F/R进行检测。结果显示,所有样品中均含有TMGMV,20份样品中含有ToMMV,复合侵染检出率为86.96%。对茄子、番茄和辣椒幼苗的致病性检测显示,接种后茄子花表现出与田间相同的症状,茄子、番茄和辣椒的叶片表现典型的病毒侵染症状,在接种发病组织中检测到病毒ToMMV和TMGMV。结果表明,茄子斑驳紫花病样中鉴定出TMGMV和ToMMV两种病毒。     

柑橘黄化脉明病毒RT-LAMP检测方法的建立

柑橘黄脉病由柑橘黄化脉明病毒（Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV）引起,是中国近年来新发生的一种柑橘病害。根据CYVCV的外壳蛋白基因序列设计了一组特异性引物,经过一系列条件优化,建立了该病毒的RT-LAMP检测方法。结果显示该方法能特异扩增CYVCV,与其他6种柑橘病原物（柑橘衰退病毒、温州蜜柑萎缩病毒、鳞皮病毒、柑橘裂皮病类病毒、柑橘碎叶病毒和柑橘黄龙病菌）不发生反应;灵敏度为RT-PCR的10倍;田间样品的检出率为63.33%,与RT-PCR的结果一致,适用于田间样品的检测。在产物中加入荧光染料SYBR GreenⅠ直接用肉眼观察就可判断样品是否感染CYVCV,可省去电泳分析的时间。该方法具有特异性强、灵敏度高、操作简单、快速等特点。     

重庆南瓜病毒病病原ELISA 检测及CMV 变异分析

 利用7 种植物病毒的抗体,对采自重庆7 个区县的67 份南瓜病毒病样品进行了抗原直接包被酶联免疫吸附分析（ACP-ELISA）检测。检测结果表明,在这67 份样品中,至少59 份感染了所要检测病毒,其中,感染黄瓜花叶病毒 (Cucumber mosaic virus, CMV)、烟草花叶病毒 (Tobacco mosaic virus,TMV)、番茄花叶病毒 (Tomato mosaic virus, ToMV)、芜菁花叶病毒 (Turnip mosaic virus, TuMV)、蚕豆萎蔫病毒2 号 (Broad bean wilt virus 2, BBWV-2)、马铃薯Y 病毒 (Potato virus Y, PVY)和马铃薯X 病毒(Potato virus X, PVX) 的样品分别为80.60%、77.61%、74.63%、82.09%、76.12%、83.58%和55.22%。在检测呈阳性的59 份样品中有93.22%的样品受到2 种以上病毒的复合侵染,而受7 种病毒复合侵染的样品高达60.00%,表明在南瓜上病毒复合侵染现象相当严重。进一步对54 份受CMV 侵染的南瓜样品检测发现,CMV 亚组Ⅰ (CMVⅠ) 病毒侵染的样品有49 份,占90.74%,CMV 亚组Ⅱ (CMVⅡ) 病毒侵染的样品为11 份,占20.37%;其中6 份（11.11%）样品检测到CMVⅠ和CMVⅡ的复合侵染。以免疫捕获反转录PCR (IC-RT-PCR) 扩增了一个CMVⅠ分离物 (CMV-CQ) 近全长CP 基因并进行序列分析,结果证实其属于CMV 亚组Ⅰ型,其核苷酸序列与国内CMVⅠ型赤豆分离物 (CMV-RB) 的同源性最高,为98.1%。     

Analysis of virus structure variants in before- and after-thermotherapy-treated apple plants

Pre-thermotherapy apple plants and their homologous regenerated virus-infected apple plants were used to analyze the effect of high temperature on the structure of plant virus variants. The target bands of apple chlorotic leaf spot virus (ACLSV), apple stem grooving virus (ASGV), and apple mosaic virus (ApMV) in the plants of the two populations were purified and cloned, and 16 positive clones of each sample were randomly selected for single-strand conformation polymorphism (SSCP) analysis. The results showed that a predominant haplotype could be found in the two populations. The main variant was the same both in the regenerated and homologous treated plants, but the percentages in regenerated plants could be lower than, the same as, or higher than that in pre-thermotherapy plants. Two types could be divided depending on the percentage of the predominant haplotype in the treated plants, diversity (less 70%) and simple (more 80%), respectively. The clones of different haplotype in each isolates were sent to sequence, and the alignment results in accordance with that of the SSCP analysis. All the results indicated that thermotherapy could not affect the predominant variants of virus in treated plants, just change its percentage.     

辣椒病毒病发生及防治药剂筛选

近年来,随着辣椒种植面积的扩大,辣椒病毒病的为害逐年加重.重庆石柱县辣椒病毒病的田间调查显示:该县辣椒病毒病发生较普遍,以花叶和矮缩畸形混合发生为主,而坏死只有零星发生.田间药效试验结果表明:几种常见药剂对辣椒病毒病均有一定的防治效果,以植病灵效果最好.     

温州蜜柑萎缩病毒小外壳蛋白基因克隆与原核表达及其抗体制备

 用RT-PCR方法,从采自重庆奉节的‘宫本’柑橘的2个样品中扩增出温州蜜柑萎缩病毒（Satsuma dwarf virus,SDV）SDV RNA2的3′末端,长度为975 bp,与报道的SDV S-58 3′末端序列同源性分别为98.7%和98.4%。根据获得的序列设计引物,以含有SDV FJ 3′末端序列的质粒为模板,PCR扩增获得大小为 654 bp的SDV-FJ小外壳蛋白（Small coat protein,CPS）基因产物。构建了CPS与GST融合表达载体PGEX-CPS,在37 ℃、1.0 mmol · L-1 IPTG条件下诱导表达,SDS-PAGE电泳分析表明成功表达出分子量约为42 kD的GST-CP融合蛋白。以表达的融合蛋白为抗原免疫家兔,制备的抗血清的效价为1/12 800。用获得的抗体进行组织印迹分析表明,SDV在柑橘叶柄基部韧皮部维管束区域含量最高。     

ScYLV和SrMV的PCR引物优化设计

以甘蔗黄叶病毒（Sugarcane yellow leaf virus,,ScYLV）和高粱花叶病毒（Sorghum mosaic virus,,SrMV）为材料,运用DNAMAN、Primer Premier 5.0和Oligo6.0等软件设计PCR引物,,进行普通PCR、多重PCR、实时定量PCR反应,检验所设计引物的PCR扩增效率、特异性和有效性。归纳总结多种PCR反应中引物设计的一般性思路,提出启发性的方法,并将以上经验付诸实践检验;最后将研究思路概括为：针对性、实用性和一般性。