精子载体转基因技术的最新研究进展

用动物精子作为外源DNA载体已成为转基因的主要方法之一,并在多种动物上获得成功.最近,人们对外源DNA与精子结合的分子机理进行深入研究发现外源DNA可与精子膜上30～35 kDa蛋白质特异结合,结合强度受精子膜上MHCII因子的调节.精清中的IF-1因子能抑制精子结合外源DNA,从而维持物种的遗传稳定性.精子结合外源DNA的量是恒定的,部分DNA能进入精子核内,CD4蛋白具有转运外源DNA进入精子核内的功能.进入核内的外源DNA牢固结合在精子核骨架上,然后整合到染色体的特异位点.但是,精子与外源DNA结合后能激活精子内的核酸酶,进而使外源DNA分子降解,可能是导致这种转基因方法稳定性差的主要原因.     

精子载体转基因技术研究进展

精子因在受精过程中的独特作用,而被公认为是转移外源DNA的理想载体,且操作简便,成本低廉,危险隐患相对较低,近十几年来的研究结果表明精子载体介导法可以得到转基因阳性动物.本文对精子载体转基因方法、精子载体转基因的机理、影响精子与外源DNA结合的因素以及外源DNA在宿主动物中的存在形式等方面进行了论述,并对精子作为载体的研究方向和前景给予了预测.     

精子载体转基因技术的最新研究进展

用动物精子作为外源ＤＮＡ载体已成为转基因的主要方法之一，并在多种动物上获得成功，最近，人们对外源ＤＮＡ与精子结合的分子机理进行深入研究发现：外源ＤＮＡ可与精子膜上３０～３５ｋＤａ蛋白质特异结合，结合强度受精子膜上ＭＨＣＩＩ因子的调节。精清中的ＩＦ－１因子能抑制精子结合外源ＤＮＡ，从而维持物咱的遗传稳定性。精子结合外源ＤＮＡ的量是恒定的，部分ＤＮＡ能进入精子核内，ＣＤ４蛋白具有转运外源ＤＮＡ进入精子     

精子载体转基因法研究进展

精子载体转基因法是以动物精子为载体，并通过显微注射等途径而完成转基因的一种方法。本文就近年来该领域的研究现状、存在的问题等进行了综述，并对其前景做一展望。     

精子载体法制作转基因动物的可行性

精子载体法转基因由于具有简便易行、对卵原核无损伤等特点，而成为最具诱惑力的转基因方法之一。近年来，已经通过该方法获得了多种转基因动物，从而对精子载体法制作转基因动物的可行性提供了证据。笔者对精子载体法的可行性、机制、提高转基因效率等方面作了简要综述。     

精子载体法制作转基因动物的可行性

精子载体法转基因由于具有简便易行、对卵原核无损伤等特点,而成为最具诱惑力的转基因方法之一近年来,已经通过该方法获得了多种转基因动物,从而对精子载体法制作转基因动物的可行性提供了证据.笔者对精子载体法的可行性、机制、提高转基因效率等方面作了简要综述.     

精子载体法转基因技术研究进展

精子载体法是以精子作为外源基因的载体,在受精过程中将外源基因导入动物胚胎,从而使外源基因进入子代的基因组中。作者就精子结合外源基因的机制,精子与外源基因结合的方法、影响精子转染外源基因和生产转基因动物的精子因素进行简要介绍,并对发展起来的输精管内注射转染法、曲细精管微注射法和睾丸直接注射法等精子载体转基因新途径进行综述。     

哺乳动物精子载体转基因技术新研究

精子载体法是以精子作为外源基因的载体，在受精过程中将外源基因导入动物胚胎，从而使外源基因进入子代的基因组中。相对于显微注射法、反转录病毒感染法、胚胎干细胞法等方法而言，它的主要优点是利用精子的自然属性克服了人为机械操作给胚胎造成的损伤，提高了转基因效率，而且操作简便、成本低廉。因而成为转基因动物研究的热点技术。现就精子结合外源基因的机制进行简要介绍，并对发展起来的精子细胞输精管内注射法、曲细精管徽注射法和睾丸直接注射法等精子载体转基因新途径进行综述。     

家蚕精子介导转基因技术体系的优化

为了构建高效的家蚕转基因技术,对采用piggyBac转座载体的家蚕精子介导转基因的主要技术参数进行优化,结果表明外源DNA的稀释剂和注射方式对导入效率影响较大,G0代未整合的外源DNA在5龄期前基本被降解破坏。推荐的家蚕精子介导基因转移技术方案为:处女蛾交尾囊注射6～8μL以0.1×TE稀释的2 g/Lpig-gyBac转座子载体DNA后正常交配产卵,根据G0代5龄期及蛾期PCR检测标记基因为阳性的蛾区自交,G1代阳性个体自交以获得纯合后代。     

生物钟基因Clock研究进展

在哺乳动物中,Clock基因是最早被发现和鉴定的生物钟基因。它编码BHLH／PAS转录因子家族成员,是动物近日节律的调控者,在节律时钟的组织中起着中心作用。小鼠Clock基因长约100 kb,有24个外显子,cDNA全长约10 kb。它影响小鼠的发情周期和妊娠情况。人类hClk的cDNA编码蛋白(CLOCK)序列为2538 bp,其中89％与鼠类似。846个氨基酸残基,其中96％与鼠的CLOCK蛋白一致。位于4号染色体长臂(4q12),含20个外显子,其内含子／外显子的组成也与小鼠一样。     

山羊胚胎移植研究进展

概述了山羊胚胎移植技术的研究进展，包括同期发情，超数排卵，胚胎移植，胚胎分割，胚胎冷冻，体外受精，胚胎的性别鉴定，克隆山羊等研究方面。     

基于piggyBac转座子转hGM-CSF基因家蚕的研究

将由家蚕核型多角体病毒IE-1基因启动子控制下的hGM-CSF基因克隆到p igA3GFP载体中,构建了家蚕转基因载体p igA3GFP[IE-GMCSF],利用压力渗透法和精子介导法将其与辅助质粒helper p igA3一起导入家蚕蚕卵,获得产生绿色荧光的家蚕,次代产生荧光蚕的比例分别为0.17%,0.15%。将次代荧光蚕与正常蚕交配后代(G1)的荧光蚕个体再相互杂交,连续进行多代选育,获得了稳定遗传的转hGM-CSF基因家蚕品系。     

The Use of Sex-Sorted Stallion Semen in Embryo Transfer Programs

Sorting stallion semen into two separate populations of enriched X- or Y-bearing sperm can be done successfully. For this, stallion semen can be shipped to a sorting facility, but the mare must be in close to the sorting laboratory. Fertility rates when using 20-40 million sperm are an acceptable 60% per insemination. The procedure can be implemented in embryo transfer programs, with no deleterious effect on the pregnancy rate or embryonic death.     

精子载体法获得转人her2基因猪

将带有外源基因的载体酶切纯化后与去精清的猪新鲜精液按比例混合，17℃静置处理使外源DNA进入精子头部，通过人工授精使受体母猪怀孕后产下20头仔猪，经PCR特异性片段扩增，特异片段序列测定和比对，共4头PCR结果为阳性。初步证明人her2基因已在猪染色体上整合，其整合率约为20％。本研究利用精子载体法成功获得了转基因阳性猪，为大动物的转基因研究提供了理论与实践的参考。     

精子介导转基因技术的研究与应用

精子载体转基因技术(SMGT)自1989年创立以来即以其高效、低耗、操作简便等特点引起了众多科学家的广泛兴趣.综述了精子载体转基因的相关机理、常用方法和影响因素等方面的研究进展.