基因工程固氮菌肥对玉米生长发育的影响初探

采用大田栽培及盆栽试验两种方法，对工程菌株ＵＢ３７及野生菌株ＵＢ１在不同施肥水平下，对玉米植株的固氮效果进行观测，利用公顷产量、棒三叶面积以及植株干重、全Ｎ含量等指标进行评定，结果表明：工程菌ＵＢ３７的固氮效率比野生菌ＵＢ１高，但差异不显著。     

云南七彩花生根瘤菌固氮能力及其与豆血红蛋白含量的关系

为了阐明豆血红蛋白在花生与根瘤菌互作关系中的作用，通过对云南省元谋干热河谷区七彩花生根瘤中分离到的29株慢生根瘤菌进行盆栽接种试验，研究了各菌株对云南七彩花生生物量和植株全氮与豆血红蛋白含量的影响，探讨了植物生物量、根瘤菌固氮能力与豆血红蛋白总量和根瘤鲜质量的关系。结果表明：与对照组相比，接种各根瘤菌菌株后植株生物量、株高均明显提高，总体上不同根瘤菌之间的固氮能力差异不显著，其中来自七彩花生种植地的根瘤菌固氮效果高于其他来源的根瘤菌。豆血红蛋白总量、根瘤鲜质量均与花生生物量和植株氮总量呈极显著正相关，但豆血红蛋白总量的解释力更高。去除根瘤质量的影响后，花生生物量、植株氮总量与豆血红蛋白含量仍具有极高的相关性，表明豆血红蛋白是影响花生根瘤固氮能力的关键因素，可以作为筛选高效固氮根瘤菌菌株的重要指标。此外，本研究表明，作为云南省的乡土品种，七彩花生可以通过豆血红蛋白的增减来调节对不同固氮能力根瘤菌的资源投入，实现其与根瘤菌共生关系间的奖惩机制。     

热研2号柱花草高效固氮根瘤菌的筛选

为筛选与热研2号柱花草相匹配的高效固氮根瘤菌菌株，本研究进行了砂培试验，将22个根瘤菌菌株接种到热研2号柱花草根部，通过对柱花草茎叶干重、株高、氮和磷含量、有效根瘤数、固氮酶活性等指标的测定与分析，确定与柱花草匹配的高效菌株。结果表明：接种根瘤菌后，热研2号柱花草的茎叶干重和含氮量均高于不接种的植株，但菌株间的接种效果差异较大；接种菌株PN13-3、BS1-1、DH10-3、YM11-1、DH4-2和LZ3-2有利于产量和质量的提高，为热研2号柱花草的高效固氮匹配菌株；而接种菌株DF6、ZJ2-2、RJS9-2、NX1和RJS9-1对热研2号柱花草产量和质量的提高作用不大。     

吉林辽宁两省不同大豆品种自然固氮能力调查

对吉林黑土和辽宁棕壤上的１８个大豆品种分别作了自然固氮能力调查，结果说明在同样条件下不同种质大豆的固氮能力有很大差异。两年结果表明，吉林２１，吉林２３，长８２１０－４，吉林２７等有较高的固氮能力。吉２３无论植株干重还是固氮量均为最高。辽宁以辽８６－５４５３，辽８５－８５３８，８３－５０２０表现较好，其中辽８６－５３５３最好。同时还讨论了同一大豆品种不同菌株共生时对共生体系固氮能力的影响。     

甜菜坏死黄脉病毒（BNYVV）的快速检测技术及在抗病育种上的应用

应用ＢＮＹＶＶ抗体球蛋白，建立了快速检测ＢＮＹＶＶ的间接酶跌免疫吸附技术（Ｉｎｄｉｒｅｃｔ－ＥＬＬＳＡ），该法检测含抗原材料仅需４．５小时，较国际通用程序缩短２０余小时。主要程序包括：抗原经３７℃包被２小时后，加ＢＮＹＶＶ抗体球蛋白ＩｇＧ，３７℃孵育１小时，然后加过氧化物酶标记的单抗兔ＩｇＧ，３７℃孵育１小时，最后加底物液邻笨二胺，常温下反应１５～３０分钟，应用该法对采集的４份标样进行测定，其中两份测出含有ＢＮＲＶＶ，对不同抗感丛根病性品种（系）经室内病土盆栽或病田栽培，调查病情并取样测定根部ＢＮＹＶＶ含量，结果表明。品种间存在显著差异，ＢＮＹＶＶ含量、病情与品种（系）抗病性表现基本一致。     

剑麻根际联合固氮菌的分离及固氮活性测定

通过选用NFM、CCM、Ashby及改良的Dobereiner培养基,利用气相色谱仪(GC)对海南省昌江县、广西扶绥县和广东雷州市三地剑麻种植基地的剑麻根际联合固氮菌进行分离、纯化及利用乙炔还原法进行固氮活性测定,获得50株具有固氮活性的菌株,其固氮酶活性最高的菌株是ASN004,固氮酶活性为1765.6590 nmol/(mL·h),具有开发利用的潜力。     

GUS基因和NPTII基因在转基因花生后代的遗传研究

对β－ 葡糖苷酸酶（ＧＵＳ）基因在转基因花生Ｔ１－ Ｔ３ 代植株中的活性测定和ＮＰＴ ＩＩ基因在Ｔ３ 代植株中的活性和ＰＣＲ检测表明：Ｔ１ 代的ＧＵＳ基因为１ ∶１、３∶１ 等分离, Ｔ２ 和Ｔ３ 代ＧＵＳ基因符合３ ： １ 单基因显性遗传规律的植株数增加,１ ： １ 分离单株比例逐渐减少。从Ｔ３ 代中就可选择到ＧＵＳ基因纯合的单株,得到了４ 株遗传性稳定的单株,说明ＧＵＳ基因在转基因花生植株后代的遗传应属于单基因显性遗传规律。实验证明,位于同一质粒上的ＧＵＳ和新霉素磷酸转移酶（ＮＰＴ ＩＩ）基因,在转基因花生植株中表现为连锁遗传。     

接种根瘤菌对西南地区大豆光合性能和固氮能力的影响

为探讨接种根瘤菌对西南地区大豆固氮能力的有效性,在大田试验条件下,以根瘤菌株 Bradyrhizobium japonicum5038和B. japonicum 5136侵染南黑豆20和南夏豆25,比较两个大豆品种接种后植株的光合特性和叶绿素 含量,考察根瘤数量并测定分析其蔗糖含量、豆血红蛋白含量和固氮酶活性。结果表明：接种后两大豆品种叶片 chla/b值显著下降,叶绿素含量、净光合速率和气孔导度显著增加;根瘤数、单株瘤重、植株地上部和地下部生物量 均显著增加,单个瘤重和根冠比则无显著变化;根瘤内蔗糖含量和豆血红蛋白含量均显著增加,固氮酶活性提高。 不同大豆品种对不同菌株的响应不同,南夏豆25与根瘤菌B.japonicum5136的适配性最好,接种后大豆光合性能和 固氮能力的改善效果明显优于南黑豆20。     

栽培甜菜和白花甜菜种间杂交后代无融合生殖的观察

栽培甜菜和白花甜菜杂交获得的Ｆ＿１代以栽培甜菜连续回交产生了Ｂ＿１Ｆ＿２代和Ｂ＿２Ｆ＿３代￣［４］．在Ｂ＿２Ｆ＿３代中，２ｎ＝２７的植株达３０．１９％，推测其中大多数染色体组仍为ＶＶＣ。具有ＶＶＣ染色体组的核型中，含９个白花甜菜校长的染色体和１８个较短的栽培甜菜染色体，差别明显，易于区分。我们通过对Ｂ＿１Ｆ＿２（Ｂ１４，２ｎ＝２７）和Ｂ＿２Ｆ－３（２ｎ＝２７）植株间形态特征相似性比较、两个世代植株有丝分裂特异核型比较、两类植株减粉分裂行为比较、过氧化物酶和酯酶同工酶酶谱相似性比较，有力地证明了栽培甜菜和白花甜菜种间杂交后代中，从Ｂ＿１Ｆ＿２（Ｂ１４）到Ｂ＿２Ｆ＿３之间传递上存在着无融合生殖现象。     

不同产区青稞根部可培养内生固氮菌的多样性研究

为认识青稞内生固氮菌群落组成,丰富内生固氮菌资源,明确产地对青稞内生固氮菌多样性的影响,本研究利用纯培养技术分别对在拉萨、林芝、日喀则栽培的藏青2000根部内生固氮菌进行分离、纯化,并测定各菌株的固氮酶活性及高固氮酶活性菌株的溶磷、溶钾及产IAA特性,最后,通过16SrDNA基因测序和构建系统发育树研究了高固氮酶活性菌株的分类学地位。结果显示,通过Ashby培养基分离、纯化得到内生固氮菌37株,其中,具有高固氮酶活性的11株,占总分离菌株27%,有6株菌株具有分泌IAA的能力,2株具有溶钾能力,1株具有溶磷能力。16S rDNA测序结果表明,11株高固氮酶活性的菌中,有5株菌属于Bacillus,为优势菌属,其余菌株分别属于Gemmatimonas、Sphingomonas、Devosia、Agrobacterium、Mesorhizobium和Burkholderia。     

水稻联合固氮工程菌在盐碱稻区应用效果研究

通过对试验结果的分析,阐述了水稻联合固氮工程菌的不同菌株与化肥及有机肥配合施用对土壤盐分、养分及水稻生长发育中各项指标均有不同的影响,其施肥效果:菌株2>菌株3>菌株1。指出施用联合固氮工程菌是改良土壤,提高产量,促进生态农业发展的有效途径。     

Ti质粒介导的B,t,k—δ内毒素蛋白基因转化大豆的初步研究

以Ｔｉ质粒为介导，将ｐＫＴ５４Ｂ７Ｃ５质粒上的Ｂ，ｔ，ｋ－δ内毒素蛋白基因导入东北大豆“黑农３７”、“黑农３９”等品种。采用多种外植体和感染方法，从胚轴和子叶节诱导出丛生芽与再生植株。     

花生施氮肥效果与根瘤菌固N的关系

在中等以上土壤肥力条件下，花生施氮肥均显著增加植株生长量和荚果产量，单株结果数和荚果产量分别比不施肥、不接种根瘤菌（对照）处理增加２６．９％～３６．５％和２９．９％～３４．１％。但其主、侧根上根瘤数目和根瘤菌固氮量，则随氮肥用量增加而减少，根瘤菌固氮量由８８．６％降至３０．８％。不施氮肥只接种根瘤菌的处理，根瘤菌的固氮量虽高，但植株生长量和荚果产量则明显降低，单株结果数和荚果产量仅比对照处理增加６．９％和５．９％。     

澳大利亚新南威尔士中部和南部经济作物大豆的固氮

澳大利亚新南威尔士中部和南部经济作物大豆的固氮１９９０／９１年夏季，在新南威尔士的Ｃｏｌｅａｍｂａｌｌｙ灌溉区和ＭａｃｑｕａｒｉｅＵａｌｌｅｙ，利用酰脲液技术对２６个商业经营点的３６个灌溉大豆地块的共生固氮量进行监测，对生长发育期间的作物氮产量、氮气...     

国内报刊花生文摘(三)

该文探讨了钼、酸度对根瘤侵染结瘤、共生固氮的作用,为生产上施用钼肥和接种根瘤菌提供理论依据。试验结果表明:(1)水培液中钼浓度为0.06～0.12PPm时,根瘤菌固氮酶活性、植株全氮(％)、植株干重达到最大值。(2)合理施用钼肥可延长根瘤固氮时间,增加植株氮、钼、钾和钙元素含量,提高花生产量;(3)钼可缓解酸性条件对结瘤固氮的抑制;(4)固氮酶活性和植株全氮以     

PEG介导BT基因转化大豆原生质体获转基因植株

通过ＰＥＧ法净Ｂ．Ｔ（Ｂａｃｉｌｌａｓ ｔｈａｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ＣｒｙＩＡｃ）毒蛋白基因导入到大豆主栽品种黑农３５,黑农３７,合丰２５和合丰３５的原生质体中,经３０ｍｌ／Ｌ潮霉素筛选,选择有抗性的愈伤组织进行分化,获得了三棵再生植株,移栽后全部成活,对移栽后植株的总ＤＮＡ进行ＰＣＲ分析,均显阳性。对ＰＣＲ阳性植株进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析,证明Ｂ．Ｔ毒蛋白基因已整合到大豆细菌基因组中。     

花生根瘤菌遗传多样性及高效固氮菌株的筛选

为揭示花生根瘤菌遗传多样性并筛选高效固氮菌株,本研究从山东省花生研究所莱西试验站的5个样点采集新鲜花生根瘤进行根瘤菌分离,对菌株的16SrRNA基因、持家基因(recA、atpD、glnII)序列进行系统发育分析以确定根瘤菌的系统发育地位,同时对共生基因nifH序列进行系统发育分析,并通过温室盆栽接种实验筛选高效共生固氮根瘤菌菌株。从5个采样点共分离到106株花生根瘤菌菌株,通过持家基因recA序列分析选定7株代表菌株。对代表菌株的16SrRNA基因与持家基因MLSA系统发育分析表明,所分离到的菌株分布于Bradyrhizobium的B.liaoningense、B.yuanmingense、Bradyrhizobiumsp.种群。同时,固氮基因nifH的系统发育分析结果表明,固氮基因高度保守,在系统进化树上分别与B.arachidis CCBAU 051107T、B.yuanmingense CCBAU10071T聚为两支。温室盆栽实验表明7株花生根瘤菌代表菌株均能与花生有效结瘤,其中代表菌株YIC61059共生固氮能力最强。结果分析表明,山东省莱西市花生根瘤菌遗传多样性较为丰富,其中B.liaoningense为优势种群。该地区的花生根瘤菌具有较好的结瘤和共生固氮能力,其中代表菌株YIC61059促生效果比较突出,具有良好的应用前景。     

结构与功能比较研究

启动子是基因在转录水平上的一种重要调控元件。本研究通过同源序列法从甘蓝型油菜品种中油８２１ 中分离到油菜基因ＮａｐＢ和ＦＡＥ１的上游启动子序列ｐＮａｐＢ和ｐＦＡＥ１,其中ｐＮａｐＢ长１１３６ｂｐ,ｐＦＡＥ１长１４２０ｂｐ。 两种启动子的核苷酸序列都含有种子特异表达启动子的顺式作用元件,包括ＲＹ重复、Ｇ－ｂｏｘ和Ｅ－ｂｏｘ等,但两 种启动子顺式作用元件的序列分布不同。将ｐＮａｐＢ和ｐＦＡＥ１两个启动子分别与报告基因ＧＵＳ融合并通过农杆菌 介导法导入烟草,得到大量转基因烟草植株。对Ｔ１代转基因烟草进行组织化学分析,比较了不同启动子的组织表 达特异性。结果表明,两种启动子都只在种子中起作用,属于典型的种子特异性表达启动子,但是它们作用的时间 和空间分布以及作用强度明显不同。ｐＮａｐＢ启动子比ｐＦＡＥ１作用开始的时间早,持续时间长,在早期作用比 ｐＦＡＥ１强,但ｐＦＡＥ１启动子在种子发育中期启动速度快,成熟种子的ＧＵＳ染色深度在两种启动子间差别不大。     

油菜种子特异表达启动子ｐＮａｐＢ和ｐＦＡＥ１的 结构与功能比较研究

启动子是基因在转录水平上的一种重要调控元件。本研究通过同源序列法从甘蓝型油菜品种中油８２１ 中分离到油菜基因ＮａｐＢ和ＦＡＥ１的上游启动子序列ｐＮａｐＢ和ｐＦＡＥ１,其中ｐＮａｐＢ长１１３６ｂｐ,ｐＦＡＥ１长１４２０ｂｐ。 两种启动子的核苷酸序列都含有种子特异表达启动子的顺式作用元件,包括ＲＹ重复、Ｇ－ｂｏｘ和Ｅ－ｂｏｘ等,但两 种启动子顺式作用元件的序列分布不同。将ｐＮａｐＢ和ｐＦＡＥ１两个启动子分别与报告基因ＧＵＳ融合并通过农杆菌 介导法导入烟草,得到大量转基因烟草植株。对Ｔ１代转基因烟草进行组织化学分析,比较了不同启动子的组织表 达特异性。结果表明,两种启动子都只在种子中起作用,属于典型的种子特异性表达启动子,但是它们作用的时间 和空间分布以及作用强度明显不同。ｐＮａｐＢ启动子比ｐＦＡＥ１作用开始的时间早,持续时间长,在早期作用比 ｐＦＡＥ１强,但ｐＦＡＥ１启动子在种子发育中期启动速度快,成熟种子的ＧＵＳ染色深度在两种启动子间差别不大。     

7株根瘤菌菌株与热研2号柱花草共生最适磷浓度研究

采用水培的方法,设3个磷水平,7个菌株,通过对株高、茎叶鲜重、茎叶干重、固氮酶活性、茎叶氮含量、茎叶磷含量的测定及综合分析,确定使热研2号柱花草接种不同根瘤菌菌株达到最佳促生性能的磷浓度。结果表明:7个菌株在中磷时鲜重和含氮量最大,低磷不利于鲜重和含氮量的增加;经主因子综合分析,菌株YM11-1、RJS9-2、PN13-3在高磷时对热研2号柱花草有最好的固氮促生效果,菌株LZ3-2、BS1-1、PN13-3在中等磷条件下有最好的固氮促生效果,菌株FS3-1-1在高磷和中磷都有最好的固氮促生效果。