牛冷冻精液的保存与使用注意事项

人工授精员在购买牛冷冻精液后,还需要做好运输、保存、解冻、配种等环节的工作。只有对每一环节都能做到正确使用,才能达到预期的配种效果,否则任一环节出现问题都可能造成受胎率降低或配种失败。现将冷冻精液保存和使用应注意的问题介绍如下。     

牛血清白蛋白对猪精液常温保存效果的影响

在猪人工授精技术中,良好的稀释液是提高精子活率的关键因素之一。为了研究牛血清白蛋白（BSA）对猪精液常温保存的影响,在基础液Modena中分别添加1、2、3、4、5和6 g/L 的BSA,检测精子活率、质膜完整率、顶体完整率以及总抗氧化能力（T AOC）和丙二醛（MDA）浓度,分析BSA对猪精液常温保存效果的影响。结果表明,Modena中添加3～5 g/L的BSA能显著延长猪精子有效保存时间、提高精子活率和质膜完整率、降低MDA的浓度（P<0.05）,但对顶体完整率和T AOC影响不大（P>0.05）,其中添加4 g/L的BSA效果最好,有效保存时间为7.5 d,经过7 d保存后精子活率、质膜完整率、顶体完整率分别为54%、49%和78%,T AOC和MDA的浓度分别为1.03 U/mL和17.51 μmol/L。研究结果说明,Modena中添加BSA能够提高常温保存精子的品质,其适宜添加量为4 g/L。     

牛冷冻精液保存与使用方法(下)

三、牛冷冻精液解冻与镜检注意事项 1.细管精液解冻首先将水浴 锅内水温加热到370℃～39℃,然后用镊子取1支冷冻后的细管精液迅速浸泡入37℃～39℃温水中并晃动,待溶解后取出,用卫生纸或纱布擦掉细管上的水珠,再用细管剪剪去超声波封口端,挤2小滴精液于载玻片上,盖上盖玻片进行冻后活力检测.     

卵磷脂取代卵黄冷冻牛精液效果观察

在常用的果糖-柠檬酸钠-卵黄-甘油液中分别加入1.50%、3.00%、4.50%、6.00%的大豆卵磷脂取代卵黄,以比较大豆卵磷脂与卵黄对牛精液的冷冻保存效果。冷冻前各组稀释液隔15 m in分两次加入,之后平衡4 h。结果表明,各试验组的精子畸形率、顶体完整率、每剂量菌落数与对照组相比差异不显著(P>0.05),冻后活力、复苏率、路径速率、直线运动速率和轨迹速率除了6.00%大豆卵磷脂组显著差于对照组(P<0.05)外,其余3组相当于(P>0.05)或显著优于(P<0.05)对照组。在所有试验组中以1.50%大豆卵磷脂组效果最好。     

牛精液低温（0℃）保存的效果研究

为研究一种Tris-卵黄稀释液0℃（冰水混合物中）保存牛精液的效果,该试验选用5头西门塔尔牛,将每头牛采集的精液等量分装,按1∶3的比例分别与试验组稀释液（Tris-卵黄专利稀释液）、对照组稀释液（基础稀释液）等温稀释处理,在0℃（冰水混合物中）状态下保存。检测保存0、 1、 2、 4、 6、 8、 10、 12 d的精子活率、顶体完整率及质膜完整性,并用保存5 d的精液进行人工授精,统计受胎率。结果表明：保存4～10 d, A组稀释液保存的精子活率显著高于B组（P<0.05）;保存10 d时,A组精子活率大于50%; 0℃保存牛精子顶体完整率、质膜完整性随保存时间的延长而逐渐降低,但不同处理间无显著差异（P>0.05）。A组稀释液保存牛精子的受胎率显著高于B组。可见,用Tris-卵黄稀释液0℃保存牛精液,保存效果较好,受胎率较高。     

波尔山羊细胞冷冻精液保护保存效果研究

通过对4种波尔山羊细管冷冻精液保护液保存效果对比试验，筛选出稀释后精子活力，解冻后精子活力及解冻后室温保存12h精子活力较好的保护液，并且用于细管冷冻精液的批量生产和推广。     

猪精液稀释液常温保存研究

选取3头健康、体况良好、24～36月龄的大约克夏公猪,随机分为3组,研究了3种不同的稀释液在常温下对猪精液保存效果的影响。试验结果表明:Ⅰ稀释液保存效果好,稳定性强,不需消毒,取用方便,避免了基层条件不足、操作不方便的缺点,适宜推广。     

牛冷冻精液保存与使用方法(上)

目前,牛冷冻精液主要应用于地方品种改良工作中,其主要优势为:①能最大限度地发挥优良种公牛种用价值,提高种公牛的利用率.例如:1头良种公牛采用本交方法1年只能配种几十头母牛,如果采用牛冷冻精液长期保存,每年可配母牛1万头以上.     

牛的体外受精未受精卵长时间保存方法的研究

牛的体外受清所使用的卵巢一般需要从屠宰场运送到实验室，本试验探讨未受精卵长时间运送时的保存方法．试验１：经６小时运送保存时，体外受精后胚的发生率；试验２：在不同温度条件下培养，温度对未成熟卵成熟培养的影响；试验３：在试验２的基础上，采用细胞培养输送器，进行未成熟卵的边培养、边运送．对体外受精后胚的发生率的影响，结果表明：卵巢在２小时及６小时保存时，胚盘胞的发生率分别为１６．１％，１８．９，差异不显著．温度对未成熟卵的成熟率影响３５，３７，３８．５，４０℃分别为２１．７％，７４．１％．９４．１％和８６．７％，３５～３７℃没有获得高成熟率，使用细胞培养输送器胚盘胞的发生率为１７．８％，比对照组的１８．６％差异不显著．由此表明，在卵巢运送条件下，至少可保存６小时而不影响体外受精后胚的发生率，在更长时间运送时，可将卵子采取，边成熟熟培养过运送，最长运送时间可达２４小时．     

猪精液冷冻与常温保存技术的研究

为研究冷冻保存和常温((17±0.5)℃)保存后猪精子活率、活力和顶体完整率,比较了猪精液冷冻稀释液中2种甘油含量细管法的快速冷冻效果,以及不同解冻温度对冷冻精液的影响,采用细胞计数法、FDA-PI双重染色法与Giemsa染色方法检测精子的活率、活力和顶体完整率。结果显示:3%(体积分数,下同)甘油冷冻解冻后精液的活率、活力(38.54%、52.24%)显著(P<0.05)高于2%甘油组(15.63%、28.22%),但3%甘油组顶体完整率(11.55%)显著(P<0.05)低于2%甘油组(21.71%)。38℃水浴解冻后的精子在39℃培养箱中4 h内活率高于0.3,而50℃水浴解冻后1 h后的活率低于0.3。精液稀释液Anderohep和BTS在常温((17±0.5)℃)保存新鲜猪精子的活率与顶体完整率上效果相似,保存3 d内精子活率达0.6以上,保存6 d内精子活率为0.3以上。结果表明,使用3%甘油冷冻保存及2种常温保存稀释液均可以较好地保存精子。     

鸭精液液态保存的研究

试验用单人背腹式按摩采精法收集纯净的鸭精液。对不同稀释液(1％NaCl液、Lake液、pH 7.1Lake缓冲液BPSE和BNP—2)(精液:稀释液,v/v)稀释的鸭精液在不同温度(2—5℃、8—10℃和25℃)下的保存效果和以pH 7.1Lake缓冲液按不同稀释比例(1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9和1:10)稀释的鸭精液在2—5℃温度下的保存效果进行了研究。结果表明:鸭精液液态保存的最适温度为2—5℃;以PH 7.1Lake缓冲液的稀释保存效果最佳;按1:2、1:3、1:4和1:5稀释比例稀释鸭精液均可取得良好的保存效果。     

鹅精液短期保存研究

鹅的新鲜精液进行精子活力检测后,分别用0.9%NaCl和脱脂牛奶2倍量稀释,在2～5℃、15～25℃、38～39℃,48.5℃温度下保存.结果表明:保存温度在48.5℃的精液,0.5小时精子全部死亡;在38～39℃条件下,用0.9%NaCl稀释与牛奶稀释鹅精液,精子活力变化基本无差异(P>0.05);0.9%NaCl稀释的鹅精液,在2～5℃、15～25℃、38～39℃温度条件下,保存效果无显著差异(P>0.05);牛奶稀释的鹅精液,低温保存效果较好,与其他各组比较差异极显著(P<0.01).     

培养基的保存温度对牛卵母细胞体外受精的影响

研究了培养基保存温度对牛卵母细胞体外受精的影响。结果表明,基础培养基中激素不同添加时间对牛卵母细胞体外成熟率、牛体外受精胚胎卵裂率及囊胚率差异不显著(P0.05);提前添加激素在4℃不能长期保存,而在-20℃能长期冷冻保存,并不会对牛卵母细胞体外受精胚胎的发育产生太大的影响。     

茶多酚对猪精液常温保存效果的影响

【目的】研究茶多酚(TPP)对猪精液常温保存效果的影响。【方法】手握法采集20月龄健康杜洛克种公猪精液,在基础稀释液中添加不同质量浓度的TPP(0(CK),0.01,0.02,0.04,0.08,0.16g/L)作为稀释液进行常温(17℃)保存,每隔24h检查精子活率、质膜完整率和顶体完整率,分别在精液保存0,2,4,6d时检测精液中的细菌含量,并在3d和6d时检测精液中的丙二醛含量(MDA)和总抗氧化(T-AOC)活性。【结果】添加0.02,0.04,0.08g/L TPP可明显提高猪精子活率、质膜完整率、顶体完整率和T-AOC活性,降低精液的MDA含量和细菌含量。且以0.04g/L TPP效果最佳,精液有效保存时间为6d。6d时0.04g/L TPP组猪精子活率、质膜完整率、顶体完整率、丙二醛(MDA)含量、总抗氧化(T-AOC)活性和细菌含量分别为60.02%,46.40%,75.25%,2.39nmol/L,2.31U/mL和2.19×106 CFU/mL。【结论】茶多酚能有效提高猪精液常温保存效果,最适添加量为0.04g/L。     

精液处理方法对牛体外受精胚胎质量的影响

细管精液解冻后,直接用于牛卵母细胞的体外受精,卵裂率仅４６．７％,囊胚率仅２６．３％;使用悬浮４０分钟后离心的精液或使用Ｐｅｒｃｏｌ梯度离心后的精液,体外受精后均获得较高的卵裂率（８５．８％、８１．８％）和囊胚率（５０．７％、４７．２％）,作为对照组的标准程序其卵裂率及囊胚率为８６．７％、５２．７％,三者之间比较无差异,悬浮方法第７天可获得最多囊胚特别是一级囊胚。     

夏季山羊精液不同保存方法研究

假阴道法采集重庆市大足黑山羊精液,分析鲜精精液品质,采取随机单位组两因素三水平无重复观察值方差分析试验设计,应用常温保存(20℃)、低温冷藏(4℃)和精波冷冻3种方式进行精液保存效果及对精液品质影响的研究.两因素分别为稀释液和精子密度,每个因素选择3个水平,以生存指数作为评价精液保存效果的指标.新鲜精液采集后检测发现品质良好,活力均值为0.87,畸形率为9.45%,符合GB20557-2006做山羊冻精标准.与去年同期比较,发现高温可造成精液品质下降.稀释液对3种保存效果影响差异均不显著(p>0.05),精子密度对常温保存和低温冷藏影响差异极显著(p<0.01),对冷冻影响差异不显著(p>0.05).不同处理均造成精液品质下降,其中冷冻造成影响极显著.常温和冷藏下以稀释液At、精子密度1×109个/mL保存较好,冷冻保存以稀释液A2、精子密度2×108个/mL较好.     

不同品种公猪精液保存品质的差异性分析

人工授精技术在养猪生产中已经普及,但在精液稀释过程中往往不分品种地使用相同稀释剂。本研究选取某猪场杜洛克公猪51头、长白公猪32头、大白公猪42头,历时1年,分别采集精液数量1 664份、1 196份和1 248份,在使用同一长效稀释剂的情况下,研究其精液在常温保存中0～10 d的品质变化规律。结果表明,随着保存天数的增加,精液品质逐步下降,但3 d内精液品质未见显著性变化;不同品种公猪精液在保存过程中品质变化呈现出品种特异性,大白公猪精液保存效果最差,杜洛克、长白公猪精液的有效保存时间分别可以达8、9 d。