影响桑蚕卵酯酶A4活性的若干因素

影响桑蚕卵酯酶Ａ＿４活性的若干因素浙江农业大学蚕学系缪云根蚕卵滞育的诱导、开始，持续和终止是在滞育激素控制下的一系列代谢途径。前报［１］研究表明蚕卵的酯酶Ａ４在滞育发育过程中呈现出有规律性的变化，即酶活性峰的出现与从孵化曲线而得的滞育发育过程恰好一致...     

体外盐酸处理与PIN对酯酶A4活性影响的关系

从家蚕Ｃ１０８ 品种产下后２ｄ 的滞育性卵纯化酯酶Ａ４ 及其活性抑制多肽ＰＩＮ,体外调查了盐酸处理与ＰＩＮ 对酯酶Ａ４ 的ＡＴＰａｓｅ 活性影响的关系。结果表明：盐酸处理不仅迅速消除了ＰＩＮ 对酯酶Ａ４ 的ＡＴＰａｓｅ 活性抑制作用;盐酸处理使蚕卵酯酶Ａ４ 的ＡＴＰａｓｅ 活性峰提早出现的时间还反映了蚕卵的滞育发育时间。     

盐酸处理蚕卵酯酶A4的活性变化及其与滞育性的关系

从家蚕C108品种蚕卵精制酯酶A4,首次测定了产卵后24～96h浸酸蚕卵酯酶A4的ATPase活性。蚕卵经盐酸处理后在体外5℃1～2d或体外25℃1～3h出现酶活性峰。与低温活化蚕卵比较,产卵后24～96h的浸酸蚕卵,在体外5℃酶活性峰出现时间提早了8．5～22d,在体外25℃提早了3～9h。浸酸后蚕卵迅速解除滞育,滞育发育时间显著缩短。将不同卵龄未浸酸蚕卵与盐酸处理蚕卵酯酶A4的ATPase活性峰出现时间差制成曲线,在体外5℃或25℃的结果几乎都完全与5℃冷藏时蚕卵的滞育发育时间曲线重叠。盐酸处理蚕卵酯酶A4的活性变化与蚕卵活化有高度相关性。     

家蚕卵酯酶A与滞育性关系研究进展

本文综述了家蚕卵酯酶A及其组分酯酶A4与滞育性关系的研究进展情况,表明二者与蚕卵的滞育性变化密切相关。     

家蚕卵酯酶A4活性抑制多肽PIN与滞育激素的关系初探

利用Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５ ＨＲ１０／３０柱，从家蚕滞育性卵分离出滞育生物钟蛋白质酯酶Ａ４的活性抑制多肽（Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｉｎ－ｈｉｂｉｔｏｒｙ　Ｎｅｅｄｌｅ，简记ＰＩＮ），将其注射家蚕大造品种非滞育性蛹，结果出现了产滞育性卵的母蛾。利用合成的ＤＨ成份，发现对ＥＡ４的ＡＴＰ酶（ＡＴＰａｓｅ）活性有强烈的抑制性。从分子量分析，ＰＩＮ多肽和ＤＨ多肽十分接近。     

家蚕卵温汤处理酯酶A4的活性变化

温汤孵化法是一种重要的家蚕卵人工孵化方法。酯酶A4 (EsteraseA4 ,EA4 )是家蚕卵的滞育生物钟蛋白质。将家蚕C10 8品种卵温汤处理 ,纯化出EA4 ,测定了EA4的ATP酶 (ATPase)活性变化。结果显示 :产卵后 15h(2 5℃ )的温汤处理蚕卵 ,其EA4的ATP酶最大活性 ,体外 5℃或 2 5℃条件下 ,分别出现在处理后 2 4h或 1.5h ,蚕卵也随即解除滞育 ,获得孵化能力 ;产卵后 30h(2 5℃ )的温汤处理蚕卵 ,其点青卵率随温汤刺激量增大而提高 ,点青时间随刺激量增大而缩短 ;蚕卵EA4的ATPase最大活性出现时间也随温汤刺激量增大而提前 ;且温汤处理蚕卵EA4的活性变化与蚕卵活化有高度相关性。     

关于家蚕酯酶A4与滞育关系研究的评述

本文介绍了家蚕酯酶A4与滞育关系研究的成果,分析了其中存在的一些问题,提出了今后要解决的关键。     

体外25℃家蚕卵酯酶A4的ATP酶活性变化及其与滞育性的关系

从家蚕卵纯化出EA4酶蛋白 ,调查了温度对EA4的ATP酶最高活性和其出现时间的影响以及与蚕卵滞育性的关系。EA4的酶活性反应温度为 2 5℃时比 5℃时提高约 1 0倍。从滞育性卵和盐酸处理卵纯化EA4 ,或者用EA4的活性抑制多肽 (PIN)体外处理酶蛋白质 ,2 5℃中EA4的最高活性出现时间比 5℃中显著提早。随纯化时卵龄或PIN处理时间的改变 ,2 5、5℃中EA4的最高活性出现时间以及与蚕卵 5℃冷藏时滞育发育时间有相同趋势的变化。体外 2 5℃和体外 5℃一样 ,EA4的最高活性出现时间与蚕卵的滞育发育有密切的关系     

盐酸刺激活化家蚕滞育性卵的机理研究进展

盐酸刺激活化家蚕滞育性卵的机理研究是家蚕卵滞育与活化机理研究的一个重要方面。本文综述了浸酸后蚕卵的理化性质变化,如卵壳的通透性,卵内某些酶和激素的活性变化及其对蚕卵滞育性的影响,以及蚕卵对盐酸刺激的接受方式等方面的最新研究结果,还阐述了酸刺激量与蚕卵孵化率的关系。     

家蚕多肽抑制因子对酯酶A4的ATP酶活性影响

从产下后２ｄ的家蚕Ｃ１０８品种滞育性卵精制酯酶Ａ４和其多肽抑制因子ＰＩＮ,体外调查了ＰＩＮ对酯酶Ａ４的ＡＴＰ酶活性影响。酯酶Ａ４和ＰＩＮ５℃混合２５～１３ｄ,除去ＰＩＮ后５℃保护,ＡＴＰ酶活性峰都在１２～１４ｄ后出现;２５℃混合时,除去ＰＩＮ后,ＡＴＰ酶活性峰出现时间为混合时间再加１２～１４ｄ。利用ＭＡＬＤＩＭＳ方法,首次检测到纯化的酯酶Ａ４和合成ＰＩＮ的结合体。     

减少家蚕遗腹卵发生的方法探讨

以9·芙×7·湘及其原种为材料,通过幼虫期不同给桑量饲养、蛹期不同温度保护、不同交配时间及交配前后药物处理,调查家蚕的遗腹卵发生情况。结果表明:幼虫期良桑饱食,蛹期以24～25℃保护可减少遗腹卵的发生;延长交配时间和使用催产素等药物对减少遗腹卵的发生有一定作用。     

不冷藏或短期冷藏家蚕滞育卵的随时孵化技术研究

研究了家蚕卵产后经过 1～ 7d、10～ 2 0d解除滞育的孵化条件。蚕卵产下后在 2 5℃保护 1～ 7d的未完全滞育卵 ,用 1 0 75kg/L盐酸 ,4 6℃液温分别浸渍 5、10、2 0、2 5、4 0、4 5、5 0、70min ,实用孵化率可以达到 90 %左右。当蚕卵产下后在 2 5℃保护经过 10～ 2 0d时 ,用高温冲击加浸酸的方法可以解除其滞育 ,实用孵化率可达 90 %左右。     

蜕皮激素对家蚕几个器官蛋白质合成活性的影响

用3H-甘氨酸参入法研究了家蚕五龄幼虫丝腺、脂肪体和中肠等器官白质合成活性的动态变化及蜕皮激素(简称MH)的影响。研究结果表明,五龄前期一次添食和每天连续添食MH能显著提高后部丝腺丝心蛋白和脂肪体蛋白质的合成活性,而抑制中肠蛋白质和五龄中后期中部丝腺丝胶蛋白的合成活性。此结果,为阐明MH对蚕体蛋白质合成的调控作用提供了直接的证据。     

家蚕中肠酸性磷酸酶细胞化学的研究

应用超微结构酶细胞化学技术研究了家蚕幼虫中肠ＡＣＰａｓｅ 活性的亚细胞分布,结果表明ＡＣＰａｓｅ 主要分布在圆筒形细胞的细胞核内,核周围的内质网及溶酶体中,杯形细胞的细胞核、细胞底部的内褶膜上也有少量的酶活性存在。不同数量性状的蚕品种间圆筒形细胞细胞核内的ＡＣＰａｓｅ 活性分布有显著差异。     

家蚕滞育卵浸酸后易溶性蛋白的表达差异分析

探明浸酸解除家蚕卵滞育的关联蛋白,可为改进和提高蚕种的人工孵化技术提供理论依据。以经2.5℃冷藏45 d的家蚕品种"7.湘×9.芙"滞育卵为材料,采用双向凝胶电泳和图像分析技术,比较浸酸与未浸酸蚕卵易溶性蛋白的差异变化。在未浸酸蚕卵的双向电泳图谱中共检测到523个蛋白质斑点,其中特异性蛋白质斑点41个;浸酸卵共检测到526个蛋白质斑点,其中特异性蛋白质斑点44个。浸酸与未浸酸蚕卵能相互匹配的蛋白质斑点有482对,匹配率91.897%。经对比分析,浸酸活化后的蚕卵蛋白出现了一些特异性的蛋白质斑点,或某些蛋白质斑点在含量上出现了差异变化。     

家蚕滞育卵中酯酶A_4的生理作用研究

家蚕卵中酯酶A_4与滞育发育具有密切的关系。研究表明:此酶具有较低的水解专一性,是一种广泛作用于生物体内各种酯键的酶。酯酶A_4能水解结合型胆甾醇的酯键,并且其活性表现与滞育发育的时间进程相一致。酯酶A_4对cAMP的水解作用表现为两个峰,而对cGMP的水解作用,在精制后第10—13日间活性高于其它时间,但变化较缓慢。