高粱幼穗再生体系建立的研究

高粱是重要的杂粮作物之一,其组织培养研究对高粱再生体系建立以及高粱转基因育种具有重要意义。以6个基因型的高粱幼穗为外植体,研究光照、激素、基本培养基以及基因型对幼穗愈伤组织诱导和分化的影响。结果表明:对于高粱幼穗愈伤组织的诱导培养,光照有利于幼穗愈伤组织的诱导;2,4-D和KT混合使用的效果比2,4-D单独使用好;3种基本培养基对幼穗愈伤诱导影响差异不显著;不同基因型对幼穗愈伤诱导影响差异显著,且5种不同基因型材料的愈伤诱导能力大小为M81-E07-27BJ-285=考利罗马。对于高粱幼穗愈伤组织的分化培养,3种培养基中只有MS培养基和NB培养基分化出再生苗;6种基因型中只有忻粱52分化出绿苗,分化率为11.49%。     

结缕草高效再生体系的建立

为了获得结缕草的转基因再生植株,从而利用转基因技术改造结缕草,建立草坪草的遗传转化体系,研究了不同培养基、激素浓度及光照条件对结缕草愈伤组织诱导、分化和植株再生的影响,建立了结缕草再生体系。结果表明,在愈伤组织诱导阶段,不同培养基(MS培养基和NB培养基)在同一激素质量浓度下,愈伤组织诱导率差别不大;而同一培养基不同激素浓度间愈伤组织诱导率存在一定差别,以添加2 mg/L的2,4-D处理诱导率较高;光培养和暗培养条件下愈伤组织诱导率差别不大。在愈伤组织的分化阶段,MS培养基远远优于NB培养基,MS培养基上愈伤组织有60%～70%能产生胚性愈伤并得到再生植株,而NB培养基上愈伤组织全部变成绿色的硬块状,并伴随许多毛状根生成,最终不能得到再生植株;暗培养条件下愈伤组织的分化率(55%)和植株再生率(47%)大大高于光培养(10%,7%)。     

2,4-D对扁穗牛鞭草幼穗离体培养的影响

以雅安扁穗牛鞭草的幼穗为外植体,研究了2,4-D浓度和不同取材部位对愈伤组织诱导的影响以及继代培养时不同浓度的2,4-D对愈伤组织增殖、分化、生根的影响.结果表明:以幼穗下部为外植体接种在MS+2,4-D 7.0 mg/L培养基中,颗粒状愈伤组织的诱导率高达100.00％;MS+2,4-D 1.0 mg/L是幼穗愈伤组织较为适宜的继代增殖培养基,在该培养基上颗粒状胚性愈伤组织的出愈率为89.44％,愈伤组织的绿苗分化率和生根率都可达100％,平均绿芽点数和生根数等均极显著高于其他处理.     

高粱幼穗离体培养再生体系的建立

6个基因型的高粱幼穗接种于YD10、L2、YLMDS和MS1诱导培养基,结果在MS1培养基上6个基因型的幼穗都诱导出愈伤组织,05DL15A诱导率最高为96.0%,四杂40诱导率最低为27.5%。获得的淡黄色颗粒状愈伤组织分化出不定芽,不定芽高8cm左右转入生根培养基再生植株。     

啤酒大麦幼胚愈伤组织诱导和植株高效再生

[目的]筛选出组织培养特性优良的大麦遗传转化受体。[方法]以7个大麦优良品种为实验材料,幼胚为外植体,研究基因型、培养基、激素等对大麦幼胚愈伤组织的诱导及植株再生的影响。[结果]在愈伤组织诱导过程中,甘啤4号等4个品种在三种诱导培养基上出愈率均较高,达100%;2,4-D与dicamba联用的MS2培养基上形成的愈伤组织质量优于MS1和MS3;品种间愈伤组织分化率差异显著,秀81-47分化率为88.9%,略低于模式品种Golden Prom ise;不同分化培养基的分化效率不同,在RN1培养基上的平均分化率较高。[结论]该试验筛选出愈伤组织诱导频率和绿苗分化率均较高,适合于遗传转化的受体材料,如秀81-47,甘啤4号。     

水稻体细胞培养与无性系变异——Ⅰ,不同基因型不同外植体的培养

对水稻5个品种的种胚和11个品种的幼穗在含不同激素浓度的MS培养基上培养,诱导愈伤组织并再生绿苗。品种间在愈伤组织诱导率、绿苗分化率和对激素的诱导效应表现了基因型差异。幼穗愈伤组织诱导率和绿苗分化率高于种胚。种胚的盾片愈伤组织分化能力高于胚轴,胚芽鞘的未分化得绿苗。去分化培养基添加2,4—D2mg/1+KT0.5mg/1,诱导愈伤组织的效果甚佳,并促进绿苗分化。选择胚性愈伤组织继代培养,种胚的培养270天,幼穗的培养210天,仍有部分品种保持较高的绿苗分化率。     

新麦草幼穗愈伤组织诱导影响因素研究

[目的]探讨愈伤组织诱导取材时间、培养基筛选、激素调节及幼穗成熟度对新麦草幼穗愈伤组织诱导的影响。[方法]以新麦草2个品种幼穗为外植体接种于附加不同激素的MS和N6培养基上进行愈伤组织诱导培养。[结果]2种培养基诱导的愈伤组织质地无明显差异。山丹新麦草幼穗最佳诱导培养基为N6添加2,4-D2mg/L,P8401为MS添加2,4-D6mg/L。ABA添加于MS培养基可显著促进愈伤组织生长。山丹新麦草幼穗愈伤组织培养添加ABA适宜浓度为1.5mg/L,P8401为0.3mg/L。CH仅具有加速愈伤生长的效果,但对新麦草愈伤组织诱导促进作用不大。P8401新麦草1～2cm新生幼穗材料作为愈伤诱导外植体最为理想,山丹新麦草5～6cm较成熟幼穗在MS上愈伤诱导率高于幼嫩小穗。[结论]2种培养基均可用于新麦草幼穗愈伤组织诱导。外植体的取材时间在组织培养中是关键因素。     

老芒麦×紫芒披碱草杂种F1幼穗再生体系的建立

以老芒麦×紫芒披碱草种间杂种F1代的幼穗（2～4cm）为外植体材料,以MS为基本培养基,研究了4种不同外源激素组合对幼穗愈伤组织诱导和植株再生能力的影响,筛选出最适杂种F1愈伤组织诱导的培养基为：MS＋2,4-D2.0mg/L,诱导率达63.3％;适宜幼苗分化的最佳培养基为：MS＋6-BA2.0mg/L＋NAA0.4mg/L,分化率为75％;适宜生根的最佳培养基为MS＋IBA0.5mg/L,生根率达90％;组培苗经过炼苗移栽得到了完整植株.该再生体系的建立为下一步进行秋水仙碱诱导染色体加倍提供基础,最终克服其不育性,创造饲草新种质.     

小麦幼穗的离体培养及其影响因素研究

为了确立适于小麦幼穗遗传转化的组织培养体系,对8个小麦品种的幼穗通过组织培养方法,研究了不同基因型、培养基对愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明,不同小麦品种幼穗愈伤组织诱导出愈率差异不大,而分化率却差异明显,其中绵阳19分化率最高,平均可达72.9%,洛阳8716次之,平均为61.2%;分化培养基对分化率也有很大影响,在选用的2种分化培养基中,郑麦9023幼穗愈伤组织的分化率差异最大,而洛阳8716的差异最小;小偃22、西农88、郑麦9023和陕150的幼穗愈伤组织,在分化培养基B中分化率较高,而陕354、绵阳19和小偃107则在分化培养基A中较高;幼穗愈伤组织分化最佳温度为20-22℃,光照强度3 000 lx。因此,在所选用的8个小麦栽培品种中,绵阳19和洛阳8716的幼穗愈伤组织可作为遗传转化的受体材料。     

不同小麦基因型及其不同外植体离体培养研究初探

以13个不同基因型、3种不同外植体为材料，选用5种不同培养基，研究了各因素对愈伤组织诱导、分化的影响，并在此基础上建立了一套可靠的小麦组培再生系统。结果表明，愈伤组织的诱导、根的分化和绿苗的再生虽然都具有显著的基因型效应，但不具备显著的相关关系；对于绿苗的再生分化，幼胚优于成熟胚，幼穗和幼胚之间不存在显著的差异；X和A培养基各自在愈僵组织的诱导和再生分化上都明显优于MSS AA／2和R培养基。成熟胚愈伤组织诱导率生根率和绿苗率平均分别可达88.9%、56.3%和8.7%；幼胚愈伤组织诱导率、生根率和绿苗率平均分别可达99.1%、53.2%和17.6%；幼穗愈伤组织诱导率、生根率和绿苗率平均达94.6%、84.8%和18.3%。     

微弹轰击小麦幼胚愈伤组织的影响因素研究

【目的】优化小麦基因枪转化技术体系,为提高小麦基因枪转化效率提供参考。【方法】以小偃22为材料,采用基因枪法分析小麦幼胚愈伤组织诱导时间、微弹轰击金粉用量及筛选分化培养基类型对基因枪遗传转化频率的影响,并对转化植株进行了检测。【结果】在相同条件下,小麦幼胚经过9d的愈伤组织诱导时再生植株率最高,达到4.24%;同一条件下,金粉用量为60μg/枪的再生植株率最高,达到3.90%;使用1/2MS培养基添加NAA1.0mg/L和KT 1.0mg/L进行转化细胞筛选与分化的效果最好,再生植株率为3.72%;对转化抗性再生植株的特异PCR检测表明,目的基因已整合到小麦染色体组中。【结论】小麦幼胚通过9d的愈伤组织诱导,基因枪轰击金粉用量为60μg/枪,使用筛选分化培养基1/2MS+KT 1.0mg/L+NAA 1.0mg/L+双丙氨膦2.0mg/L+蔗糖30g/L+Ag 5.0g/L进行转化细胞的筛选与分化,可获得较高的抗性再生植株率。     

五节芒离体再生与多倍体诱导技术体系的建立

以五节芒(Miscanthus floridulus)幼穗为外植体,建立了五节芒的离体再生体系:幼穗的最佳愈伤诱导培养基为MS+4.0 mg/L 2,4–D+0.1 mg/L 6–BA,最佳分化培养基为MS+2.0 mg/L 6–BA,最佳生根培养基为MS+1.0mg/L IAA+0.1 mg/L IBA+1.0 mg/L CCC。比较不同浓度秋水仙碱溶液对五节芒愈伤组织诱变的效果,结果显示,以1 000 mg/L秋水仙碱处理愈伤组织72 h,诱导率可达12.48%,形态特征、DNA含量和染色体核型分析表明,诱导获得的再生植株为五节芒四倍体。     

苏丹草幼穗离体培养植株的再生技术

以苏丹草幼穗为外植体材料,研究幼穗发育期以及配比的激素组合对愈伤组织诱导发生、生长状态及其绿苗分化能力的影响。结果表明:长度为1.5~5.0 cm的幼穗,在愈伤组织诱导培养基中添加3.0 mg/L 2,4-D和0.2 mg/L KT,诱导频率达80%~90%,继代培养基中仍添加3.0 mg/L 2,4-D 0.2 mg/L KT,愈伤组织增殖速度快,且保持植株再生的能力;在愈伤组织分化培养基中添加2.00 mg/L 6-BA 0.01 mg/L NAA或添加2.00 mg/LCPPU 0.01 mg/L NAA,经继代培养3~5代的愈伤组织绿苗分化率保持在50%以上;在继代培养中选择外表呈白色、干燥、紧密、颗粒状的愈伤组织,是提高其再生植株能力的有效方法。     

加拿大披碱草×肥披碱草杂种F1幼穗组培再生体系的研究

[目的]筛选适宜加拿大披碱草×肥披碱草种间杂种F1愈伤组织诱导、幼苗分化和生根的最适培养基。[方法]以加拿大披碱草×肥披碱草种间杂种F1幼穗为外植体,以MS为基本培养基,添加不同的激素和营养物,探讨了2,4-D、6-BA、NAA与IBA4种激素不同浓度对杂种F1愈伤组织的诱导、分化及生根的影响,建立了组培再生体系。[结果]激素2,4-D对杂种F1愈伤组织诱导起决定性作用。适宜杂种F1愈伤组织诱导的最佳培养基为:MS+CH300.0 mg/L+2,4-D2.0 mg/L,诱导率达100%;适宜幼苗分化的最佳培养基为:MS+CH300.0 mg/L+6-BA2.0 mg/L+NAA0.4 mg/L,分化率达73.3%;适宜生根的最佳培养基为:MS+CH300.0 mg/L+IBA0.5 mg/L,生根率达86.7%;组培苗经过炼苗移栽得到了完整植株。[结论]杂种F1组培再生体系的建立为新种质的保存奠定了基础。2,4-D适宜浓度为2.0 mg/L。     

结缕草成熟胚愈伤组织的诱导及再生体系的研究

以结缕草的成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导进行植株再生。结果表明在MS+2,4-D(2.0mg/L)+VB1(4mg/L)的培养基中,成熟胚可较高频率的诱导产生愈伤组织,诱导率为43.20%,但愈伤组织质量较差。将其在降低2,4-D浓度和添加6-BA,ABA的继代培养基中继代培养,可明显改善愈伤组织质量,增加胚性愈伤。筛选继代的胚性愈伤组织置于分化培养基MS+6-BA(1.0mg/L)+KT(2.0mg/L)+NAA(0.1mg/L)中,分化率45.6%。本研究建立了一套有效的以成熟胚为外植体结缕草组织培养再生体系。     

非洲菊愈伤组织诱导和不定芽分化研究

以非洲菊深圳5号为材料,研究了几种因素对非洲菊花托愈伤组织诱导和不定芽分化的影响,结果表明,花托在1/2MS 6-BA 10 mg/L NAA 0.2 mg/L IAA 0.3 mg/L培养基中诱导愈伤组织的速度最快,诱导率达100%;花托在在1/2MS基本培养基中诱导出的愈伤组织较少褐变,且易分化不定芽;将愈伤组织转接到1/2MS 6-BA 3 mg/L NAA 0.2mg/L IAA 0.1 mg/L培养基中进行继代增殖培养可有效降低褐化率,不定芽分化率达67.5%、不定芽平均数为2.3株,指出高效的愈伤组织和不定芽再生频率为非洲菊基因转化体系的建立奠定了基础。     

糜子幼胚愈伤组织的诱导及植株再生

为研究影响糜子幼胚愈伤组织诱导分化的因素,优化培养条件,提高糜子幼胚培养效率。以‘陕糜1号’和‘陕糜2号’为材料,研究低温预处理时间、激素种类及质量浓度对糜子幼胚愈伤组织诱导、分化和再生的影响。结果表明,4 ℃低温预处理3 d能显著提高糜子的幼胚愈伤组织诱导率;2种糜子最适宜的诱导培养基均为MS+3.0 mg/L 2,4-D。添加一定质量浓度的KT,可以改善愈伤组织质量,但是2种糜子的愈伤组织诱导率有显著的基因型差异。可见,2种糜子最适宜的分化培养基均为MS+1.0 mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA,且绿点率均在80%以上。     

红刺玫愈伤组织诱导的遗传转化体系建立(英文)

以红刺玫无菌苗为初始材料,通过探讨外植体、培养条件,以及激素配比浓度和暗培养时间对愈伤组织分化芽的影响,建立了红刺玫叶片愈伤组织诱导的再生体系:MS为初始培养基,暗培养21 d,愈伤组织诱导率达到100%。分化培养基为MS+TDZ 1.5 mg/L+NAA0.05 mg/L,暗培养8 d,芽分化率达48%;通过遗传转化条件优化,建立了以红刺玫愈伤组织为转化受体,通过根癌农杆菌介导,以红刺玫的DFR-RNAi为表达载体,GUS为标记基因的遗传转化体系,转化效率达到50%。     

翠绿1号假俭草种子愈伤诱导和植株再生

本研究以优良品系翠绿1号假俭草的种子为外植体,成功地建立了再生体系.基本培养基为MS,在添加了2,4-D 1.5 mg/L的培养基上最适于种子愈伤诱导,愈伤诱导率为99%,黄色颗粒愈伤诱导率为4.8%,愈伤最佳继代培养基为MS+2,4-D 1.5 mg/L;在最佳分化培养基MS+ KT 2.5 mg/L上,黄色愈伤分化率为99%,芽最佳生长培养基为MS+ BA2.0 mg/L+NAA0.7 mg/L;试管苗最佳生根培养基为MS+NAA0.6 mg/L,生根率达到99%;生根的试管苗移栽到装有田园土的土盆中,其存活率达到88%.     

黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)的组织培养快速繁殖

【目的】建立黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)的组织培养快速繁殖体系。【方法】以黄芩的幼茎、幼叶及叶柄为外植体,在MS培养基上添加不同质量浓度的6-BA、2,4-D与NAA诱导愈伤组织及再生芽;在1/2 MS培养基上添加IAA、IBA或NAA激素,单独或者组合使用,诱导黄芩试管苗生根。【结果】幼叶和叶柄容易褐化死亡,而幼茎显示很好的脱分化和再分化效果;BA与NAA组合可以诱导幼茎外植体脱分化与再分化,而BA与2,4-D组合只能诱导愈伤组织发生。IAA诱导生根率最高,但是茎基部会形成愈伤组织,后期无法驯化成活;IBA及NAA均可以诱导根的发生,但是以IBA效果为佳。【结论】幼茎为最佳外植体,MS+BA0.5mg/L+NAA 0.5mg/L为最佳的愈伤组织诱导及再生芽的分化培养基。1/2MS+IBA 0.1mg/L为最佳的试管苗生根培养基,生根率为70.3%。