口蹄疫疫苗的发展展望

口蹄疫(FootandMouthDisease,FMD)是家畜和野生偶蹄动物的烈性传染病,可引起大范围的易感动物感染发病,造成巨大的经济损失。疫苗接种是特异性预防FMD的可靠和有效手段,安全有效的疫苗是成功的预防、控制以致最终消灭FMD的先决条件。FMD弱毒苗和灭活疫苗等常规疫苗都具有良好的免疫原性,在预防和控制FMD的过程中发挥着重要作用,但由于病毒毒力返强、病毒灭活不彻底、活病毒逃逸疫苗加工厂等不安全因素,世界上一些地区FMD的暴发似乎与灭活疫苗中残存的活病毒有关,促使人们寻求一种更加安全有效的FMD疫苗。近年来,随着分子生物学技…     

生长抑素基因工程活载体疫苗免疫猪羊增重试验

在畜禽生产中，抗生素、人工合成激素等用于促进畜禽生长与肥育，取得一定的效果，但引起了肉品药物残留的问题，也严重影响了人们的身体健康。世界上许多国家(包括我国)都严格限制或禁止其使用。为了从根本上解决畜禽因促生长引起的药物残留l问题，生产符合肉品安全标准的畜产品，国内外积极开发生物基因工程苗制品，以取代某些促生长剂和饲料添加剂，并已取得了丰硕的成果。     

鱼用疫苗研究进展

鱼用疫苗的种类繁多，除传统的死疫苗、活疫苗、多价苗之外，新型疫苗包括合成肽疫苗、DNA疫苗、活载体疫苗、基因缺失疫苗等。一些与鱼用疫苗相关的领域如免疫佐剂、接种方法的研究也逐渐深入。本文对以上研究进行了概述，为我国鱼用疫苗的进一步研究和发展提供一些依据。     

基因工程疫苗在鳖病害防治中的应用

采用基因工程疫苗,注射饲养于土池中的自然越冬和温棚中华鳖（Ｔｒｉｏｎｙｘ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）。结果表明：一次性注射疫苗对由嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）等引致的鳖主要疾病具免疫保护作用,毒力攻击保护率为１００％;免疫幼鳖饲养１９０ｄ和２１６ｄ存活率比对照鳖分别高１２．１％和１９．２％;对其它细菌引起的病害延缓作用,对已发病的鳖无治疗作用。基因工程疫苗在当今养鳖业中将具有较广阔的应用前景。     

鸡传染性支气管炎疫苗使用概况

<正>鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis,IB)是由禽传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的一种传染性极强传播范围极广的传染性疾病。由于实际生产中能对该病进行临床治疗的药物暂时还未研制出,因此生产中只能依靠疫苗提高动物的免疫力来预防此病的发生,减少其带来的经济损失。目前已研制成功的IBV疫苗有弱毒疫苗、灭活疫苗、基因工程疫苗、活病毒载体疫苗、转基因植物疫苗等,其中弱毒疫苗和灭活疫苗的使用最为普遍也最有效。     

新型鱼用疫苗的研究进展

养殖业的发展与疾病的防治密切相关 ,传统鱼病的防治多使用抗生素及减毒、灭活疫苗。近年来 ,随着分子免疫学与基因工程技术的迅猛发展 ,新一代鱼用疫苗的研究从 90年代开始起步 ,目前国外研究进展较快 ,主要包括 :ＤＮＡ疫苗 ,合成肽疫苗及减毒活疫苗[1] 。与采用传统方法生产的疫苗相比 ,新型疫苗具有安全、高效、价廉及可大量生产等优点。本文试对这 3种疫苗的研究现状进行综述 ,以探索、开发用于养殖业的新型疫苗 ,同时为深入了解鱼类的免疫防御机制提供依据。收稿日期 :2 0 0 0 -0 7-12作者简介 :夏永娟 ( 1970 -) ,女 ,第四军医大学讲…     

基因工程疫苗在鳖病害防治中的应用

基因工程疫苗是以基因工程为手段或称作ＤＮＡ重组技术产生的疫苗。国内对鳖 (Ｔｒｉｏｎｙｘｓｉｎｅｎｓｉｓ)疫苗的研究也有一些报道 ,但多集中于灭活菌苗的研制。由于嗜水气单胞菌 (Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙ ｄｒｏｐｈｉｌａ)、温和气单胞菌 (Ａ ｓｏｂｒｉａ)等存在多种血清型 ,限制了一般疫苗的有效使用范围 ,商用疫苗的开发至今仍未成功。我们在一般菌细胞苗和化学成份疫苗研究的基础上 ,从菌体共同保护性抗原着手 ,以分子生物学方法为手段 ,研制了鳖的基因工程疫苗。本文报道该疫苗在大田应用的中试情况。1　材料与方法1 1　时间和…     

鱼用疫苗基因工程技术及其商品化初探

对鱼用疫苗的基因工程技术、商品化等新动态进行了介绍，并对应用前景作了分析。     

猪传染性胃肠炎疫苗的研究进展

猪传染性胃肠炎(Porcine transmissible gastroenteritis,TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒引起的一种高度接触性、急性消化道传染病。主要介绍了猪传染性胃肠炎目前的疫苗种类、使用的优缺点,综述新型疫苗的研究现状。     

Prokaryotic expression of a hub protein of white spot syndrome virus with vaccine potential

Envelope proteins of white spot syndrome virus (WSSV) play an important role in viral entry as well as in triggering host defences. To date, some main envelope proteins such as VP28, VP24 and VP19 have been expressed heterologously and proved effective in WSSV prevention. However, VP62, an envelope protein with hub function as well as better antigenicity, has not been focused on. In an attempt to prepare this protein for rapid purification and further functional analysis, N‐terminus‐truncated VP62 was expressed in Escherichia coli using two common fusion tags, including hexahistidine (his6) and solubility‐enhancing tag thioredoxin (Trx). The results showed that the truncated VP62 fused with C‐terminal His‐tag could not be expressed in either E. coli BL21(Plyss) or Arctic Express, but it could be expressed in the form of inclusion bodies in Arctic Express with N‐terminal tag. After refolding and His‐tag affinity purification, the protein with purity over 90% was obtained. This study laid the foundation for evaluation of its vaccine potential as well as further application in WSSV prevention.     

Rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) immune response towards a recombinant vaccine targeting the parasitic ciliate Ichthyophthirius multifiliis

The protective effect in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) of an experimental subunit vaccine targeting antigens in the parasite Ichthyophthirius multifiliis has been evaluated and compared to effects elicited by a classical parasite homogenate vaccine. Three recombinant parasite proteins (two produced in E. coli and one in insect cells) were combined and injected i.p., and subsequently, protection and antibody responses were analysed. Both the experimental and the benchmark vaccine induced partial but significant protection against I. multifiliis when compared to control fish. Specific antibody responses of vaccinated trout (subunit vaccine) were raised against one neurohypophysial n‐terminal domain protein #10 of three recombinant proteins, whereas the benchmark vaccine group showed specific antibody production against all three recombinant proteins. The immunogenic parasite protein #10 may be a potential vaccine candidate supplementing the protective I‐antigen in future vaccine trials.     

溶藻弧菌减毒活疫苗的构建及其免疫保护性

 采用Overlap PCR和同源重组技术, 结合氯霉素(Cm)正向筛选和sacB基因蔗糖负向筛选, 构建了溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)Ⅲ型分泌系统(Type III secretion system, T3SS)注射装置蛋白vscO基因无标记框内缺失突变株ZJ03ΔvscO。在以石斑鱼(Epinephelus coioides)为模型的感染实验中发现ZJ03ΔvscO的毒力较ZJ03下降约150倍。将ZJ03ΔvscO作为减毒活疫苗通过注射、浸泡的途径免疫石斑鱼(Epinephelus coioides)后, 发现其对溶藻弧菌有很好的保护效应, 其中注射组的免疫保护率达84%, 浸泡组次之(68%)。血清效价分析显示, 免疫后第4周注射组和浸泡组的效价均达到最高值, 分别为1: 2 048和1︰128。上述结果表明, 所构建的ZJ03ΔvscO减毒活疫苗可有效提高石斑鱼对溶藻弧菌的免疫力, 并且免疫和攻毒的途径可能是影响免疫保护效果的因子。本研究旨在为溶藻弧菌引起的鱼类疾病防治提供技术支撑。

     

传染性造血器官坏死病核酸疫苗的构建及其在虹鳟接种部位的消长规律

本研究将传染性造血器官坏死病病毒(infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)分离株SD-12糖蛋白(glycoprotein,G)基因克隆进商业化载体pc DNA3.1(+),构建了IHNV G的表达载体,即传染性造血器官坏死病(infectious hematopoietic necrosis,IHN)核酸疫苗,命名为p IHNsd-G。采用背鳍基部肌肉注射的方式,以2μg/尾的剂量免疫虹鳟(Oncorhynchus mykiss)鱼苗(5.0±0.5)g。于免疫后第4天及第7天,利用real-time PCR技术检测免疫虹鳟头肾及接种部位肌肉组织Mx-1基因表达情况;于免疫后第21天,以100倍半数组织培养感染剂量(tissue culture infective dose,TCID50)采取腹腔注射的方式进行攻毒实验,计算核酸疫苗相对保护率(relative percent survival,RPS);于免疫后第60天及150天检测免疫虹鳟血清IHNV中和抗体效价;最后,以p IHNsd-G的启动子序列和氨苄青霉素抗性基因序列为目标基因,利用PCR方法监测p IHNsd-G在免疫虹鳟接种部位的动态分布情况。结果显示:Mx-1基因在头肾和接种部位肌肉中均显著上调表达,并且在接种部位肌肉组织中明显高于同一时间点的头肾组织;攻毒实验中p IHNsd-G对虹鳟的相对保护率高达94.4%;而在免疫后第60天,所有免疫虹鳟血清中均存在中和抗体,其最高效价高达320,在免疫后第150天,最高抗体效价为80,自此,说明已成功获得有效的IHN核酸疫苗。p IHNsd-G在虹鳟接种部位的PCR监测结果显示:在免疫后的第1天即可在注射部位的肌肉中检测到全部p IHNsd-G目标片段,在第84天时已经无法从注射部位肌肉中扩增出全长氨苄青霉素抗性基因,而所有目标基因在第150天时均消失不见。本研究在成功构建IHN核酸疫苗并系统地验证了其有效性的基础上,开展了该疫苗在接种部位的动态分析研究,为IHN核酸疫苗的研发和安全性评价研究提供了基础数据。     

溶藻弧菌双组分调控系统KdpDE减毒活疫苗的构建及其免疫效果评价

为了研究溶藻弧菌双组分调控系统KdpDE减毒活疫苗对鱼体的免疫保护作用,本研究采用Overlap PCR和同源重组技术,构建了kdpD/kdpE（kdpDE）基因无标记基因框内敲除突变株。对野生株和缺失突变株的生物学特性及致病性进行了比较研究,发现kdpDE的缺失对溶藻弧菌的生长速率和胞外蛋白酶活性的影响不明显,但是突变株的泳动能力、生物被膜形成能力较野生株下降。斑马鱼致病性实验结果显示,突变株毒力下降78.5倍,表明减毒株构建成功,可以作为减毒活疫苗的候选菌株。突变株在鱼体内存活能力实验结果显示,注射免疫7 d后,鱼体内不能检测到该菌。以突变株ΔkdpDE为抗原,分别用注射和浸泡的方式免疫斑马鱼,免疫后第28天用溶藻弧菌和哈维氏弧菌攻毒,评估该减毒活疫苗及不同免疫方式对斑马鱼的保护效果。实验结果表明,免疫后的斑马鱼能够抵抗溶藻弧菌的感染,其中注射免疫组的免疫保护率达83.3%,浸泡免疫组次之（66.7%）;同时,该减毒活疫苗能刺激斑马鱼对哈维氏弧菌产生交叉保护效应,其中注射免疫组的免疫保护率为65.5%,浸泡免疫组为55.2%。以上结果表明,kdpDE基因敲除突变株可能是抵抗溶藻弧菌感染的有效的候选减毒活疫苗。     

水产动物基因工程抗菌肽研究及其应用前景的研究

抗菌肽是水产动物体内非特异性免疫系统的第一道防线,在抵御外来病原微生物的过程中发挥着重要作用.来源于鱼、虾、蟹等水产动物的抗菌肽杀菌作用更强,溶血效应小,种类多样化,显示出比其它种类更具优势的应用前景.介绍了一些水产动物抗菌肽的研究近况、基因工程研究进展以及转抗菌肽基因在水产动物中的研究进展,并展望了其在水产领域的应用前景.     

约氏黄杆菌减毒活疫苗对鳜免疫效果评价

为获知约氏黄杆菌(Flavobacterium johnsoniae)减毒活疫苗(M170株)浸泡免疫鳜(Siniperca chuatsi)后的免疫应答,采用荧光定量RT-PCR方法测定免疫后鳜肝脏溶菌酶(Lys)基因、脾脏免疫球蛋白(Ig M)基因表达动力学,并检测了血清中Lys活性和抗体效价变化规律。结果表明,约氏黄杆菌减毒活疫苗浸泡免疫后,鳜肝脏Lys基因表达量显著上调(P0.05),第48小时表达量达到峰值,是对照组的10.9倍(P0.05),直到第28天表达量仍显著高于对照组(P0.05)。同时免疫鱼血清Lys活性明显升高,第2天达到峰值,是对照组的4.35倍(P0.05),第6天与对照组水平相当;免疫鳜脾脏Ig M基因相对表达量从第7天开始上调并显著高于对照组(P0.05),至第28天其相对表达量为对照组的98.7倍(P0.05);而免疫鱼血清抗体效价在第7天开始高于对照组,第28天达到峰值(26)。免疫后第28天采用强毒株M168进行攻毒,结果显示,免疫组相对成活率显著高于对照组,其相对免疫保护率(relative percentage survival,RPS)达85.9%。结果表明约氏黄杆菌减毒株M170可引起鳜特异性和非特异性免疫应答,并提供良好的免疫保护效果。     

传染性造血器官坏死病核酸疫苗的构建及其抗性基因对环境细菌抗性的影响

本研究以传染性造血器官坏死病毒(infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)分离株XJ-13为研究对象,克隆其糖蛋白(glycoprotein,G)基因并连接到商业化载体pcDNA3.1(+),成功构建了真核表达载体pIHNxj-G。为了检测该载体作为核酸疫苗的可能性,本研究以2μg/尾的剂量采用背鳍基部注射免疫虹鳟(Oncorhynchus mykiss)鱼苗[(5±0.5)g]。在免疫后第4天及第30天,以100 TCID_(50)的剂量利用IHNV-XJ-13对虹鳟进行腹腔注射攻毒;在免疫后第4天及第7天,利用Real-time PCR技术检测虹鳟头肾及接种部位肌肉组织Mx-1基因表达情况;在免疫后第4天及30天检测虹鳟血清IHNV中和抗体效价;在免疫后65 d内,分别于不同时间点采集循环水池里的粪便、水以及虹鳟的肠内容物,进行氨苄青霉素抗性菌的分离鉴定。攻毒试验结果显示,核酸疫苗在免疫后第4天和第30天的相对保护率均高于90%;Mx-1基因检测结果显示,Mx-1基因在头肾和接种部位肌肉中均显著上调表达;中和抗体效价测定结果显示,在免疫后第4天,所有血清中均不存在中和抗体(效价均20);而在免疫后第30天,10尾虹鳟中有8尾血清中存在中和抗体,最高效价为160;抗性菌分离结果显示,分离到的氨苄青霉素抗性菌均是天然具有氨苄青霉素抗性的气单胞菌(Aeromonas sp.)和柠檬酸杆菌(Citrobacter sp.),并未分离到包括大肠杆菌在内的任何具有氨苄青霉素抗性的指示菌,且实验组和对照组的氨苄青霉素抗性菌的种类和数量均没有发生统计学意义的改变。本研究提供了具有良好保护效果的IHN核酸疫苗,并为IHN核酸疫苗的安全评价提供了基础数据。