应用PCR技术鉴定牛早期胚胎性别方法优化的研究

研究的目的是优化胚胎PCR性别鉴定方法的条件，建立实用的鉴定方法。试验设计获得了牛种属和公牛特异的引物，利用聚合酶链反应（PCR）对模板DNA进行扩增，通过常规双重PCR法和巢式PCR法的比较研究，结果表明巢式PCR法大大提高了鉴定牛早期胚胎性别的灵敏度。对组织DNA样品、血样、颗粒细胞和公牛冷冻精子进行检测，结果全部与实际性别一致；对于胚胎样品，判定结果与产犊性别一致。通过批量胚胎现场的检测，证明建立的胚胎性别鉴定方法可用于生产。     

应用Y—DNA特异片段的PCR技术鉴定牛和绵羊胚胎性别及应用研究

本研究采用国际八十年代中后期研究成功的特定ＤＮＡ片段扩增技术—聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，进行牛和绵羊胚胎性别鉴定。采用删除富集法，构建富含牛和绵羊Ｙ—ＤＮＡ文库，筛选出特异克隆，并根据其序列，分别设计合成引物，用ＰＣＲ技术分别扩增牛Ｙ染色体上约１４０ｂｐ的片段，绵羊Ｙ染色体上约１３０ｂｐ的片段。对已知性别的牛和绵羊血液样品进行检测，准确率均为１００％（１０／１０；１１／１１）。应用已建立的简易、快速胚胎取样方法及防污染措施，以及设计合成的引物和ＰＣＲ检测胚胎性别的技术方法，奶牛胚胎经性别鉴定后移植，产犊牛７头（４头公犊，３头母犊），准确率为１００％（７／７）。在内蒙牧区生产现场，对绵羊胚胎经性别鉴定后移植，共移植成功１８只受体母羊（每只母羊移植２－４枚同性别胚胎），产羔２５只（８只公羔，１７只母羔），准确率为８０％（２０／２５）。     

牛胚胎性别鉴定荧光定量PCR方法的优化与应用

旨在建立一种可检测牛早期胚胎性别的复合探针体系,减少常规PCR方法电泳所带来的污染,提高鉴定准确率,降低鉴定成本。本研究以SRY为牛胚胎性别鉴定的目标基因,以进口YCD-PCR性别鉴定试剂盒为对照组（n=9 543）,荧光定量PCR的单引物分别扩增体系（荧光单扩,FSPSA,n=6 570）和双引物混合扩增体系（荧光双扩,FDPMA,n=22 238）分别做试验组,从性别鉴定效率、无反应率、雌雄胚胎百分率和比值、移植妊娠率、雌性胚胎母犊率、不同细胞取样数下的性别鉴定结果和鉴定成本等方面进行各组间比较。结果表明,荧光单扩组的雌性胚胎百分率和性别鉴定效率极显著高于其他两组（P<0.01）,无反应率极显著低于其他两组（P<0.01）,雌雄胚胎比值与其他两组差异较大（1.03∶1 vs 1∶1.03和1∶1.02）,雌性胚胎母犊率极显著低于荧光双扩组和对照组（P<0.01）;荧光双扩组的雌性胚胎百分率、雄性胚胎百分率和雌性胚胎母犊率均与对照组无显著差异（P>0.05）,雌雄胚胎比值与对照组相似（1∶1.03和1∶1.02）,无反应率极显著低于对照组（P<0.01）,性别鉴定效率极显著高于对照组（P<0.01）。取样细胞4~6组和7~10组的性别鉴定效率极显著高于1~3组和SD（separated & died cells）组（P<0.01）,而1~3组和SD组之间及4~6组和7~10组之间差异不显著（P>0.05）。移植妊娠率4~6细胞组最高（49.68%）,但各取样组间无显著差异（P>0.05）。荧光双扩法与对照组相比,鉴定成本下降了46.76%。结果显示,荧光双扩方法产母犊准确率最高,鉴定成本较低,取样4~6细胞时的移植妊娠率最高,是一种更可行的牛胚胎性别鉴定技术,更有利于产业化推广和应用。     

家畜胚胎性别鉴定的研究进展

家畜胚胎性别鉴定是家畜胚胎移植的重要内容，对实现动物性别的人为控制具有重要意义。近年来，随着性别鉴定技术的不断发展，动物性别控制主要采用两条途径，即X精子与Y精子的分离和胚胎性别的鉴定。在前者尚未取得完全成功的情况下，胚胎的性别鉴定已成为性别控制的主要途径。家畜胚胎的性别鉴定技术是家畜胚胎移植技术的一项重要内容。通过移植已知性别的胚胎，控制家畜后代的性别比例，能加快优良母畜的繁殖进程，促进高效畜牧业的发展。     

早期胚胎性别鉴定的新进展

上海市医学遗传研究所曾溢滔院士和黄淑祯教授所领导的国家８６３课题组率先在国际上阐明了奶牛、山羊的性别决定基因（ＳＲＹ）的核心序列,并首次提出和应用ＰＣＲ技术检测奶牛胚胎的ＳＲＹ基因对其进行性别鉴定。成功地进行了奶牛和山羊冷冻胚胎的ＳＲＹ检测和选择移植,从而使胚胎性别鉴定的实用性大大提高。为了提高动物胚胎鉴定技术的实用性并促进其产业化,课题组进一步建立了试管牛和试管羊胚胎性别鉴定和胚胎移植的新技术。以２７枚试管牛胚胎和２０７枚试管羊胚胎进行性别鉴定,然后选１０枚经性别鉴定的牛胚胎移植于８头受体母牛以及…     

应用牛雄性特异性引物鉴定湖羊早期胚胎性别的研究

家畜胚胎的早期性别鉴定技术,是家畜胚胎移殖技术的一项重要内容,其实质就是Ｙ染色体或存在于Ｙ染色体上的性别决定基因（即ＳＲＹ基因）的检测技术。ＰＣＲ方法因其准确、快速、简便、经济的优点,在家畜早期胚胎性别鉴定中占有越来越重要的位置。其实质就是ＳＲＹ基因...     

应用PCR技术鉴定牛早期胚胎性别的研究

应用ＰＣＲ技术鉴定牛早期胚胎性别的研究吕碧文俞颂东金水仙（浙江省农科院畜牧兽医所,杭州,３１００２１）家畜胚胎的早期性别鉴定技术,是家畜胚胎移植技术的一项重要内容,其实质就是Ｙ染色体或存在于Ｙ染色体上的性别决定基因（即ＳＲＹ基因）的检测技术。ＰＣＲ...     

基因扩增技术在牛早期胚胎性别鉴定中的应用

家畜早期胚胎性别鉴定是近年来胚胎工程领域研究的重点，而基因扩增技术在胚胎性别鉴定的应用为实现家畜性别的人为控制带来了新的希望。目前用于牛胚胎性别鉴定的基因扩增方法主要有PCR法和LAMP法等。文章对SRY基因、动物性别决定的生物学机理和用于牛早期胚胎性别鉴定的基因扩增技术作一简要综述。     

牛胚胎性别鉴定与取样胚胎移植应用技术的研究

本研究应用ＰＣＲ技术扩增牛ＳＲＹ序列进行奶牛胚胎性别鉴定。经１０９枚鲜、冻胚的移植，获鲜胚移值妊娠率５８．６％（３４／５８），常规冷冻胚胎移植妊娠率４４．４％（１２／２７），一步细管冷冻解冻胚胎移值妊娠率１６．７％（４／２４）。犊牛性别验证与ＳＲＹ鉴定结果均相符合。实验中对胚胎发育时期的划分，胚胎质量评定和胚龄的确定，胚龄与受体发情时间在移植中的关系，胚胎的切割取样，取样胚胎的冷冻进行了研究。     

影响性别鉴定胚胎质量的因素

随着胚胎技术的发展，胚胎性别鉴定技术已成为其不可缺少的组成部分。胚胎性别鉴定技术推动了胚胎移植的产业化发展。加速了乳畜品种的改良。经性别鉴定的胚胎的质量由于受取样等操作过程的影响有明显降低，尤其在胚胎冷冻后。其发育潜能会受到较大影响。如何克服这一现象已经成为目前生殖生物学领域研究的热点问题之一。本文就胚胎性别鉴定过程及影响鉴定后胚胎质量的因素进行了综述，以期对相关研究能有所帮助。     

非电泳法PCR牛早期胚胎性别鉴定研究

为选出更高效、实用的牛胚胎性别鉴定方法，分别用成年牛血样提取的基因组DNA和冷冻的牛早期胚胎细胞DNA为样本，以电泳法和非电泳法用相应的性染色体DNA引物做胚胎PCR性别鉴定实验，以相对比。血液模板DNA结果与胚胎样本结果都表明，使用DYZ-1引物的非电泳法在比使用SE引物的电泳节约1h以上时间的同时，具有比SE更高的灵敏度。这次研究在我国首次成功地把非电泳PCR法应用到牛胚胎性别鉴定之中，减少了胚胎性别鉴定的操作步骤，并大大缩短了性别鉴定所需要的时间，从而使胚胎移植现场性别鉴定更加可行。     

动物的性别控制

动物的性别控制是指通过对精子或胚胎的性别鉴定以达到调控子代性别的目的，人为调控动物的性别是人类长期以来的愿望，随着胚胎冷冻、胚胎切割、体细胞克隆技术的日渐成熟，动物的性别控制显得更为重要。     

哺乳动物胚胎性别鉴定技术的研究进展

性别控制是通过人为方法使雌性成年动物按照人们的意愿生产特定性别后代的动物繁殖新技术。早期胚胎鉴定是性别控制的一条重要途径，近年来取得了长足进展，尤其是聚合酶链式反应技术。本文综述了胚胎性别鉴定的基本原理、鉴定方法以及研究概况，并阐述了该技术存在的问题及发展前景。     

家畜早期胚胎性别鉴定的方法

动物性别控制主要采用2条途径,即X精子与Y精子的分离和胚胎性别的鉴定。在前者尚未取得完全成功的情况下,胚胎的性别鉴定成为性别控制的主要途径。家畜胚胎的性别鉴定技术是家畜胚胎     

将扩张的猪囊胚作显微分割以鉴定性别

鉴定家畜早期胚胎的性别可使畜牧业获得所需性别的家畜。鉴定早期胚胎性别的一种方法是切割部分胚胎分裂球或滋养层细胞作染色体分析,鉴定性别后再将胚胎移植;另一种方法是将胚胎作二分割,一半进行性别鉴定,另一半移植。本实验旨在开发一种既可从胚胎采集一定数量的细胞供性别鉴定,又不影响胚胎发育和存活的方法。     

LAMP法鉴定奶牛早期胚胎性别的效果研究

本试验利用Lamp法对28枚鲜胚进行了性别鉴定，将其中13枚雌性胚和3枚雄性胚胎给受体牛移植，妊娠率达45．5％，性别鉴定的准确率为100％。说明Lamp法用于奶牛早期胚胎性别鉴定是切实可行的。     

家畜胚胎性别鉴定的研究进展

家畜早期胚胎的性别鉴定是家畜胚胎移植的重要内容 ,对实现动物性别的人为控制具有重要意义。近年来随着性别鉴定技术的不断发展 ,出现了许多鉴定方法。本文对性别决定基因、动物性别决定机理和早期胚胎性别鉴定的方法作一简要综述 ,特别是对PCR方法在胚胎性别鉴定中的应用及其基本过程作一简述     

奶牛性别控制技术

1早期胚胎性别鉴定技术通过胚胎移植前对胚胎的性别进行鉴定以控制性别,目前已发展了多种胚胎性别鉴定方法,主要包括以下几种:     

家畜性别控制研究现状与展望

本文综述了国内外家畜性别控制的途径，方法及进展情况，并着重叙述了胚胎性别鉴定的发展过程，研究现状，应用前景及存在的问题，指出：在家畜性别控制中，以ＰＣＲ技术进行胚胎的性别鉴定为最有效的方法。     

胚胎性别鉴定：现代技术评论及在畜牧生产商业化应用方面的潜力（上）

胚胎移植技术的发展为通过胚胎性别鉴定控制家畜后代性别开辟了新的途径。目前，鉴定的方法已发到５种；即：细胞遗传学分析；Ｘ－染色体关联酶活性的测定；胚胎发育速率的差异性分析；雄性特异性抗原的探测，以及Ｙ－染色体特异性ＤＮＡ探针。采用牛的Ｙ－染色体特异性ＤＮＡ序列的鉴定方法。可以从９０％以上的少于２细胞胚胎样品中鉴定胚胎性别达到９４％的准确率。因经济和技术原因，胚胎性别鉴定还未在常规胚胎移植中广泛应用。