应用LHD-Sj23和SjCL基因重组抗原诊断水牛日本血吸虫病的研究

目的：验证日本血吸虫基因重组抗原检测水牛日本血吸虫病的效果。方法：以日本血吸虫基因重组抗原LHD-Sj23／pGEX和SjCL／pET-28a( )作为抗原，应用ELISA法检测水牛日本血吸虫病。结果：感染日本血吸虫病阳性符合率分别为93．3％(42／45)和95．6％(43／45)，阴性符合率分别为93．3％(42／45)和80％(36／45)。和以血吸虫成虫抗原(SWAP)和虫卵(SEA)抗原作为诊断抗原获得的结果差异不明显。同时将上述两种基因重组抗原混合作为诊断抗原，检测水牛血吸虫病，结果阳性符合率为88．9％(40／45)，阴性符合率为33．3％(15／45)。结论：由于基因重组抗原制备简便、价廉，有利于诊断技术的标准化。因此，基因重组抗原在血吸虫病诊断领域有着良好的研究和应用前景。     

家畜日本血吸虫病血清学诊断方法浅析

笔者多年从事家畜日本血吸虫病的实验室诊断工作，近十几年来，随着科技的进步，在家畜日本血吸虫病的诊断方面涌现出许多血清学诊断方法。这些血清学诊断方法有什么异同，如何选择适合本地使用的方法，笔者根据多年的实践，以及对部分诊断方法的选用，积累了一定的经验，在此作一浅析，谨供家畜血防工作者参考。     

应用重组日本血吸虫组织蛋白酶L诊断日本血吸虫病的研究

在大肠杆菌BL21中表达日本血吸虫组织蛋白酶L基因，经镍离子亲和层析柱纯化得到重组日本血吸虫组织蛋白酶L；以间接ELISA法，检测血吸虫病因牛血清104份，阳性检出率为67．31％；以血吸虫感染小鼠、兔、绵羊血清做阻断试验，得到的OD值与阴性血清相当。结果表明，以重组日本血吸虫组织蛋白酶L作为诊断抗原检测日本血吸虫病牛感染情况，有一定的应用前景。     

东方田鼠血清筛选噬菌体展示抗原对小鼠日本血吸虫病免疫效果观察

本研究利用前期研究中东方田鼠血清筛选日本血吸虫成虫噬茵体展示cDNA文库获得的10个阳性克隆中的8个噬茵体克隆单独或联合免疫BALB/c小鼠,观察对日本血吸虫病的免疫预防效果,以筛选其中具有发展成疫苗的候选抗原编码基因.研究发现与空白对照组相比,展示血吸虫锌指蛋白的1号噬茵体克隆免疫组在两次实验中分别获得了32.10%和31.25%的减虫率、61.14%和47.31%的肝脏减卵率,虫体合抱率分别由92.59%、57.39%下降到69.09%、41.03%;其它噬茵体克隆单独免疫组或联合免疫组在第一次实验中均获得了8.02%～32.72%的减虫率和40.19%～69.53%的减卵率,但在第二次实验中未能得到验证.研究结果提示,日本血吸虫环状锌指蛋白(1号克隆)编码基因在疫苗方面具有重要研究价值.     

日本血吸虫重组抗原Sj GST Paramyosin和Sj23对绵羊的保护性免疫…

１９９４￣１９９５年１９９７年应用日本血吸虫３类候选疫苗分别免疫绵羊，各组的减虫率、粪便虫卵减少率和组织（肝、大肠、小肠）的虫卵减少率分别是：虫体副肌球蛋白组１７．４％￣５５．３％，１４．６％￣６８．１％和４８．９％￣７６．７％；重组副肌球蛋白组４１．４％￣４４．２％，１５．９％￣２５．１％和４１．１％￣４８．０％；Ｓｊ２６谷胱甘肽Ｓ转移酶（ＧＳＴ）组５３．４％￣６２．１％，１１．０％￣３８．６％     

中国大陆株日本血吸虫23kD基因重组抗原的研究：重组的23kD抗原大…

把编码中国大陆株日本血吸虫２３ｋＤ抗原大亲水区多肽的ＤＮＡ片段亚克隆到ｐＧＥＸ载体上进行表达，并用重组抗原和载体ｐＧＥＸ表达蛋白分别免疫了二批ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，结果与未免疫小鼠和载体ｐＧＥＸ表达蛋白免疫小鼠相比，重组抗原免疫小鼠分别获得了５７．８０％￣７０．３０％和５２．６３％￣６２．９６％的减虫率，证明重组的日本血吸虫２３ｋＤ抗原大亲水区多肽可诱导宿主抗血吸虫攻击感染的部分保护力。     

日本血吸虫Sj32KD抗原基因的克隆、表达及诊断应用

目的开展日本血吸虫中国大陆株Sj32KD抗原基因研究,探讨其作为诊断抗原的潜力。方法应用PCR方法克隆Sj32KD抗原基因,并在大肠杆菌系统中进行表达,利用H is亲和层析方法纯化融合蛋白,并应用重组的Sj32KD抗原检测羊日本血吸虫病。结果克隆了ORF为1 272bP的日本血吸虫中国大陆株Sj32KD抗原基因,成功构建表达质粒Sj32-pET28 a,并在BL21(DE3)菌株中获得了分子量为47KD的特异性表达产物。应用Sj32KD重组抗原应用于检测羊日本血吸虫病,结果阴性血清的特异性为85.71%,阳性血清的敏感性为95.45%。结论成功克隆表达了日本血吸虫Sj32KD抗原,原核表达融合蛋白有一定的诊断应用潜力。     

日本血吸虫病核酸疫苗的研究

核酸疫苗能同时诱发体液免疫和细胞免疫 ,具有众多传统疫苗无法比拟的优点 ,并且佐剂的应用能增强核酸疫苗的免疫效果。抗日本血吸虫核酸疫苗的研究在实验动物和牛、羊等大家畜上取得一定进展 ,混和或多价疫苗是未来核酸疫苗的发展方向     

高效素中药饲料添加剂质量控制方法的研究

高效素是由党参、白术、何首乌、葛根、杜仲、陈皮、大黄、石膏、柴胡、山楂、枳实、六曲、蜀椒、当归、龙骨、熟地、生地、槟榔、麦芽、谷芽、乌梅等 2 1味中药经粉碎混合而成中药饲料添加剂。经兽医临床验证 ,该中药饲料添加剂对仔猪腹泻、大肠杆菌引起的消化道炎症具有较好的预防和治疗效果 ;同时经动物饲养对比试验验证 ,表明该中药饲料添加剂具有提高生猪生长速度、降低死亡率、提高经济效率等作用。目前 ,中药饲料添加剂尚无可行的检验方法。为了控制该中药饲料添加剂的质量 ,确保疗效 ,我们用紫外分光光度法和显微镜法 ,对该中药添加…     

Pneumocystis carinii in large domestic animals in Denmark. A preliminary report

By microscopic examination of toluidine blue O stained autopsy lung imprints Pneumocystis carinii was shown in 6 calves out of 160 (3.8%), in 1 sheep out of 28 (3.6%) and in 8 pigs out of 119 (6.7%). This is the first report of Pneumocystis carinii in calves, sheep and pigs in Denmark.     

免疫胶体金试剂盒检测家畜血吸虫病的效果及分析

目的观察浙江省农科院研制的免疫胶体金试剂盒对家畜血吸虫病检测效果。方法用试剂盒检测疫区放养耕牛、圈养猪和鸡的感染率及感染强度,同时用粪便毛蚴孵化法为标准,观察试剂盒的敏感和特异性。结果用免疫胶体金试剂盒于2005年和2006年间分别检测牛749头和613头,阳性率分别为55.4%和71.9%;检测圈养猪108头,鸡12只,阳性率分别为84.3%和91.7%;粪检检测出阳性牛18头,免疫胶体金的漏检率达33.3%;结论免疫胶体金技术检测家畜血吸虫病,假阳性率和假阴性率均很高,免疫胶体金试剂盒检测技术需进一步改进提高。     

Identification of serum protein markers for early diagnosis of pregnancy in buffalo

Improper or delayed pregnancy diagnosis has significant impact over animal production, particularly in buffaloes which inherently suffer from several reproductive inefficiencies. Thus the present study has undertaken to identify serum protein markers pertaining to early pregnancy diagnosis in buffaloes. Serum samples were collected from 10 pregnant Murrah Buffalo heifers at weekly intervals from days 0‐35 post‐artificial insemination and from 12 inseminated non‐pregnant cyclic buffalo heifers on days 0, 7, 14 and 21. Two‐dimensional gel electrophoresis and densitometric analysis revealed the presence of five protein spots showing average density fold change of ≥4 during early pregnancy. Mass spectrometry analysis identified these up‐regulated proteins as anti‐testosterone antibody light chain, apolipoprotein A‐II precursor, serum amyloid A, cytokeratin type II, component IV isoform 1, which are have established roles in embryogenesis, but over‐expression of the fifth identified protein immunoglobulin lambda light chain in pregnancy has been elucidated as a novel finding in the current study. Further, with bioinformatics analysis, potential antigenic B‐cell epitopes were predicted for all these five proteins. An antibody cocktail‐based approach involving antibodies against all these five up‐regulated entire proteins or their epitopes could be developed for early detection of pregnancy in buffaloes. © 2016 Japanese Society of Animal Science     

家畜痹症的辨证治疗

家畜痹症多由体虚感邪等原因引起 ,因其病邪风、寒、湿、热的偏重不同 ,其表现形式亦有差异。自1 980年以来 ,笔者运用中兽医辨证治疗马、牛、猪各种痹症 1 0 0余例 ,治愈率达 90 %以上。1　痛痹 (风寒型 )1 .1　临床症状患畜多表现为毛焦体瘦 ,耳鼻发凉 ,四肢、颈、腰、背等部位肌肉僵冷板硬 ,四肢关节不能弯曲 ,行走艰难 ,牵行不动。1 .2　治疗治宜温经散寒、祛风除湿。方用独活寄生汤加减 :独活 30 g,桑寄生 30 g,杜仲 2 0 g,牛膝 2 5 g,细辛 1 0 g,秦艽 30 g,茯苓 2 0 g,肉桂心 30 g,防风 30g,党参 30 g,黄芪 2 0 g,当归 30 g,白芍 2 5 …     

A comparison of whole virus and recombinant transmembrane ELISA and immunodiffusion for detection of ovine lentivirus antibodies in Italian sheep flocks

Sera from two sheep experimentally infected with ovine lentivirus (OLV) and from 186 sheep selected from flocks with known high or low prevalence of infection or on the basis of virological or histopathological examination were simultaneously tested by whole virus (WV) ELISA, recombinant transmembrane (r-TM) ELISA and AGID assay. Antigens for both the WV ELISA and AGID were prepared from an Italian field isolate; recombinant antigen was derived from the N-terminal region of the transmembrane envelope protein of strain K1514. The WV ELISA detected the highest number of seropositives, followed by the r-TM ELISA and AGID test. The sensitivity and specificity of the r-TM ELISA relative to the WV ELISA were 0.66 and 0.95, respectively. Immunoblot analysis of 14 WV ELISA-positive and r-TM ELISA-negative sera showed that the major core protein was immunodominant on WV antigen. It is concluded that the r-TM ELISA was more sensitive than the AGID test but less sensitive that the WV ELISA, particularly for detecting antibodies in the early stages of infection.Abbreviations AGID agar gel immunodiffusion - bp base pair - ELISA enzyme-linked immunosorbent assay - FBS fetal bovine serum - IB immunoblot - kD kilodalton - OLV ovine lentivirus - MEM minimal essential medium - p.i. post-infection - r recombinant - SDS-PAGE sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis - TM transmembrane - WV whole virus     

斑点免疫吸附试验诊断羊脑多头蚴病的研究

以原头节可溶性粗抗原经Sephadex G-200层析纯化抗原为包被抗原，兔抗羊IgG-HRP结合物为显色剂，建立检测羊脑多头蚴病血清抗体的Dot-ELISA，并以ELISA作平行对照。结果，粗抗原和层析纯化抗原检测86头份羊脑多头蚴病阳性血清，其敏感性分别为94．18％和93．02％，两种抗原的敏感性无显著差异；检测122头份绦虫蚴病阴性血清，18头份棘球蚴病阳性血清，35头份细颈囊尾蚴病阳性血清，其特异性分别为90．29％和95．43％。两种抗原的特异性差异显著。Dot-ELISA和ELISA两种方法的符合率为100％。层析纯化抗原比粗抗原的特异性有了明显提高，而敏感性没有降低。层析纯化抗原和操作术式都具有良好的重复性，Dot-ELISA和ELISA对比试验结果相近，且具简便、快速及不需要复杂设备等优点，是一种检测羊脑多头蚴病血清抗体的理想方法。     

牛羊4种寄生虫病联合诊断技术的研究与应用

疫区牛羊同时寄生有捻转血矛线虫、日本血吸虫、伊氏锥虫和肝片吸虫等多种寄生虫。目前血清学诊断方法对这 4种寄生虫病的检测需 2～ 4次操作。将捻转血矛线虫、日本血吸虫、伊氏锥虫和肝片吸虫抗原分别以 0 1 5 ,0 0 4 ,0 0 6和 0 1 3μg/ μL的最佳浓度依次定点在同一硝酸纤维素膜条上 ,制成 4种寄生虫病联合诊断膜。用黄牛IgG ,水牛IgG和山羊IgG联合免疫兔 ,获得了高效价兔抗黄牛、水牛和山羊 (简称兔抗牛羊 )IgG抗血清。应用兔抗牛羊IgG抗血清连接酶标SPA ,建立了 1份血纸能同时用于检测牛、羊捻转血矛线虫、日本血吸虫、伊氏锥虫和肝片吸虫病抗体技术。经浙江、湖北、四川、安徽等省应用 ,该项技术具有省工、省时、经济、实用等优点。适宜于牛、羊捻转血矛线虫、日本血吸虫、伊氏锥虫和肝片吸虫病流行区的普查或监测