分子育种手段之微卫星技术的应用与前景

在国内，1995年，西北农业大学窦忠英等用胚胎细胞核移植产生了6头猪。1996年，湖北农科院魏庆信等得到了胚胎细胞核移植猪。1997年赵浩斌等和2000年Li等分别获得猪胚细胞核移植后代1998年，东北农业大学的李光鹏等把猪胚胎的细胞核通过电融合移植到去核的体内和体外成熟卵母细胞中，出生了2头克隆猪。2003年，西北农林科技大学冯秀亮等得到了人体细胞和猪卵母细胞异种核移植囊胚。     

猪胚胎细胞核移植研究进展

细胞核移植是目前倍受学术界和国际社会关注的焦点问题之一。已经获得牛、羊、猪、兔、鼠等核移植个体,而且成功地得到体细胞核移植绵羊和小鼠。尽管猪胚胎细胞核移植也有报道,但进展缓慢,现对猪细胞核移植的研究现状,以及与之有关的卵母细胞孤雌激活等问题作较系统的综述。     

猪胚胎细胞核移植研究进展

细胞核移植是目前倍受学术界和国际社会关注的焦点问题之一.已经获得牛、羊、猪、兔、鼠等核移植个体,而且成功地得到体细胞核移植绵羊和小鼠.尽管猪胚胎细胞核移植也有报道,但进展缓慢.现对猪细胞核移植的研究现状,以及与之有关的卵母细胞孤雌激活等问题作较系统的综述.     

长白猪和哈白猪超数排卵的研究

近几十年来，对单胎家畜的超排研究较为深入。但对猪超排研究相对较少，其超数排卵的意义也远不如单胎动物大，但猪却能给生物技术研究提供大量的胚胎。近年来，随着细胞核移植技术在畜牧科研和生产上的应用，猪的超数排卵技术开始受到应有的重视。此次试验对长白猪和哈白猪进行了超数排卵研究，其目的是建立有效的猪超数排卵技术，为进一步做好猪胚胎生物工程研究提供必要的方法和数据；为猪的细胞核移植研究，提供尽可能多的卵母细胞和胚胎。     

体细胞克隆猪胚胎的研究进展

猪的体细胞克隆研究进展相对较慢,其主要原因是猪的生殖细胞、胚胎体外显微操作难度较大;妊娠维持有别于其他家畜,需具备一定量的胚胎数.所以直至2000年才有所突破,获得体细胞克隆后代[1,2].近几年来在这些方面都进行了大量深入的研究,几个研究小组都得到了体细胞克隆猪.然而猪体细胞核移植的效率非常低.用占移植卵母细胞的比例来衡量,只有1%～2%.本文就猪体细胞克隆的关键技术加以论述.     

小型猪克隆胚胎体外培养阶段的优化

本试验从卵母细胞卵丘多少和初次卵裂时间早晚2个方面进行研究,旨在改善小型猪克隆方案的体外培养环节,提高克隆效率。将卵母细胞按卵丘多少分成3组,比较卵母细胞的成熟效果,取成熟效果好的卵母细胞进行后续试验;PA和SCNT试验均按初次卵裂时间早晚分成3组,在体外培养条件下,比较胚胎的卵裂率和囊胚率。结果表明,卵丘多的卵母细胞体外成熟39～40 h和卵丘少的卵母细胞体外成熟41～42 h,比不区分卵丘多少的卵母细胞体外成熟39～42 h的成熟效果要好;初次卵裂时间发生在26 h以前的胚胎比26 h之后的胚胎在数量和质量上都明显优越,前者胚胎的卵裂率和囊胚率显著高于后者,此结果在孤雌激活(parthenogenetic,PA)胚胎和体细胞核移植(somatic cell nucleartransfer,SCNT)胚胎的体外试验中均得到验证。本研究完善了小型猪克隆方案的体外培养环节,为器官异种移植提供相关技术参考。     

猪体细胞克隆和基因编辑技术研究

<正>体细胞核移植（somaticcell nucleartransfer,SCNT）是一种将已分化的细胞重编程恢复其全能性,进而生产与供体细胞基因型完全相同后代的无性繁殖技术。包括收集并成熟卵母细胞,供体细胞核处理,重构胚的体外激活,胚胎的培养和移植等过程。猪的SCNT技术的建立在农业和医学有广泛的应用。     

体细胞克隆猪胚胎的研究进展

自"多利"羊问世以来,体细胞克隆研究已取得了很大进展,相继获得了牛、山羊、鼠等克隆动物.相对而言,猪的体细胞克隆研究进展较慢,其主要原因是猪的生殖细胞、胚胎体外显微操作难度较大;妊娠维持有别于其他家畜,需具备一定量的胚胎数.所以直至2000年才有所突破,获得了体细胞克隆后代.然而,猪体细胞核移植的效率很低,用占移植卵母细胞的比例来衡量,只有1%～2%.本文主要就猪体细胞克隆的关键技术加以简要论述,供参考.     

Vero细胞共培养体系对猪胚胎早期发育的影响

本研究旨在探讨Vero细胞共培养体系对猪胚胎早期发育的影响。收集屠宰场废弃卵巢,抽取卵母细胞。采用电激活联合化学激活的方法得到孤雌胚胎,同时用所得的卵母细胞与卵丘细胞构建猪体细胞核移植重构胚;并将所得的孤雌胚、核移植重构胚移入NCSU-23(培养液)中与Vero细胞共培养。结果,Vero细胞共培养组的囊胚率显著高于对照组(P0.05),各组囊胚细胞数无显著差异(P0.05)。结果表明,Vero细胞作为共培养体系中的滋养层细胞有利于猪胚胎的早期发育。     

通过胚胎成纤维细胞核微注射进行猪克隆

猪克隆对优化猪肉生产和人类外源器官移植具有重大作用。我们为了从已分化的细胞进行猪克隆 ,将猪胚胎成纤维细胞核微注射入去核的卵母细胞 ,然后用电激活的方法诱导其发育。共将 1 1 0个克隆胚胎移植到 4头替代母猪体内 ,产生了一头外表正常的雌性仔猪。其毛色表明了其克隆来源 ,并以ＤＮＡ微卫星分析予以了确证通过胚胎成纤维细胞核微注射进行猪克隆@张贤群     

山羊卵母细胞体外成熟体系研究进展

卵母细胞体外成熟(IVM)是山羊胚胎体外生产的关键步骤,其对山羊体外生产胚胎的数量和质量均具有非常重要的意义。此外,IVM还可以满足胚胎工程技术如体细胞核移植、转基因动物生产对卵母细胞的大量需求。然而,由于山羊卵母细胞体外成熟研究起步较晚,与牛、猪等家畜相比仍然存在不小的差距,存在诸如体外成熟率低、胚胎质量不佳、培养体系可重复性低等问题。因此,分析山羊卵母细胞体外成熟的主要影响因素,提高山羊卵母细胞体外成熟率,建立山羊卵母细胞体外成熟稳定培养体系,就成为了近年来山羊胚胎体外生产的研究重点。论文综合国内外学者近年的相关研究,对可能影响山羊卵母细胞体外成熟效率的各种因素进行了综述分析,同时对山羊卵母细胞体外成熟现存问题进行了分析,以期为建立山羊卵母细胞体外成熟体系提供理论支持。     

外源褪黑素对猪卵母细胞体外成熟及多精受精的影响

本研究旨在探讨褪黑素对猪卵母细胞体外成熟及多精受精的影响。在猪卵母细胞体外成熟培养基中添加1 nmol/L褪黑素或1 nmol/L褪黑素+1 nmol/L Luzindole作为试验组,不添加褪黑素及Luzindole作为对照组,检测卵母细胞核成熟率、多精受精率,并观察体外受精胚胎的发育能力及与多精受精相关的细胞器分布情况。结果表明：各组间卵母细胞核成熟率及体外受精胚胎的卵裂率无显著差异;褪黑素组的猪卵母细胞多精受精发生率较其他2组降低（P<0.05）,囊胚形成率提高（P<0.05）,同时猪卵母细胞皮质颗粒及高尔基体的正常分布情况得到显著改善。结果证明,在猪卵母细胞体外成熟培养液中添加1 nmol/L褪黑素可显著改善卵母细胞成熟质量,抑制多精受精的发生。     

水牛繁殖生物技术研究进展

水牛的繁殖受诸多因素的影响。为提高其繁殖力 ,多种繁殖生物技术得到大量研究。水牛精子的稀释、冷冻及人工授精已基本程序化 ,并得到了广泛推广。通过超数排卵和胚胎移植的研究 ,获得了水牛胚胎移植的后代。水牛卵母细胞的采集、体外成熟、体外受精和受精胚的培养也得到大量研究 ,并成功产出体外受精水牛。在水牛胚胎冷冻和移植的研究方面也取得成功并产犊。细胞核移植、基因组和基因图谱等新兴生物技术在水牛上也得到初步研究。随着转基因等生物技术的进一步发展 ,水牛的遗传资源将得到更好的开发     

不同添加物质对猪卵母细胞体外成熟的影响

卵母细胞体外成熟(IVM)是胚胎工程的重要环节,在体外受精、体细胞核移植及转基因动物等多项操作的早期起决定性作用。IVM技术可有效回收利用屠宰家畜的卵巢,以解决哺乳动物胚胎工程中卵子来源不足的问题。目前,IVM技术已应用于牛、山羊、绵羊、猪等动物的繁殖技术中,并成功获得后代[1],     

家兔胚胎细胞核移植的研究现状

胚胎细胞核移植技术(核移植)是指将不同发育时期的胚胎细胞核以显微手术及细胞融合的方法移植到去核卵母细胞或受精卵中,并使重组胚胎发育至产仔的过程。通过此技术,不仅可以生产出大量的克隆动物,而且对于研究动物胚胎的发育机理也具有重要的作用。 早在1905年,Spemann就证明,蝾螈早期胚胎的卵裂球具有功能相同的核,并在1938年提出了核移植的设想;按这一设想,1952年Berggs和King首次获得了两栖类美洲豹蛙的核移植后代。到80年代,核移植技术在哺乳动物中也相继获得成功,目前已取得了绵羊、牛、小鼠、兔、猪、山羊的核移植后代。而且核移植技术也成功地用于研究细胞的核质关系,配子发光过程中核的相互作用等方面。     

卵母细胞体外成熟的影响因素

随着哺乳动物体外受精、细胞核移植技术的不断深入,人们对成熟卵母细胞以及哺乳动物胚胎需求量日益增加,卵巢内丰富的卵泡资源是胚胎工程迅速发展的基础。本文从卵巢因素、供体、体外培养条件和成熟培养液中添加成分等对卵母细胞IVM的影响进行了分析,为胚胎的体外生产提供理论基础和科研依据。     

不同核移植方法对牛体细胞核移植效率的影响

以牛皮肤成纤维细胞为供体细胞,比较了电融合法和细胞质内注射法2种核移植方法对体细胞核移植效率的影响.电融合法构建重组胚的效率显著低于细胞质内注射法(47.1%比89.0%,P＜0.01);重组胚培养36 h后的裂卵率和培养8 d时囊胚发育率无明显差异(76.4%比73.2%,11.2%比12.3%;P＞0.05),但相对于操作的卵母细胞总数而言,电融合法得到的总囊胚发育率显著低于细胞质内注射法(5.6%比10.9%,P＜0.01).结果表明,用细胞质内注射法进行体细胞核移植效率更高.将发育到桑椹胚和囊胚期的95枚核移植胚胎移植到33头受体牛,其中31头受体牛在移植后第2个情期前返情;1头受体牛在移植后75 d返情,但未进行直肠检查,无法确定妊娠情况;1头受体牛在移植后60 d未见返情,直肠检查确证妊娠,93 d受体牛流产.胚胎移植结果表明,用细胞质内注射法构建的体细胞核移植胚胎至少可以维持早期妊娠.     

我国首例绿色荧光转基因克隆猪成功产下荧光猪崽

2008年1月7日,我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪成功产下2头具有绿色荧光遗传特征的小猪。有关专家称,这次试验的成功标志着我国通过体细胞核移植技术生产转基因猪已经发展成熟。     

卵母细胞体外成熟与体细胞核移植

众所周知,体细胞核移植中体细胞必须在去核的卵母细胞内进行重编程,以恢复其全能性,而卵母细胞的成熟程度则会直接影响体细胞的重编程过程。所以卵母细胞的体外成熟,作为体细胞核移植过程中的一个关键环节而为人们所关注。哺乳动物在胎儿出生前后就形成了一定数量的卵母细胞,在胎儿时期,卵巢内有相当数量的由原生殖细胞形成的卵原细胞,卵原细胞进一步形成初级卵母细胞(此期又称为GV期),此时卵母细胞生长极不明显可持续几个月到几十年。性成熟后,卵母细胞进入迅速生长阶段,形成大量卵黄,积累各种营养物质,完成了卵质的分化,合成储存了胚胎早…     

哺乳动物卵母细胞孤雌生殖的现状与展望

综述了哺乳动物卵母细胞孤雌生殖的主要研究进展,包括卵母细胞的成熟与激活、孤雌发育,以及游离Ca2 浓度的测定。为卵母细胞成熟体系、胚胎发育体系和胚胎干细胞体系的建立,以及体细胞核移植试验提供适宜的方法。