利用原生质体再生恢复核盘菌菌株Ep-IPN毒性的研究

分析了69个随机挑选的核盘菌弱毒菌株Ep-1PN原生质体再生后代的生长速度、菌落形态和毒性。结果表明其中的35个再生后代在PDA平板上均匀扩展,形成典 型的核盘菌菌落,生长速度大于18 mm/d。在离体莴苣杆上,这些后代的培养物引起较大的 病斑。当它们同亲合性菌株Ep-1PNA183在PDA平板上接触时没有发现Ep-1PNA183菌落发生 异常变化,说明这些后代已失去了Ep-1PN的弱毒因子,恢复了正常核盘菌的特性。10个再生后代同Ep-1PN的生长及致病性等没有差异。其他的24个再生后代在菌丝生长速度、菌落形态和毒性等方面介于Ep-1PN和35个完全恢复的后代之间,因而是部分恢复的后代。这些后代的获得为进一步研究核盘菌弱毒现象的分子机理奠定了基础。     

不同地区向日葵核盘菌菌株的多样性研究

对来自我国不同地区的12个核盘菌菌株进行培养特性、菌核萌发及致病力的研究表明:各菌株在生长速度、菌丝扩展方向、菌核排列方式、菌核产量及致病力等方面存在着明显差异,这与各菌株的地理来源有一定的相关性,但亦有差异.来自新疆的12号菌株菌丝呈扇形扩展,生长速度最慢,菌核在培养基上零散分布,致病力最弱,不同于其它所有菌株.来自吉林和云南的菌株生长速度快,致病力强.各菌株的致病力与其生长速度趋于一致.对各菌株转代培养物及菌核后代的培养特性比较结果说明它们的分化特性是稳定的.以ITS1和ITS4为引物对12个菌株的rDNA ITS区进行了PCR扩增,4种限制性内切酶(AluI,HhaⅠ,MspI,HaeⅢ)酶切,结果表明各菌株间的酶切图谱基本相同,在供试的向日葵核盘菌菌株中不存在限制性酶切片段长度多态性.     

利用原生质体培养技术选育根霉新菌株1.根霉(Rhizopus formosaensis)Q303原生质体的形成和再生

把在ＹＰＧ液体培养其中震荡培养（１００ｒｐｍ）４－６ｈ的根霉孢子放入酶液（蜗牛酶２５ｍｇ／ｍｌ＋溶菌酶２０ｍｇ／ｍｌ＋Ｎｏｖｏｚｙｍ－２３４５ｍｇ／ｍｌ）内,在３０℃下震荡（１００ｒｐｍ）酶解３－４ｈ,原生质体形成率为５３．６％。     

油菜花瓣附生真菌区系及对核盘菌拮抗作用的研究

采集油菜不同部位脱落花瓣和未脱落花瓣进行附生真菌区系的分析,得到1908个菌株．除了核盘菌Sclerotinia sclerotiorum外,其他真菌经鉴定后主要属于10个属,它们是短梗霉属Aureubas／d／umspp．、镰刀菌属Fusarium spp．、交链孢菌属Alternaria spp．、葡萄孢属Botrytis spp．、黑葱花霉属Pericorda spp．、曲霉属Aspergillus spp．、黑孢属Nigrospora spp．、青霉属Peniccillium spp．、木霉属Trichoderma spp．和附球孢菌属Epicoccum spp．．其中,短梗霉菌、镰刀菌和交链孢菌为优势真菌群．通过菌丝间的相互作用、对峙培养方法测定160个菌株对核盘菌抑制作用．结果表明,供试菌株与核盘菌之间存在重寄生作用和溶菌作用等方面的拮抗机制．并初步筛选得到了一批拮抗作用较强、定殖能力也强的菌株．     

核盘菌不同水平抗药性菌株可溶性蛋白和酸酶的电泳图谱比较研究

为寻找到快捷有效的生理生化抗药性检测方法,对供试的6株对速克灵具有不同抗性水平的核盘菌进行了可溶性蛋白和酯酶的聚丙烯酰胺凝胶电泳谱带的试验研究。结果表明:不同抗性水平的菌株间蛋白质及酯酶图谱存在明显差异,中抗菌株与敏感菌株可溶性蛋白的主带基本一致,但中抗菌株的带数略多于敏感菌株,Rf=0.14,Rf=0.53两条带为中抗菌株所拥有,而敏感菌株不具有,高抗菌株的谱带数又显著少于敏感菌株,Rf=0.53的谱带为抗性菌株所特有。酯酶电泳图谱中敏感菌株与抗性菌株均存在特异性酶带,敏感菌株在Rf=0.20处有一条主酶带是抗性菌株所没有的,Rf=0.22的主酶带则为抗性菌株中所特有而敏感菌株没有的。因此,认为Rf=0.20的酯酶带与核盘菌的抗药性有一定相关性。     

农抗SH—62产生菌原生质体再生菌株的筛选和再生菌株R-4发酵规律的初步研究

本文报道了农抗SH—62产生菌原生质体再生菌株的筛选和再生菌株R—4的发酵规律。试验表明,通过摇瓶的初筛和复筛,从活性比出发菌株要强的202株再生菌株中,找出R—4、R—66和R—72三株活性最强而又稳定的再生菌株。在再生菌株R—4的发酵试验中,选出了该菌株的最佳发酵培养基为1号培养基,并证明这个菌株对溶氧量并不敏感,在偏碱条件下有利于生长和产素,发酵周期为72小时等最适发酵条件。     

球孢白僵菌原生质体获得和再生恢复培养条件的研究

对球孢白僵菌菌龄、β-巯基乙醇、溶壁酶、渗透压稳定剂和琼脂粉含量等条件对球孢白僵菌原生质体的获得和再生恢复培养的影响进行了研究,建立了球孢白僵菌原生质体获得和再生恢复培养的最佳体系。原生质体获得的最佳菌龄为培养24~28 h的菌丝体,最佳β-巯基乙醇浓度为0.01 mol/L,最佳酶为真菌溶壁酶,最佳渗透压稳定剂为0.7 mol/L NaCl,原生质体获得频率高达99%;原生质体再生恢复时培养基中最佳渗透压稳定剂为0.7 mol/L葡萄糖,最佳琼脂粉质量分数为0.75%,再生频率达57%。     

紫外光诱导核盘菌产生的抗速克灵突变菌株特性研究

核盘菌 (Sclerotiniasclerotiorum)经紫外光诱导照射容易产生对速克灵的抗性突变体。抗性突变体Wr- 4- 2在含速克灵 10 0 0mg/kg的PDA平板上 ,菌丝生长很少受到抑制 ,且气生菌丝茂密 ,形成菌核大而饱满 ;在无药PDA平板上其生长速率明显低于敏感菌株 ,菌核形成晚且少 ,但菌核大而饱满。接种黄瓜薄片测定其致病力 ,在无药情况下其致病力也明显低于敏感菌株 ,接种敏感菌株的黄瓜薄片 48h完全腐烂 ,接种突变菌株的黄瓜片病斑直径仅为 18 5mm。在 10 0 0mg/kg速克灵浸泡的黄瓜片上 ,敏感菌株受到完全抑制 ,突变菌株则基本不受抑制。Wr-4- 2对扑海因有高度交互抗性 ,但对福美双、百菌清、多菌灵的反应与敏感菌株相似。Wr- 4- 2在无药PDA平板上菌丝转移连续培养 2 0代后 ,其抗性不丧失     

1株降酚菌的原生质体制备和再生研究

为了优化组合降酚菌原生质体制备与再生的条件。以从合肥钢厂焦化废水处理池的活性污泥中驯化筛选得到1株高效降酚假单胞菌为材料,通过正交实验,探讨蔗糖浓度、溶菌酶浓度E、DTA浓度和酶解时间对该菌原生质体制备与再生的影响。原生质体制备与再生的最优条件:蔗糖浓度20%,溶菌酶浓度0.5 mg/ml,EDTA浓度0.2%,酶解时间40 min。在此条件下,它的菌株形成率为75.3%,再生率为7.8%。影响降酚假单胞菌原生质体形成率的因素顺序为蔗糖浓度>溶菌酶浓度>作用时间>EDTA浓度。     

大豆原生质体培养基的研究

本试验制成大豆未成熟子叶原生质体再生细胞分裂率高、能保持胚性状态并最终能分化成正常植株的培养基。试验发现,天冬酰胺、谷氨酰胺、尿囊素和尿囊酸等大豆根瘤形成的酰尿有机态氮是有效的主要氮源。     

大量诱导核盘菌产生子囊盘的方法改进

核盘菌（Sclerotiniasclerotiorum）引起包括油菜在内的多种经济作物的菌核病。为筛选抗菌核病的作物品种及探讨防治该病的其它途径,获得足够的子囊孢子是极其重要的技术环节。本研究对大量获得子囊盘的方法进行了改进。首先从158个单菌核分离物中筛选出了6个能够在高温（20℃）下直接形成子囊盘的核盘菌菌株。其次对形成菌核的温度条件、形成菌核的营养基质及菌核形成期等因于对子囊盘产生的影响进行了研究。结果表明所筛选的菌株在灭菌胡萝卜片上培育1个月即可产生大量的成熟菌核,这些菌核在20℃下保湿10－30d即可形成大量的子囊盘和子囊孢子。菌株Zxd－1的菌核最容易前发。试验还表明按这一程序获得的子囊孢子长出的菌丝能感染油菜,抗（耐）性品种（中油821）和感病品种（Westar）对接种体的反应表现出明显的差异。     

核盘菌转代培养后生理特性变异初探

来自向日葵上的核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de·Bary)菌株Sun-1P经多次转代培养及冰箱保存后对有机氮(牛肉汁、蛋白胨、酵母膏)及淀粉的利用能力发生了显著改变。其中转代株Sun-1M对有机氮的利用与pH值及速效糖(葡萄糖)的存在有关系。离体致病性测定表明:Sun-1M对油菜、莴苣、向日葵及蚕豆等寄主仍具有致病性。     

蛋白酶对曲霉原生质体稳定性再生及融合的影响

４种蛋白酶对黑曲霉，米曲霉原生质体稳定性，再生有主融合的研究结果表明，蛋白酶用于原生质体灭活前或后保温均显著降低原生体数量，同时提高原生质体再生率及灭活性原生质体融合指数。蛋白酶安全，无毒可以替代常规促融合剂聚乙二醇。     

小麦愈伤组织诱导及其再生能力影响因素的研究

以农艺性状较好的24份小麦品种(系)为材料，筛选出了愈伤组织诱导率高且植株再生能力强的基因型材料山农995604和F281—10，在此基础上对影响愈伤组织的分化能力以及较长时间保持分化能力的因素进行了研究。结果表明，在愈伤组织的继代过程中，保持较高浓度的2，4—D，或对愈伤组织进行交替继代培养有利于较长时间保持其再生能力。最佳取材时间在开花后15d左右，而对于在开花后25d取的大龄胚，若仅挑取盾片组织进行接种，也可以获得质量较高和再生能力较强的愈伤组织。     

生防细菌D93菌株在小麦根部定殖的研究

在限菌条件下通过琼脂平板播种和温室盆栽试验，用选择性培养基分离计数，研究了荧光假单胞菌遗传工程菌株Ｄ９３在小麦根部定殖的规律。Ｄ９３菌株在小麦根和根之间定殖数量没有显著差异。在单一条根上的定殖分布从根基到根尖逐渐直线下降。生物和非生物因素对Ｄ９３菌株定殖小麦根系有较大影响。     

红花槐愈伤组织诱导及植株再生的研究

以红花槐当年生幼嫩茎段为试验材料,研究了不同生长调节剂组合对红花槐愈伤组织诱导及分化的影响.结果表明:诱导愈伤组织的最佳培养基组合为MS+2.0mg/L NAA+1.0mg/L6-BA;愈伤组织分化的最佳培养基组合为MS+3.0mg/L6-BA;诱导生根的最佳培养基组合为MS+ 1.0 mg/L IBA.     

蒙古黄榆愈伤诱导及植株再生的初步研究

以蒙古黄榆无菌苗叶片与茎段为外植体,研究了不同生长调节剂组合对蒙古黄榆愈伤组织诱导及分化的影响,并获得了完整的再生植株.结果表明:最佳外植体为无菌苗叶片,诱导愈伤组织的最佳培养基组合为MS +2,4-D 1.5mg/L+6- BA 0.2mg/L;愈伤组织分化的最佳培养基组合为MS+IAA 5.0 mg/L+6-BA 1.0mg/L;诱导生根的最佳培养基组合为1/2MS+1.0 mg/L IBA.     

产几丁质酶链霉菌SO1菌株的筛选及培养条件

从土样中分离获得的链霉菌ＳＯ１菌株在产酶培养基中，２８℃振荡培养７天，其胞外几丁质酶活力可达１８０９ｕ／ｍｌ。实验表明，不同碳、氮源及诱导物对ＳＯ１菌株产几丁质酶有不同的影响，以酵母粉对产酶的促进作用最为明显，比对照提高了７５．２％。部分脱乙酰几丁质、胶体几丁质及几丁质均可作为ＳＯ１菌株产几丁质酶的诱导物，其中以几丁质诱导产酶的效果最好。