绵羊精子RNA提取方案的优化

为了减少绵羊精液中其他体细胞污染和裂解不充分等因素而导致精子RNA回收率低、质量差的问题,试验以新鲜的美利奴羊精液为研究对象,采用Percoll+hSOF和Percoll+PBS密度梯度离心法和PBS直接洗涤法纯化绵羊精液,然后再采用TRIzol(65℃)法和TRIzol(65℃)+试剂盒法提取绵羊精子RNA,检测RNA的浓度、纯度和完整性,将RNA反转录为cDNA,PCR扩增PRM1基因(编码鱼精蛋白1)和CDH1基因(编码上皮细胞钙黏蛋白),验证所提取的RNA是否受体细胞RNA和基因组污染。结果表明：用Percoll密度梯度法纯化绵羊精液较PBS直接洗涤法能更好地去除精液中的体细胞,但精子回收率低。Percoll+PBS密度梯度离心法纯化后精子提取的RNA较PBS直接洗涤法纯度较高,但浓度较低;TRIzol(65℃)法提取的精子RNA较TRIzol(65℃)+试剂盒法浓度较高,但纯度较低。两种精液纯化方法(Percoll+PBS密度梯度离心法和PBS直接洗涤法)结合两种精子RNA提取方法[TRIzol(65℃)法和TRIzol(65℃)+试剂盒法]获得的精子RNA均能检测到PRM1...     

不同解冻液对精子呼吸强度的影响

呼吸是精子重要的生命现象之一。当精液中有氧存在时精子就通过呼吸,氧化代谢精液中可以利用的营养物质。本试验测定了4种不同解冻液所解冻公牛冻精中精子的耗氧量,结果表明,不同解冻液对精子的呼吸强度有显著影响。一、材料与方法 (一)解冻液的组成见《中国奶牛》,1991年,第4期。 (二)精液山西省家畜精液冷冻中心HB63号公牛颗粒冻精。     

哺乳动物精子顶体蛋白的研究进展

为了预测雄畜的繁殖力,常规的精液分析仅仅凭借精子浓度、运动力和形态等参数,然而试验结果显示这些质量参数有局限性,而不能用作评价精子能力的可靠预测值。评价精子功能的试验包括ATP的含量测定,子宫颈黏膜穿过,精子透明带穿过,顶体膜完整性以及顶体蛋白测定等。通常,这些精子功能测试费时或需要特殊的设备,限制了临床和牧场的应用。试验证明,透明带是精子顶体蛋白自然的底物,纯净的顶体蛋白能消化哺乳动物的透明带,此外抗顶体蛋白单克隆抗体能抑制受精。顶体蛋白活性普遍地用作预测受精,而且顶体蛋白活性不能由其他的精液特征值预测。…     

用滴压制片法检查公牛的精子顶体

在人工授精或公牛不育的检查中,常忽略精子顶体的检查。实践证明,仅凭常规的精子活力检查不能完全反映公牛的健康状态和生殖能力。国外有人试验认为“公牛生殖力的降低与精子的形态学缺陷有关:精子顶体形态异常与不育有关”。由于精子顶体在精子与卵子的受精过程极端重要,其内含有崩解卵丘细胞和使精子穿过卵子透明带的物质。精子顶体异常,除了公畜异常的生理情况以外,也常发生在制作精液过程和冷冻保存的损伤,而且还发生于因检查精子顶体在操作中的理、化学损伤。后一种损伤影响了检查精子顶体完整率的准确性。故此,在检查技术上如何减少顶体的损伤,这是值得研究的问题。近年,我们试用滴压精液制片法检查公牛的精子顶体,并用一般的精液涂片染色法作对照,相比,滴压法顶     

公牛精子对自体血清的反应与母牛受胎效果

母牛授精效果不好,原因很多。其中一个原因是种公牛体内存在着不可预测的自体免疫现象。但要查出这种公牛是困难的,因为这种公牛的精子活力临床变化不明显。本文介绍用精子沉降法查明公牛血清中自体免疫体与公牛精子的关系和精子沉降反应与母牛授精效果的关系。为了试验,采取了116头公牛的正常血清,灭菌后用1%的Nacl溶液做2、4、8、16倍稀释(倍倍稀释),各取0.1毫升放在滴定板(凝集板)凹槽里,分别加0.1毫升稀释     

种公牛睾丸周径大小与精液品质相关性的研究

公牛的睾丸大小对其繁殖力有十分重要的影响。本试验以青海省家畜改良中心13头荷斯坦和20头西门塔尔种公牛24月龄、36月龄睾丸周径实际测定数据为基础,分析研究种公牛睾丸周径大小与精液品质的相关关系。统计结果表明,荷斯坦种公牛阴囊周径与精液密度的相关系数r=0.835(P0.01);与射精量的相关系数r=0.569(P0.05);与精子活率的相关系r=0.900(P0.01);而西门塔尔种公牛阴囊周径与精液密度的相关系数r=0.745(P0.01);与射精量的相关系数r=0.360(P0.05);与精子活率的相关系r=0.041(P0.05);荷斯坦与西门塔尔两个不同品种间睾丸周径大小有差异但不显著(P=0.647;P0.05)。研究表明种公牛睾丸周径越长且质地坚硬,弹性越好,精子的产量就越高,精液品质就越好;睾丸过小的公牛不但精子产量低,而且精液品质也差。     

牛冷冻精液的制作程序

1采精与精液品质检查按照牛冷冻精液国家标准的要求选择公牛,并检疫无病。采得的精液,精子活率不低于0.6,精子密度不低于8亿/毫升,精子畸形率不超过15%。2精液的稀释用牛冷冻精液稀释液,以原精液的活率和密度确定稀释的比例。按国家标准,以解冻后每个输精剂     

对数曲线回归在光电比色计测定水牛精子密度中的应用

<正> 为了快速而准确地完成多样本精液的精子密度测定,本文作者取用贵州省家畜冷冻精液站饲养的7头摩拉水公牛共30头次新鲜精液样品作研究材料。在每一份精液样品中,取0.1毫升原精加入4.9毫升3％二水柠檬酸钠液中并混均。用国产581—G型光电比色计比色,记录其透光度。同时再取该样品精液用标准血球计数板按常规测定精子密度。每一份精液样品均以重复计测两次的平均数(变异系数在10％以下)代表该样品精液的一次透光度或精子密度计测值。     

南阳黄牛种公牛精液品质观察报告

南阳地区冷冻精液中心站于1979年开始生产南阳黄牛颗粒冷冻精液。先后对七头种公牛进行了精液品质观察,共采精609次,冻结412次。种公牛体况中等,精液品质中上等。观察项目有:一、精液品质基本指标根据七头种公牛412批次统计:射精量在1—9.2毫升范围内,精子活率0.6—0.8,精子密度6—10.4亿/毫升,pH 值在6.2—6.5之间,异态精子率一般在15%以下,精液的色泽呈乳白、淡黄、淡白三种,详见表1,不同月份气温对精液品质影响见表2。     

处女猪离体子宫内培养的猪和山羊精子的形态学变化

取猪和奶山羊精液经 m-KRB 液10倍稀释,离心洗涤二次,在浓缩精液中加入2毫升m-KRB 液。取一部分稀释精液在 CO_2培养装置内培养五小时后,经离心作电镜观察。另一部分精液,注入到处女猪离体子宫内,浸没在37℃生理盐水中亦经五小时后,用 m-KRB液10毫升冲洗出精子作电镜观察。在 m-KRB 液中培养的猪精子和刚射出的精子相比较,形态上无差异。而在离体猪子宫内培养的猪和乳山羊精子,在顶体头帽部出     

精子平衡后活率变化对冷冻效果的影响

通过对7头公牛146次的采精冷冻,观察精子平衡后活率变化对冷冻效果的影响。稀释液配制12%蔗糖水75毫升,甘油5毫升,卵黄20毫升,青链霉素各10万单位。采精后即对原精液作1:3稀释,于5℃冰箱中平衡4小时,在聚四氟乙烯塑料板上冷冻颗粒,剂量为0.1毫升。用刚果红染色法计算原精液、平衡后、解冻后精子活率及计算冻后复苏率。根据精子     

黑白花公牛精液冷冻过程中精子顶体和精清内酶的变化

目前在生产实际中,精液品质的评定方法主要采用的是检查活力、密度、外观等.Pelge等(1957)发现了精子活力与受胎率呈正相关。但有些精液冷冻后精子活力虽不低,而受胎率较低,这引起了对体外精液保存过程中精子形态结构和生化变化的研究。本试验的目的是研究黑白花公牛精液冷冻过程中精子顶体和精清内谷草转氨酶 GOT 和乳酸脱氢酶 LDH 的变化,为黑白花公牛精液品质的评定指标提供某些依据。     

顶体反应进程对公猪精液体外受精最佳精卵比的影响

精液质量参数相似公猪获得相同体外受精(in vitro fertilization,IVF)效果时所需精卵比不同的原因。常规方法鉴定公猪精液质量参数,以不同精卵比进行体外受精并确定不同公猪精液体外受精时的最佳精卵比,分别检测了各公猪精子结合透明带能力、获能及顶体反应状况。3头试验用公猪(A、B和C)精液在精子密度、活率、活力和畸形精子率上无显著差异(P0.05),17℃保存3 d内精子的活率在三者间无差异(P0.05)。3头公猪精液在IVF中达到最佳受精效率时所需的精卵比分别为500∶1、1 000∶1和200∶1。精子结合透明带能力和获能进程检测显示三者无显著差异(P0.05),但顶体反应进程检测显示三者间具有显著差异(P0.05)。顶体反应进程差异是导致相似精液质量精液之间在IVF中最佳精卵比不同的主要原因。     

牛精清抑制物含量及其与精液品质,年龄和季节之间的关系

利用抗补体法测定成年公牛精清抑制物(BSPI)的含量,以研究BSPI与精液品质、公牛年龄和季节之间的关系。结果麦明,BSPI的平均含量为696±256单位(u)/ml(n=75),不同公牛存在明显的个体差异。BSPI含量与新鲜精液的精子活力无关。公牛射精量与BSPI含量呈负相关(r=-0.9163,P<0.05)。冬季BSPI含量明显高于夏季(P<0.001)。试验未发现公牛年龄和精子密度与BSPI含量之间的相关。     

磁场对低温保存牛精液的影响

将采得的13头公牛新鲜精液三倍稀释后,取10毫升分为五组,每组2毫升。四组分别放入磁化杯中磁化处理2、5、24小时及一直处于磁化状态中,另一组不经磁处理为对照组。五组均放入0—5℃的冰箱中保存。观察磁化对精子活率、顶体完整率及存活时间的影响。试验结果经磁化后精子活率下降缓慢,存活时间延长,但精子的顶体完整率下降。     

用精子进入宫颈粘液深度评定公牛繁殖力

对人工授精用公牛精液质量多数人工授精站只是由有经验的技术员对最重要的精液指标——活力——作主观评定。但是用这种方法评价公牛繁殖力的结果不一定可靠。作者研究了两种指标对精液质量进行客观评定:①精子在     

冷冻对种公牛精子损伤的观察与研究

本试验对种公牛新鲜精液和冷冻精液的精子质膜、顶体完整性、线粒体活性、DNA损伤程度以及精子的运动能力等进行检测,比较其差异。结果显示,精液冷冻后含有高能线粒体精子比例为20.1%,质膜完整率为49.8%,显著低于新鲜精子(45.5%,89.7%)。发现采用计算机辅助分析系统(CASA)可以准确客观地对精子运动能力进行检测。结果表明,冷冻会对精子造成损伤,尤其是损伤精子的质膜和线粒体。     

双峰驼排卵机制的研究——Ⅱ.精液的诱导排卵作用

双峰驼的排卵主要是由精液中的精清诱导发生的,阴道输入洗过的精子没有引起排卵。输精后是否排卵,和公驼精液的诱导作用及母驼个体的生理状况有关,排卵率约为86%。输精后的排卵时间与本交后的排卵时间一致。以2号公驼为例,精液1毫升能够诱导母驼排卵,但0.5毫升未引起排卵。精清中的诱导排卵物质能够耐受长期冰冻保存。公牛精液中也可能存在类似物质。肌肉注射 LH、LHRH 类似物及 HCG 能够引起排卵,但肌注及阴道输入 PGF_(2α)类似物后未排卵。     

利用-79℃冻结公牛精液为发情母牛输精的经验

在进行公马精液低温冷冻试验的同时,为解决本所母牛配种和公牛精液长期贮存问题,利用固体二氧化碳(干冰)冻结了一部分公牛精液。解冻后的精子活力达50%以上,占原精液的活力70%以上。应用冻结的精液为本所母牛输精,已有一头怀胎。今后本所母牛发情,将全部应用低温冻结的精液输精。     

不同剂型的种公牛冷冻精液质量检测结果分析

分析不同剂型的种公牛冷冻精液质量检测结果。选择20头公牛作为研究对象,根据冷冻精液方式的不同把20头公牛精液随机均分为两组,一组为对照组选择10头公牛精液进行颗粒冷冻,另一组为观察组选择10头公牛精液进行细管冷冻。根据公牛冷冻精液的质量标准,对两组公牛精液质量指标进行对比分析,分析两组公牛精液冷冻后的活力和精子有效数、精子畸形率及精子存活时间等。观察组与对照组公牛精液按照不同剂型冷冻后,精液质量存在很大差异,观察组精液冷冻的方式明显优于对照组,两组对比差异明显,具有统计学意义(P0.05)。观察组选择细管冷冻的方式更适用于实际工作中,为细管冷冻精液实践工作中提供重要的参考依据。