柞蚕凝集素ApIML基因的克隆与表达

在昆虫的免疫防御系统中,凝集素介导的免疫反应起着重要作用。本文克隆了柞蚕凝集素蛋白基因ApIML,序列分析表明：ApIML含有927bp的开放阅读框,编码309个氨基酸。柞蚕凝集素属于分泌型蛋白质,N端有21个氨基酸组成的信号肽,含有2个糖识别结构域。系统进化分析显示ApIML与二化螟Cs-1属于同一个分支,序列相似度为70.16%。构建了ET28a-ApIML原核表达载体,经SDS-PAGE检测发现蛋白在BL21(DE3)中成功表达,并且在Ca²⁺存在时对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有凝集作用。     

大豆凝集素的分离纯化和血凝活性研究

大豆种子经过浸提、离心、硫酸铵逐级沉淀和D-半乳糖-Epoxy-Sepharosc-4B亲和层析,获得单一的大豆凝集素（Soybean agglutinin SBA）样品。纯化的大豆凝集素经pH8．9的聚丙烯酰胺凝胶电泳（胶浓度7．5％）,可以显示一条清晰的着色带。在血凝活性鉴定中,采用2％兔细胞悬液,测定凝集红细胞的能力和检测它们与糖结合后对红细胞的凝集作用的影响。结果表明,使兔红细胞50%凝集的蛋白质最低浓度为4μg／mL左右。浓度为0．1mg／ml凝集素溶液分别与D-半乳糖、D-氨基半乳糖、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）、a-乳糖、几丁质溶液结合后,使兔红细胞50％凝集的糖配体溶液浓度分别为1mg／ml、2．5mg／ml、10mg／ml、30mg／ml,而几丁质几乎对SBA没有影响。     

大豆凝集素的分离纯化和血凝活性研究

大豆种子经过浸提、离心、硫酸铵逐级沉淀和D-半乳糖-Epoxy-Sepharose-4B亲和层析,获得单一的大豆凝集素(Soybean agglutinin SBA)样品。纯化的大豆凝集素经pH8.9的聚丙烯酰胺凝胶电泳(胶浓度7.5%),可以显示一条清晰的着色带。在血凝活性鉴定中,采用2%兔细胞悬液,测定凝集红细胞的能力和检测它们与糖结合后对红细胞的凝集作用的影响。结果表明,使兔红细胞50%凝集的蛋白质最低浓度为4μg/mL左右。浓度为0.1mg/ml凝集素溶液分别与D-半乳糖、D-氨基半乳糖、异丙基--βD-硫代半乳糖苷(IPTG)、а—乳糖、几丁质溶液结合后,使兔红细胞50%凝集的糖配体溶液浓度分别为1mg/ml、2.5mg/ml、10mg/ml3、0 mg/ml,而几丁质几乎对SBA没有影响。     

长白猪甘露聚糖结合凝集素的分离纯化

对猪血清用PEG-6000进行预处理后,用甘露聚糖结合凝集素-Sepharose4B亲和柱亲和层析,获得纯化的猪MBL样品.然后进行还原性的10%SDS-PAGE电泳,测定分子量与纯度.得到纯化的猪血清MBL分子有3种单体,分子量分别为33kDa、36kDa和56kDa.表明猪血清中MBL是以多聚体形式存在,而且具有糖基化位点.本研究为进一步研究猪MBL的生物学特性提供了基础.     

半乳糖结合凝集素的结构与功能

凝集素是自然界广泛存在的一大类糖结合蛋白 ,半乳糖结合凝集素 ( galectin)是凝集素家族中的一员 ,存在于多种生物、多种组织内 ,且进化保守 ,发挥着广泛的功能 ,参与细胞粘附、凋亡及免疫反应等多种生物学过程。目前 ,国内外对凝集素的研究日益增多 ,文章以哺乳动物的 galectin为重点 ,综述了 galectin的结构特性、配体、分泌方式和生物学功能等各方面的研究现状 ,为进一步了解和研究 galectin提供了参考     

鸡甘露聚糖结合凝集素的分离纯化及初步鉴定

本研究采用CNBr活化的Sepharose 4B亲和柱进行亲和层析,从鸡血清中分离纯化甘露聚糖结合凝集素（MBL）,并采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）方法测定其分子质量和构型。电泳图谱显示,在分子质量为33ku-34ku处出现两条带,表明鸡MBL具有多聚体形式。研究结果为进一步深入研究禽类MBL分子的特性奠定了基础。     

纯化的大豆凝集素对大鼠内脏器官发育与免疫功能的影响

试验的目的是研究日粮中不同水平的大豆凝集素(SBA)对大鼠免疫功能的影响。选取30只19日龄断奶的SD雄性大鼠,随机分配到5个日粮处理组中。5个处理组大鼠均采食以玉米淀粉酪蛋白为基础的日粮,每只大鼠均供给7g/d日粮和充足清水,试验进行20d。试验中大鼠的平均初始体重为(77.8±2.6)g,5个处理组的日粮SBA水平分别为0(对照组)、0.5、1.0、1.5mg/g和2.0mg/g。结果表明:日粮中添加SBA,大鼠日增重下降(P<0.01),淋巴细胞刺激指数和细胞因子浓度均下降(P<0.05),另外血浆免疫球蛋白水平也明显下降(P<0.05)。表明日粮添加纯化SBA能够影响大鼠生长性能,并能够影响大鼠的细胞免疫功能和体液免疫功能。     

绵羊子宫内膜的凝集素结合特性

用５种酶标植物凝集素（ｃｏｎＡ，ＳＢＡ，ＷＧＡ，ＵＥＡ，ＲＣＡ）作探针，研究了间情期和妊娠期绵羊子宫内膜上皮和间质糖复合物的变化。与间情期相比，妊娠期子宫内膜上皮ＣｏｎＡ和ＷＧＡ染色明显增强，特别是ＵＥＡ染色由阴性转变为强阳性，ＳＢＡ染色没有明显变化。在间质石ＢＡ和ＵＥＡ染色由阴性转变为中阳性，而ＣｏｎＡ和ＷＧＡ染色无明显变化。无论间情期或妊娠期，子宫内膜上皮和间质的ＲＣＡ染色均为阴性。子宫内膜上皮和间质糖复合物质和量的变化，可能与子宫各部功能和妊娠有关。     

轮状病毒VP4基因的原核表达、蛋白纯化及动物免疫试验

在大肠埃希菌中表达并纯化了轮状病毒SA11株的外壳蛋白VP4,并测定了该纯化产物免疫豚鼠后的中和抗体滴度。结果表明,轮状病毒VP4主要以包涵体的形式存在,利用阴离子交换层析纯化后,VP4纯度为80%,与弗氏佐剂混合接种豚鼠后,所产生的中和抗体效价为1∶500。     

野猪甘露聚糖结合凝集素的分离纯化及其多克隆抗体的制备

对野猪血清样品用溴化氰活化的甘露聚糖结合凝集素-Sepharose4B亲和柱亲和层析,获得纯化的野猪MBL样品,再进行SDS-PAGE电泳,显示有1条32kDa主带,2条36kDa和56kDa副带。选取32kDa的蛋白带制备免疫原,免疫家兔制备抗血清,Western blot方法鉴定该抗体可以特异性识别野猪血清中的MBL分子。本研究表明采用亲和层析法可以获得野猪血清中MBL-A分子,制备的多克隆抗体可以用于检测天然MBL分子,将为野猪MBL的生物学特性及与抗病力相关性的研究提供基础。     

兔小肠组织大豆凝集素特异性结合蛋白分布的研究

本实验采用凝集素组织化学染色技术,以生物素标记的大豆凝集素为探针,研究了大豆凝集素特异性结合蛋白在兔的十二指肠,空肠,回肠的分布规律。结果表明大豆凝集素特异性结合位点主要分布在小肠上皮柱状细胞,杯状细胞和少量淋巴细胞上。兔肠道各部的分布规律呈如下趋势:各部阳性细胞类型主要为柱状上皮细胞,杯状细胞仅在空肠有着色;阳性区面积表现为:在空肠特别是空肠前段最深,十二指肠、回肠较浅。     

血清中不同甘露(聚)糖结合凝集素浓度的绵羊感染绵羊肺炎支原体后免疫因子表达的变化

为研究中国美利奴羊不同甘露(聚)糖结合凝集素(MBL)浓度感染绵羊肺炎支原体(MO)的免疫因子水平变化,本研究选择血清中MBL高、低浓度的绵羊各6只(感染组和对照组各3只),感染组人工感染MO,分别在人工感染前和感染后不同时间,采用荧光定量PCR法检测血液中血清因子及补体表达水平。结果显示,不同MBL浓度的绵羊人工感染后MBL m RNA水平呈下降趋势,MBL高浓度促炎因子IL-2和IFN-γ的m RNA表达水平较高,抗炎因子IL-4的m RNA表达水平在感染后1 d升高,此后开始下降,而IL-4的m RNA水平在14 d后有所升高;MBL低浓度羊感染后其TNF-α的m RNA水平显著升高,随炎症的缓解,逐渐降低;补体C1和C3的m RNA在感染后表现出不同的变化,MO感染可以激活补体途径。本研究结果表明,低血清MBL浓度与绵羊支原体肺炎具有一定的相关性,MBL不同浓度组之间其IL-2、IL-4、TNF-α、IFN-γ、补体C1、C3水平存在差异,低浓度MBL的绵羊更易发生比较严重的炎症反应。     

甘露糖结合凝集素基因的研究进展

疾病是影响畜牧业生产的主要因素，虽然传统的疾病控制方法对疾病的预防和治疗起到了重要作用，但随着分子生物学和基因工程技术的发展，分析在抗性和易感群体中候选基因的标记等位基因频率差异，结合遗传育种技术，提高家畜的抗病性与健康水平已成为当今提高家畜生产水平的重要途径。甘露糖结合凝集素（mannan-binding lectins，MBL）是构成人和动物血清补体凝集素途径的主要成分，在先天免疫过程中起重要作用。笔者简述了MBL的分布、结构、功能，介绍了MBL基因与抗病力的关系，对其作为家畜抗病育种遗传标记的应用前景进行了展望。期望MBL作为遗传标记，通过标记辅助选择进行抗病育种可以培育出抗病力强的家畜品种。     

猪甘露聚糖结合凝集素的研究进展

猪甘露聚糖结合凝集素作为猪机体重要的天然免疫因子,在抗感染机制中发挥重要的作用。本文对猪甘露聚糖结合凝集素的遗传特性,生物学作用及与疾病发生的相关性等几个方面的研究进行了概括总结。     

板蓝根凝集素的分离及其对小鼠免疫功能的影响

采用丙酮盐溶液及硫酸铵分级沉淀法对生药板蓝根进行凝集素的粗提,并对其部分性质进行了研究.结果表明,在pH 8和NaCl浓度为0.6 mol/L时提取的凝集效果最好,20%硫酸铵分级沉淀凝集最多;丙酮盐溶液的可溶性糖含量和还原性糖含量分别是20.45%和3.40%;硫酸铵提取物的可溶性糖含量为0.03%,但还原性糖含量很低;丙酮提取液组小鼠巨噬细胞的吞噬指数和吞噬百分率明显高于对照组.     

布鲁菌BMEI1829基因的原核表达、蛋白纯化及动物免疫试验

利用PSORTb及CELLO生物学软件对布鲁菌16M菌株基因组序列进行分析,预测其外膜蛋白基因序列;选取BMEI1829基因进行PCR扩增并与原核表达载体pET32a(+)连接,转入E.coliBL21(DE3)感受态细胞;IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE分析及Western blot鉴定目的蛋白的表达;经His-TrapTMHP纯化,免疫Balb/c小鼠,间接ELISA法检测特异性抗体。结果表明,BMEI1829蛋白在原核表达系统中成功表达,纯化后蛋白免疫Balb/c小鼠可产生特异性抗体,抗体亚型分布以IgG1、IgG2b为主,为进一步研究其功能奠定了基础。     

犬弓首蛔虫C型凝集素4的原核表达及组织定位

旨在探讨犬弓首蛔虫(Toxocara canis,T.canis)C型凝集素4(C-type lectin 4,C-TL-4)的基因特征,并对其组织分布进行研究。根据Tc-ctl-4的基因组数据(GenBank:AF126830.1),以T.canis为模板对Tc-ctl-4全长基因进行扩增,并进行序列分析和多重序列比对;构建Tc-ctl-4/pCold TF原核表达载体,对重组蛋白进行纯化并制备多克隆抗体;同时采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和间接免疫荧光组化检测Tc-ctl-4基因的转录水平和Tc-CTL-4的组织分布。结果显示,Tc-ctl-4基因的全长序列为842 bp,共编码280个氨基酸,多重序列比对显示,犬弓首蛔虫和猫弓首蛔虫的C型凝集素均含有高度保守的CTLD结构域;SDS-PAGE检测发现重组蛋白Tc-CTL-4的大小约为86 ku,以可溶性形式表达;利用Ni-NTA亲和层析柱纯化蛋白,以500 mmol·L^-1咪唑进行洗脱时可获得高纯度的目的蛋白;将纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔制...     

在传染病中胶原凝集素和其他猪先天免疫基因的单核苷酸多态性

许多不同的表面受体和可溶解的蛋白作用在先天免疫识别抗原与之结合、补体活化、吞噬作用以及适应性免疫之前。甘露聚糖结合凝集素（MBLs）,纤维胶凝蛋白（FCNs）和表面活性蛋白-A（SP—A）都是可溶胶原凝集素,这些凝集素联接不同细菌、病毒和霉菌的表面结构蛋白。     

野猪甘露聚糖结合凝集素A基因的克隆及其生物信息学分析

根据GenBank上已发表的猪甘露聚糖结合凝集素A基因序列,设计一对特异性引物,通过RT—PCR法成功地从野猪肝脏中克隆到MBL-A基因序列。该克隆基因全长为875bp,包含MBL—A的完整开放阅读框。同源性分析显示野猪MBL—A基因与家猪核苷酸序列同源性在99％,推导的氨基酸序列同源性为100％：与其他哺乳动物相比核苷酸序列同源性在73％。83％之间,推导的氨基酸序列同源性在60％～81％之间。