解淀粉芽孢杆菌LJ1诱导黄瓜抗白粉病的研究

解淀粉芽孢杆菌LJ1是从土壤中分离得到的一株对黄瓜白粉病具有较好防效的生防细菌。田间试验发现,用LJ1发酵上清100倍稀释液喷施黄瓜幼苗,在施药后14 d时其对黄瓜白粉病的防效可达83.45%。为研究LJ1防治病害的作用机制,用LJ1发酵上清100倍稀释液喷施黄瓜幼苗,测定黄瓜叶片中的超氧化物歧化酶(SOD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)等与诱导抗病性相关的酶活性和信号分子水杨酸含量的变化,并检测了苗期根围土壤中真菌的动态。结果显示,经过LJ1发酵液处理后3种酶的活性和水杨酸的含量在不同时间点均有一个骤增的过程,其活性显著高于对照,并且7 d后土壤中的可培养真菌数量急剧减少。说明LJ1发酵液中有诱导黄瓜产生抗病性的物质,并且诱导后分泌的抗性物质对真菌具有广谱性。     

杧果炭疽菌拮抗细菌的筛选鉴定及其防病效果

为寻找对杧果炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides有效的生防菌株,从瓜叶白粉病病斑上分离得到104株细菌,通过平板对峙培养筛选出16株拮抗细菌,分别测定其在8种不同培养基中的抑菌活性,筛选出有较强抑菌作用的9A、26A和4N菌株进行室内、果园防病试验,并对具有较好防治作用的9A、26A菌株进行了鉴定。结果显示,拮抗菌9A、26A和4N分别在南瓜汁、红薯汁和马铃薯汁培养基上的抑菌活性最高,对杧果炭疽菌菌丝生长抑制率分别为88.83%、87.83%和85.87%;室内9A、26A和4N菌株菌液处理离体果实,24 h后接种炭疽菌分生孢子液,对杧果炭疽病的防治效果均达100%,与咪鲜胺对照组相同;在果园9A和26A的防病效果分别为98.4%和90.5%,显著高于对照组的防效78.8%,而4N的防效只有58.2%。根据形态、生理生化特征及16S rDNA 序列分析结果,将菌株9A和26A鉴定为枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis。研究表明,菌株9A和26A具有较好的生防利用价值。     

四硫代碳酸钠对蔬菜根病的防治效果及对土壤生物学性状的影响

为明确四硫代碳酸钠(sodium tetrathiocarbonate,STTC)在蔬菜根病防治上的应用价值及制定应用技术,本研究通过室内瓶土熏蒸法,进行了STTC对病菌的室内毒力测定;用温室盆栽法,进行植前熏蒸处理,测定土壤中病菌数量的变化和对病害的防效,同时进行植后熏蒸处理,测定药剂处理点和根际处病菌数量的变化;通过土壤施药后随即移栽幼苗的方法,评价药剂对蔬菜幼苗的安全性;通过室内模拟田间熏蒸条件,测定药剂不同浓度和熏蒸时间对土壤中主要微生物类群数量和主要土壤酶活性的影响。结果显示STTC对辣椒疫霉病菌Phytophthora capsici、黄瓜枯萎病菌Fusarium oxysporumf.sp.cucumerinum、茄子黄萎病菌Verticillium dahliae、番茄立枯病菌Rhizoctonia solani和蔬菜菌核病菌Sclerotinia sclerotiorum均有较好的杀灭活性,LD50分别为3.956、4.241、5.222、5.457和6.197mg/kg;80g/m2 STTC移植前处理对辣椒疫霉病和黄瓜枯萎病的防效可分别达到91.01%和82.51%;浓度低于900μg/mL的STTC对当日熏蒸后移栽的3叶期辣椒、黄瓜、番茄、白菜和油菜幼苗均表现安全;在辣椒和黄瓜生长期穴施1 200μg/mL STTC能有效减少土壤中辣椒疫霉病菌和黄瓜枯萎病菌的数量;土壤中微生物类群数量监测结果表明,在0.1~50.0μg/g浓度范围内,STTC对土壤真菌有强烈抑制作用,对土壤细菌和放线菌为先抑制后促进。对土壤酶活性测定结果表明,当STTC用量为0.1、1.0、5.0、10.0和50.0μg/g时,对土壤脲酶和蔗糖酶的活性表现为先抑制后促进,对蛋白酶的活性表现为在STTC低浓度时活性增加,高浓度时为先抑制后增加。综合结果表明,STTC用于经济作物生产中的土壤熏蒸具有安全、有效和施用简便的特点,或可广泛使用。     

柑橘内生细菌YS45的鉴定、抗菌物质分析及其对油菜菌核病的防治作用

 从柑橘枝条中分离到26株对油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)具有拮抗作用的内生细菌,其中YS45菌株的拮抗活性最强。16S rRNA基因序列分析及形态学和生理生化鉴定结果表明YS45菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。高效液相色谱及质谱分析结果显示其主要的抑菌活性物质为一组fengycin同系物,包括fengycins A、fengycins B和一种稀少fengycin类型化合物。油菜离体叶片接种试验中,YS45菌株发酵液对油菜菌核病的防效在70%以上,与五氯硝基苯相当;田间小区接种试验表明,YS45菌株发酵液对油菜菌核病的防效也在50%以上。     

芦苇内生真菌Choiromyces aboriginum Mü1w1c6的拮抗作用及其生物防治潜力

Choiromyces aboriginum Mü1w1c6是一株分离自芦苇的拮抗内生真菌。通过离体平板对峙培养检测和光学、电子显微镜观察,以及测定在活体植物上的拮抗活性,研究芦苇内生真菌Choiromyces aboriginum Mü1w1c6与病原菌及其寄主植物黄瓜之间的相互作用。对峙培养显示出较强的营养和空间竞争能力,对病原菌菌丝生长抑制率多高于60％,对立枯丝核菌Rhizoctonia solani的抑制率达到100%。显微观察证明它与多种病原菌有缠绕等重寄生现象。在互作研究中,C.aboriginum Mü1w1c6可成功定殖于黄瓜苗的根部,预先接种能有效抑制瓜果腐霉Pythium aphanidermatum在黄瓜根部组织细胞内的扩展和定殖,对P.aphanidermatum引起的黄瓜苗期猝倒病有良好的防效,接种一次内生菌防治效果为44.29%,接种两次生防效果高达88.49%。结果表明,C.aboriginum Mü1w1c6对多种植物病原真菌具有广谱的拮抗活性,对黄瓜苗期猝倒病具有较好的生防潜力。     

BSH-4菌株对黄瓜菌核病的防治作用及其鉴定

 从日光温室黄瓜根际土壤中分离获得1株拮抗细菌菌株BSH-4。采用平板对峙法结合显微镜观察确定BSH-4对黄瓜菌核病病菌具有较强的抑制作用,导致菌丝粗大、弯曲,菌丝体内原生质褐化、聚集,并延迟菌核形成的时间。BSH-4发酵液对离体叶片接种引起的黄瓜菌核病防效为81.6%,盆栽土壤接种防效为68.3%;对田间发病茎秆治愈率为74.4%,明显优于对照药剂菌核净,且对种子出苗率无影响,对瓜苗有促长作用。经形态特性观察,生理生化鉴定及16S rDNA序列分析,初步确定该菌株为短小芽孢杆菌Bacillus pumilus。     

拟康氏木霉菌剂对黄瓜幼苗生长、抗氧化系统及枯萎病防效的影响

于2019年5—8月采用前期筛选出的对黄瓜枯萎病菌有较好拮抗作用的拟康氏木霉Trichoderma pseudokoningii 886菌株，通过盆栽实验，测定不同菌剂施用量对黄瓜幼苗生长、抗氧化系统以及对黄瓜枯萎病防效的影响。结果表明：拟康氏木霉不同施用量均能提高对黄瓜枯萎病的防效，其中10⁵ cfu·g^-1拟康氏木霉厚垣孢子菌剂应用效果最好，对黄瓜枯萎病的防效达到83.98%；与CK（只接种病原菌）相比，拟康氏木霉不同施用量均能提高黄瓜幼苗株高、茎粗、叶面积、根体积、根冠比和壮苗指数，其中10⁵ cfu·g^-1拟康氏木霉厚垣孢子菌剂对黄瓜幼苗形态建成的促进效果最好；拟康氏木霉不同施用量均能提高瓜幼苗叶片中CAT、POD、SOD、APX、PPO活性和Pro含量，降低叶片中的MDA含量和质膜透性，其中10⁵ cfu·g^-1拟康氏木霉厚垣孢子菌剂对黄瓜幼苗抗氧化系统促进效果最好；在播种后30 d，黄瓜幼苗叶片中CAT、POD、SOD、APX、PPO活性和Pro含量分别比CK提高了119.96%、213.75%、139.29%、97.53%、101.15%、70.38%，相对电导率、MDA含量则分别比CK下降了46.10%、60.28%。研究表明拟康氏木霉886厚垣孢子菌剂通过提高黄瓜幼苗抗氧化系统能力，促进了幼苗形态建成，提高了对黄瓜枯萎病的防治效果。     

甲氧基丙烯酸酯类新化合物ZJ1621的生物活性

对由国家南方农药创制中心浙江基地合成的甲氧基丙烯酸酯类新化合物ZJ1621(2- -3-甲氧基丙烯酸甲酯)进行了温室杀菌活性及田间防效的研究。温室及田间药效试验结果表明:在100 mg/L 剂量下,该化合物能有效防治小麦白粉病、黄瓜白粉病、黄瓜霜霉病等多种植物病害,防效在80％以上。该化合物在植株叶片之间不具有内吸传导性,但持效期可达14 d 以上,在25~200 mg/L剂量范围内对试验作物安全。     

水稻纹枯病生防内生菌糖蜜草固氮螺菌的分离与鉴定

 本文首先对砂仁内生细菌进行分离,以水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)为靶标菌对获得菌株进行离体拮抗活性、盆栽及田间试验测定。结果表明：获得的27株内生细菌中有4株具有较好的离体抑菌活性,其中SRJ2-4抑菌效果最好,抑菌带达到18 mm;SRJ2-4的盆栽防效及田间防效分别为80.7%与79.4%,与其它菌株相比达极显著水平。SRJ2-4处理的亩产量为488.79 kg,高于其他药剂处理。对该菌株形态、生理生化及16S rDNA序列进行分析,将该内生菌鉴定为糖蜜草固氮螺菌(Azospirillum melinis)。     

四氟醚唑对黄瓜的安全性及其对黄瓜白粉病的防治效果

为明确四氟醚唑对黄瓜植株的安全性,采用浸种及茎叶喷雾处理的方法测定其对不同生长时期黄瓜植株的影响,采用子叶保湿培养法测定白粉病菌对其敏感性,并在田间进行防治白粉病的药效试验,综合评价了四氟醚唑对黄瓜白粉病的效果。浸种处理后,黄瓜子叶上白粉病发病率明显降低,对黄瓜株高和根长的抑制率、茎周增长率及叶绿素含量增加率与己唑醇相比均较低;发芽期及幼苗期的黄瓜植株使用四氟醚唑处理,新生节间均出现轻微的抑制伸长现象;4％四氟醚唑水乳剂对黄瓜白粉病菌的EC50为0．8146mg／L,敏感毒力高于50％醚菌酯水分散粒剂;田间间隔期10天喷雾,在末次药后7天对黄瓜白粉病的防治效果为76．02％～85．77％,与5％己唑醇水乳剂防效相当,明显高于50％醚菌酯水分散粒剂的防效。表明四氟醚唑对黄瓜生长安全且用药间隔期长,是防治白粉病的高效轮换药剂。     

低剂量棉隆熏蒸联合生物菌肥防治黄瓜根结线虫病的应用效果

为明确土壤熏蒸联合生物菌肥对根结线虫及土壤微生态的影响,采用低剂量棉隆熏蒸处理后沟施YB-04菌肥的方法在日光大棚进行黄瓜根结线虫病的防治试验。结果显示,棉隆熏蒸联合YB-04菌肥沟施处理土壤中的根结线虫数和黄瓜植株根系的根结指数均比单独使用棉隆或YB-04菌肥的处理及对照显著降低,黄瓜移栽后90 d时线虫减退率为89.1%,根结指数为0.5,防治效果达87.8%。棉隆熏蒸联合YB-04菌肥沟施处理也具有显著的促生作用,黄瓜的产量、株高、鲜重以及有效叶数均比对照显著提高了46.4%、18.8%、63.0%和17.7%。另外,棉隆单独熏蒸处理土壤中的细菌和真菌数量、细菌/真菌比值及土壤酶活性均较对照显著降低,而棉隆熏蒸联合YB-04菌肥沟施处理土壤中的细菌数量、细菌/真菌比值及土壤酶活性均较棉隆单独熏蒸处理显著增加,其中,细菌数量及细菌/真菌比值分别达28.4×106CFU/g和201.2,蔗糖酶活性达86.0 mg·g~(-1)·24 h~(-1)。表明低剂量棉隆熏蒸联合YB-04菌肥沟施可以安全高效地防治黄瓜根结线虫病。     

设施黄瓜根结线虫化学防治技术研究

为了探索简便、安全、高效防控蔬菜根结线虫技术,更好地指导设施蔬菜生产,进行了98.1%1,3-二氯丙烯·氯化苦胶囊剂不同剂量、不同施药深度、施药后覆膜与否和定植前后施药对设施蔬菜根结线虫的防治效果研究。结果表明,用98.1%1,3-二氯丙烯·氯化苦胶囊剂20kg/667m~2进行土壤熏蒸处理,闷棚后定植优于定植后施药处理,施药后覆膜优于不覆膜处理对蔬菜根结线虫的防治效果,不同施药深度对根结线虫的防治效果没有明显差异,本研究对于设施蔬菜根结线虫防治措施的制定具有重要的指导意义。     

具防病并提高植物耐旱功能的小链霉菌HS57的筛选

本研究旨在寻找防治黄瓜枯萎病并提高植物抗逆能力的多功能菌株。从连作田健康黄瓜根际土中分离筛选到1株放线菌HS57。平板对峙法测定菌株HS57对尖孢镰刀菌、茄病镰刀菌和立枯丝核菌的抑制作用,平皿对扣共培养法测定其挥发性物质对尖孢镰刀菌的抑制作用,温室盆栽法测定其对黄瓜枯萎病的防病效果及对小麦耐旱能力的影响,结合菌株形态特征和16S rRNA基因序列分析对其进行鉴定。结果表明,菌株HS57可抑制3种病原菌生长,其中对尖孢镰刀菌的抑制率为52.4%;其挥发性物质对尖孢镰刀菌的抑制率为32.1%。浓度为10⁷个/mL的HS57孢子悬浮液浸种对黄瓜枯萎病的防效最好,为51.0%;小麦种子经浓度为10⁷、10⁸个/mL的HS57孢子悬浮液浸种,麦苗经连续7 d缺水处理后再浇水,比对照恢复得更好。初步鉴定HS57菌株为小链霉菌Streptomyces parvus,是一株非常有潜力的多功能菌株。     

Plant growth enhancement and disease control byTrichoderma harzianum in vegetable seedlings grown under commercial conditions

Trichoderma harzianum was applied to cucumber and pepper seedlings as a peat-bran preparation incorporated into the propagative mixture in a commercial production nursery. On marketing day (after 18 and 30 days for cucumber and pepper, respectively), significant increases of 23.8% and 17.2% in seedling height, 96.1% and 50% in leaf area, and 24.7% and 28.6% in plant dry weight were observed in cucumber and pepper seedlings, respectively, as compared to their non-treated counterparts.Trichoderma-treated seedlings were much more developed and vigorous and had higher chlorophyll contents. No significant differences were found in N, P or K content between treatments. Cucumber seedlings were then transplanted to a commercial greenhouse and analyzed over two successive growth cycles following soil fumigation with methyl bromide (500 kg/ha). Results revealed theTrichoderma-treated plants to be more resistant to damping-off disease. During the first cycle, immediately after soil fumigation, no damping-off was observed with either treatment, except in border beds where 4% of the non-treated plants died, as compared to no damping-off in theTrichoderma-treated plants. During the second growing cycle however, significant reductions in damping-off of 67% and 52% were obtained in middle and border beds, respectively, as compared to the non-treated controls.     

解淀粉芽胞杆菌XJ5挥发性物质抑菌活性及对苹果褐腐病防效测定

解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens XJ5挥发性物质对苹果褐腐病菌Monilinia fructigena等多种病原真菌具有良好的拮抗活性。通过固相微萃取-气相色谱质谱联用仪（Solid-phase microextraction-Gas chromatography mass spectrometry,SPME-GC-MS）对菌株XJ5产生的挥发性物质进行检测,利用平板对扣法测定挥发性化合物的抑菌活性,并离体接种评价菌株XJ5挥发性物质对苹果褐腐病的防效。结果表明,XJ5菌株挥发性物质对9种植物病原真菌的抑菌率在47.9%~84.8%,其中对苹果褐腐病菌的抑菌率最高为84.8%。SPME-GC-MS检测及抑菌活性测定表明,菌株XJ5分泌的主要挥发性物质为十二醛（Dodecanal）,具有抑菌活性的挥发性物质主要为2-壬醇（2-Nonanol）、2-乙基己醇（2-Ethyl-1-hexanol）和2-十一醇（2-Undecanol）。其中2-壬醇抑制苹果褐腐病菌的EC₅₀为3.43 μg/mL,且XJ5菌液离体熏蒸与2-壬醇离体熏蒸均可有效抑制苹果褐腐病菌丝生长及病斑扩展,其对苹果褐腐病的离体防效分别在14.4%~71.2%和66.4%~97.6%,与对照差异显著。     

sfp基因转化增强了Bacillus subtilis 168的定殖能力和对黄瓜茎内枯萎病菌的抑制作用

枯草芽胞杆菌B006是一株防治黄瓜枯萎病的高效菌株,可产生脂肽类抗生素表面活性素surfactin和芬枯草菌素fengycin。为深入了解surfactin在根际的作用,本研究通过同源重组的方法将生防芽胞杆菌B006菌株中编码4'-磷酸泛酰巯基乙胺转移酶Sfp的sfp基因整合到不产生surfactin的模式菌株B.subtilis168(B168)基因组中,获得了重组菌株B168S。重组菌株B168S在1%淀粉平板上不水解淀粉,在5%血平板上产生透明溶血圈;HPLC-ESI-MS检测表明菌株B168S在牛肉膏蛋白胨培养液中培养48 h后可产生surfactin。平板对峙试验表明菌株B168S在黄瓜根分泌物培养基上对Fusarium oxysporum f. sp.cucumerinum(Foc)菌丝生长有一定的抑制作用,抑制率R2/R1为1.22;平板菌落计数法测定表明,将菌悬液(10⁶ cfu/mL)浸泡90 min的黄瓜种子播种于无菌石英砂3 d后,菌株B168S在黄瓜根基部和根尖的定殖量分别为菌株B168的2~3倍和9~10倍;温室盆栽试验表明,黄瓜苗用浓度为106 cfu/mL的B168S和B168菌悬液蘸根后,移栽到接种Foc孢子(10⁵孢子/g)的病土中,移栽后第3周菌株B168S和B168处理的防效分别为21.1%和17.9%;对不同高度黄瓜茎中Foc的组织分离结果表明,菌株B168S处理后Foc在黄瓜茎内蔓延的相对高度低于菌株B168和Foc处理。上述结果进一步明确了surfactin可明显促进芽胞杆菌在黄瓜根部的定殖,并通过抑制枯萎病菌的侵染和在黄瓜茎中的蔓延增强对黄瓜枯萎病的防治效果。     

黄瓜内生放线菌的分离、筛选及其活性菌株鉴定

 从植物内生放线菌中筛选拮抗活性菌株和寻找新的农用活性代谢产物,可为植物病害防治提供新的资源。本研究结果发现黄瓜幼苗的根、茎、叶中均有内生放线菌的存在,根组织中的数量、种类明显多于叶片和茎,占总分离株的72.7%,以链霉菌的淡紫灰类群、灰褐类群为主。活性筛选试验结果表明,黄瓜内生放线菌中对12种靶标真菌和6种细菌具有拮抗作用的菌株分别占46.8%和39.0%,主要为分离自根组织的链霉菌淡紫灰类群。分离自黄瓜叶片的gCLA4菌株抑菌谱较广,其发酵滤液对供试12种靶标真菌均具有较好的抑菌效果,但对靶标细菌有选择性抑制作用。形态学、细胞化学和16S rDNA序列分析鉴定该菌株为淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendularectus)。     

黄瓜枯萎病菌菌丝际细菌种群丰度变化及其影响黄瓜生长的原因初探

菌丝际细菌存在于真菌与土壤发生强烈反应的狭小区域。连作导致黄瓜枯萎病菌尖孢镰孢菌Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum（Foc）菌丝际细菌种群组成发生变化。本研究根据非连作土（MC）、连作土（SC）中Foc菌丝际细菌类群根瘤菌Rhizobium sp.、无色杆菌Achromobacter sp.、申氏杆菌Shinella sp.和寡养单胞菌Stenotrophomonas sp.在种群中的丰度,设计了相应的含有不同比例细菌的组合HB-1（33：8：7：6）和HB-2（41：12：2：1）。采用平板生测法测定了这4个属的菌丝际细菌代表菌株76、77、252和29的比例变化对黄瓜生长的影响结果表明,用非连作土细菌组合HB-1处理的黄瓜幼苗高于连作土细菌组合HB-2处理。采用"V"字型平板共培养法测定菌株间是否存在互作,并在96孔板中测定了菌丝际细菌培养滤液对其他菌株及自身生长的影响结果表明,4个细菌之间存在互作,菌株76的培养滤液明显促进菌株77的生长,菌株77代谢物抑制其自身生长。在96孔板中测定了4个细菌对黄瓜根分泌物合成培养液中不同碳源的利用能力结果表明,菌株76对各种碳源利用能力最强,菌株252在葡萄糖为主要碳源的根分泌物中生长最好;HB-1组合和HB-2组合在5种不同碳源根分泌物中都能较好生长。对4个菌株产IAA能力的测定结果表明：菌株76的IAA产量较高且持久,最高可达19.4 mg/L,菌株252的IAA产量在60 h达到峰值,最高可达22.1 mg/L;组合HB-1产生IAA能力始终高于组合HB-2。上述结果表明,菌株互作和对黄瓜根分泌物的利用能力是黄瓜枯萎病菌菌丝际细菌种群变化的重要影响因素;菌丝际细菌比例变化影响黄瓜生长,菌株互作产生IAA能力是影响黄瓜生长的重要因子。该研究为维护连作条件下黄瓜健康生长提供了新的线索。     

土传黄瓜立枯病高效拮抗菌的筛选鉴定及其生物效应

采用平板对峙法从黄瓜根际土壤中分离出的400余株细菌菌株中筛选出16株对立枯丝核菌Rhizoctonia solani具有拮抗效果的菌株,抑菌带直径在0.81～1.93 cm之间。并从中选出3株抑菌带直径在1.6cm以上的菌株N33、N35和N43,结合形态、生理生化特性及16S rDNA序列比对分析,鉴定N33菌株为假单胞菌属Pseudomonas sp.,N35和N43菌株为芽胞杆菌属Bacillus sp.。通过在黄瓜育苗基质中添加选育的高效拮抗菌株,观测其对黄瓜苗生长的促进作用以及对立枯病的防治作用,3株菌株均具有促进黄瓜苗期生长和防治苗期立枯病的作用,其中N43菌株促生及防病效果均最显著,地上部鲜重比对照处理增加62.16%,防治效果达62%。