水杨酸诱导的烟草对烟草花叶病毒的抗性

采用水杨酸（SA）诱导烟草对烟草花叶病毒（TMV）的抗性．间接ELISA法检测诱导后烟草叶片的病毒含量．并用枯斑寄主的半叶法检测诱导抗性程度。结果表明．水杨酸处理后烟草叶片内TMV含量明显降低．随着病毒挑战接种后时间延长．病毒含量增多．第28d普通烟叶片的病毒含量达到最大值。SA诱导处理后．处理叶片（T-SA）与其上部未处理叶片（N-SA）比较，枯斑数基本一致。均比对照处理明显减少。     

水杨酸诱导的烟草对烟草花叶病毒的抗性

采用水杨酸(SA)诱导烟草对烟草花叶病毒(TMV)的抗性,间接ELISA法检测诱导后烟草叶片的病毒含量,并用枯斑寄主的半叶法检测诱导抗性程度。结果表明,水杨酸处理后烟草叶片内TMV含量明显降低,随着病毒挑战接种后时间延长,病毒含量增多,第28d普通烟叶片的病毒含量达到最大值。SA诱导处理后,处理叶片(T-SA)与其上部未处理叶片(N-SA)比较,枯斑数基本一致,均比对照处理明显减少。     

烟草漂浮苗花叶病毒病重要初侵染源的探讨

烟草花叶病毒病是烟草漂浮苗的一个重要病害.为了解该病的初侵染源,对苗盘和剪叶机进行了调查采样和检测接种.结果表明.病毒污染的苗盘和剪叶机上烟苗残留物样品当季可检测到TMV抗原阳性.温室内存放1年后,苗盘残留物仍然可检测到TMV抗原阳性,且接种枯斑寄主出现枯斑,用带毒苗盘育苗可使烟苗感染TMV.苗盘和剪叶机上残留物TMV抗原阳性与烟草团棵期部分田块花叶病发病率高于20%有关.这些结果表明,病毒污染的苗盘和剪叶机上烟苗残留物是漂浮苗烟草花叶病毒病的重要初侵染源.生产上要重视旧苗盘和剪叶机的清洗与消毒.     

广州市郊及其邻近地区辣椒CMV和TMV的鉴定

根据对广州市郊及其邻近地区辣椒病毒病的田间调查、寄主范围和症状特点、血清学反应以及RT-PCR的试验结果，证实了黄瓜花叶病毒(CMV)是广州市郊及其邻近地区辣椒病毒病的主要毒原之一；通过生物学和血清学方法，鉴定了烟草花叶病毒(TMV)是另一主要毒原。在采集的病样中，根据鉴别在寄主上的症状特点，主要存在两种类型的分离物，分别称为分离物Ⅰ和分离物Ⅱ。分离物Ⅰ在辣椒、西葫芦、三生烟、普通烟、心叶烟、曼陀罗等寄主植物上引起花叶等症状，在苋色藜、昆诺阿藜上产生局部枯斑，不侵染千日红，由此可初步鉴定为CMV；从间接ELISA和RT—PCR的检测结果也可判断分离物Ⅰ是CMV，其检出率为36．67％。分离物Ⅱ在辣椒、普通烟上产生花叶症状，在心叶烟、曼陀罗、千日红、三生烟、苋色藜和昆诺阿藜等寄主植物上产生局部枯斑，而不侵染西葫芦，由此可初步鉴定其为TMV；间接ELISA检测结果表明，分离物Ⅱ是TMV，其检出率为43．33％。另外，TMV在田间发生率明显高于CMV。     

烟草漂浮苗烟草花叶病毒带毒率检测

为了培育无病毒壮苗,研究了烟草漂浮苗烟草花叶病毒(TMV)的带毒率检测方法.结果表明:三抗体夹心法(TAS-ELISA)和试纸条的检测灵敏度分别为TMV病叶汁液10-6和10-4;苗期常用农药和消毒剂的药害不会引起TAS-ELISA和试纸条检测假阳性;TAS-ELISA和试纸条可检出烟苗无症带毒,在发现烟苗现症时,同盘烟苗带毒率高于发病率;在允许存在低漏检率的情况下,采用2株或3株苗样本混合检测可扩大检测覆盖面;烟苗带毒是大田普通花叶病毒病的一个主要但非惟一初侵染源.     

植物源病毒抑制剂WCT-Ⅱ控制烟草花叶病毒(TMV)的作用机理初探

用植物源病毒抑制物WCT-Ⅱ直接处理烟草花叶病毒(TMV)病毒粒体，经枯斑半叶法接种和电镜检测发现，处理后的病毒致病力明显下降，病毒粒体大量发生断裂、略变弯曲等畸变现象，WCT-Ⅱ对TMV的枯斑抑制率为86．6％；WCT-Ⅱ处理烟草后，其叶片匀浆和胞间液的蛋白经SDS-PAGE不连续电泳发现，处理后的烟草叶片胞间在第5天至第9天和第7天分别存在1条酸溶性蛋白和1条碱溶性蛋白。上述研究结果表明，WCT-Ⅱ不仅对TMV病毒粒体具有体外钝化作用，而且能诱导植物产生病程相关蛋白，提高烟草抵抗TMV侵染的能力。     

胶体金免疫层析试纸结合RT-PCR法快速检测烟草环斑病毒

利用烟草环斑病毒胶体金免疫层析检测试纸条,对烟草环斑病毒3个分离物进行了快速检测。结果表明,试纸条在10min内,可特异性检出烟草环斑病毒的3个分离物,对番茄环斑病毒、南芥菜花叶病毒、番茄黑环病毒和健康叶片无反应。剪下试纸条上显示的检测带,进行RT—PCR,能扩增到与预期大小相同的DNA条带。试纸条检测烟草环斑病毒粗提纯液,检测灵敏度在1μg·mL^-1,试纸条检测烟草环斑病毒的病汁液,检测灵敏度在10^-3（W／V）,试纸条检测灵敏度与DAS—ELISA方法灵敏度基本相同。     

武隆烟区烟草病毒病的病原初步鉴定

对重庆市武隆烟区田间烟草进行了病毒病病原种类的调查和鉴定。26个烟草样品经ELISA共检测到TMV,CMV,PVY及TuMV等4种病毒。所有样品均感染TMV,且病毒复合侵染严重,其中,以TMV,TuMV,CMV及PVY等4种病毒的复合侵染为主,侵染率达30．77％。ELISA结果表明,复合侵染的样品中TMV含量最高,TuMV含量最低。     

解淀粉芽孢杆菌Ba33对烟草的促生及抗TMV作用

从烟田土壤中分离得到解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)Ba33菌株。5叶期三生NN烟(Nicotianatabacum var.samsun NN)喷施Ba33发酵液3次后再接种TMV(烟草花叶病毒),与喷清水对照相比,能显著降低枯斑数量,枯斑抑制率为67.8%。于4~6叶期普通烟草(Nicotiana tobacum L.)NC89烟苗接种TMV前后分别用Ba33发酵液、NB培养基或清水连续灌根3次,观察到Ba33发酵液灌根处理的烟苗鲜重、最大叶长和叶宽均高于清水对照处理,叶色浓绿,长势良好;接种TMV10 d后进行实时荧光定量PCR检测,Ba33发酵液灌根处理的植株新叶中RNA含量低于清水对照和NB培养基灌根处理。认为Ba33具有拮抗TMV、促进烟草生长的作用,是具有潜在应用价值的生防菌株。     

荧光假单胞菌CZ对TMV的抑制作用及其活性蛋白的分离纯化

从烟草根际中分离到一株拮抗烟草花叶病毒(TMV)的生防菌荧光假单胞菌CZ,将其发酵液接种或喷施TMV寄主三生NN烟后进行生物学检测.结果表明:荧光假单胞菌CZ发酵液与TMV混合后接种,其枯斑抑制率为91.5％;接种TMV的前、后24h喷施CZ发酵液,对TMV的抑制率分别为78.9％和30.5％.荧光假单胞菌CZ发酵液经硫酸铵盐析获得活性粗蛋白,经阴离子层析、superdex-G-75凝胶层析和SDS- PAGE检测,分子量为39.4 kD.     

昆明烟区育苗点烟草花叶病毒初侵染源的检测与分析

烟草花叶病毒在烟草种植上为害严重。在烟草育苗前期,对育苗基质、水源、漂盘残根、育苗棚周围植物及烟草种植区病株残体、土壤用烟草花叶病毒TAS-ELISA试剂盒检测。结果表明,在水源、漂盘残根、烟草种植区病株残体、土壤中均可检测到烟草花叶病毒,在育苗棚周边8个科的14种植物中检测到烟草花叶病毒,此类毒源可能成为苗期烟草花叶病发生蔓延的初侵染源。     

微生物菌组合对烟叶病残体的消毒效应研究

 为探索田间废弃鲜烟叶的处理途径,实现烤烟田间清洁生产,研究了采用微生物菌组合对携带烟草花叶病毒（TMV）的烟叶病残体进行发酵处理的技术。该技术的处理效果用ELISA检测、枯斑检测和烟苗浇根试验进行检验。结果表明,在含有TMV的废弃鲜烟叶发酵处理中,添加“乳酸菌+光合细菌+放线菌+地衣芽孢杆菌+枯草芽孢杆菌+胶质芽孢杆菌”的微生物菌组合,不仅能够有效地降解或破坏烟叶病残体中的TMV,抑制TMV的侵染活性,还对烟株生长发育有一定的促进作用,这对田间废弃鲜烟叶处理具有重要的参考价值。     

安顺地区烤烟漂浮育苗TMV发生现状及致病因素分析

[目的]了解安顺地区漂浮育苗TMV病毒发生规律以及导致大棚内发生大面积侵染的原因.[方法]于2011 ～2013年对安顺市主要烤烟种植区（县）病毒检出率、育苗点不同大棚烟苗带毒率以及TMV高发大棚周边环境进行调查.[结果]安顺市各烟区所有检测批次的样品均有一定的带毒率,不同烟区烟苗风险样品率及高风险样品率不同,其中紫云县烟苗TMV阳性检出率为历年最高.漂浮苗带毒率与育苗棚管理水平密切相关.随着育苗集约化程度提高,烟苗TMV阳性检出率提高,感染TMV的风险增大.设施不齐全、周边生态环境、育苗管理操作不到位为TMV传播提供了初侵染原和重要途径,导致烟苗带毒率大大增加.[结论]为防治烟草普通花叶病及提高烤烟的产量及品质提供了理论依据.     

烟草漂浮育苗剪叶传播烟草花叶病毒的特点

 采用三抗体夹心法（TAS-ELISA）研究了烟草漂浮苗中烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus, TMV）通过剪叶操作传播的特点。试验表明,剪一次TMV新鲜病叶的带毒剪刀连续剪10棵健康烟苗,剪叶后第30 d花叶病的平均发病率为12.7%。苗盘试验表明, 每剪1盘苗后用漂白粉消毒剪刀1次的情况下,在每盘苗加入6株TMV病苗,剪刀剪叶1次,剪叶后第10 d平均发病率为13.0%~18.3%, 发病株数增加3.5~4.9倍,无症烟苗移栽后15 d,花叶病发病率可达65%~80%。在第1次剪叶前7 d,每盘苗挑选6株用稀释1.0×10^-6倍的TMV病叶汁液摩擦接种,第1次剪叶后13 d（接种后20 d）留下病苗和拔走病苗处理带毒率分别为57.8%和37.8%。第3次剪叶后13 d（接种后47 d）带毒率都达到95.6%。在存在病株的情况下,剪叶传播烟草普通花叶病的效率很高。人工气候箱中,剪叶接种1.0×10^-6 TMV病叶汁液,接种后11~12 d TAS-ELISA可检测出阳性,接种后20~24 d表现花叶症状。     

丽江烤烟漂浮育苗烟草花叶病毒检测及发生规律

 为查明丽江烟草漂浮苗病毒病原及有效预防烟草花叶病毒病提供依据,2006～2011年对丽江4县1区主要育苗点烟草漂浮苗进行随机抽样法取样采集16201份烟苗样品进行病毒血清学及形态学检测鉴定。结果表明：所采集的样品中仅检测出烟草花叶病毒,6年丽江总体烟草花叶病病毒病原阳性率占3.01%,表明烟草花叶病毒是危害丽江烟草漂浮苗的重要病毒病原。整体上丽江烟苗病毒病原阳性率由2006-2008的3.87%下降为2009-2011的2.14%,这主要是漂浮育苗技术推广的结果。仍出现较高的病毒病原阳性率的个别地方,需要加强育苗操作的管理。     

TMV接种烟株后不同部位与不同时期病毒相对含量的研究

 选择不同时期烟株接种烟草花叶（TMV）,并在不同时期取样,应用TAS-ELISA法对370个样品进行了检测分析。结果表明,烟株不同接种时期各部位病毒相对含量高低的排列顺序是:团棵期接种叶,苗期接种叶,团棵期接种根,苗期接种根,苗期接种茎,团棵期接种茎,旺长期接种茎,旺长期接种叶,旺长期接种根。样品与阴性对照OD值之比由高到低分别是13.33,7.366,5.737,4.4,4.29,4.216,3.559,3.14,2.754,差异显著,这一结果排列中团棵期接种后叶病毒相对含量最高的规律,与田间发病率消长规律中团棵期通过叶片调查烟株发病率最高的趋势基本吻合。苗期、团棵期、旺长期这3个不同时期接种TMV后病毒相对含量由高到低排列顺序是:团棵期,苗期,旺长期。接种TMV后烟株花器病毒相对含量由高到低的排列顺序是:花冠,子房,花萼,雄蕊,雌蕊。     

利用近红外光谱技术快速检测烤烟苗期病毒病

[目的]筛选苗期病毒快速检测的化学成分指标。[方法]采用摩擦接种方法对烟苗接种TMV病毒诱发病毒病,利用近红外光谱对健株和病株内在化学成分(还原糖、钾、氯、总氮、总糖和总烟碱)进行了定性和定量分析。[结果]接种TMV 10 d后,健株与病株在化学成分上差异较大,特别是在有机物含量上,各调查时期的处理均高于对照。[结论]可将有机物如还原糖、总糖和总烟碱等含量作为病毒检测的主要指标,并辅以无机成分含量作参考。     

中草药对烟草幼苗抗TMV病蛋白质组成及生化指标的影响

烟草幼苗接种烟草花叶病毒（TMV）后，经3种中草药（木、反和九）处理均提高了烟草对花叶病毒病的抗性，烟草幼苗中苯丙氨酸解氨酶（PAL）和多酚氧化酶（PPO）的活性均高于对照。SDS－PAGE蛋白图谱发生了不同的变化，除诱导出共有的新多肽外，还各自诱导出特有的新多肽。此外，烟草体内的一些重要化学物质（可溶性糖、还原性糖和总N）含量，也表现出有利于烟草品质的趋势。     

剪叶方式对烤烟漂浮育苗中病毒传播的影响*

 以剪刀蘸取病毒液后剪叶和剪病叶后剪叶2种方式对烟草花叶病毒（TMV）的传播效果进行研究。结果表明,2种方式均能传播TMV病毒病,发病率分别为57.1%和50.5%,剪叶是烟草漂浮育苗苗期病毒传播的主要途径;TMV的传播效率随剪苗数量的增加而降低,且95%以上集中在前30株被剪烟苗中。此结果对漂浮育苗生产中确定剪叶工具消毒方法和相关试验研究具有指导意义。     

烤烟育苗期普通花叶病(TMV)感染及传播规律研究

对安顺市烤烟育苗阶段TMV感染方式、传播途径、烟苗易感TMV时期及烟苗不同部位TMV含量进行研究。结果表明:摩擦和剪叶均能有效感染及传播TMV,其中剪叶传播TMV机率极高。以蒸馏水稀释病毒汁液,从160~2 560倍均能将病毒接种至烟苗,且随着接种浓度的降低,烟苗所表现的症状逐渐减轻,同时随着剪叶次数的增加,所检测样品的OD值也在逐渐增大,说明随着剪叶等农事操作的进行,烟草普通花叶病毒TMV会快速传播。而烟苗不同部位TMV病毒含量的检测结果表明,叶片带毒量比茎部带毒量高。