胚胎干细胞体外诱导分化的研究进展

胚胎干细胞(embryonic stem cell，ES细胞)是由早期胚胎内细胞团(ICM)或原始生殖(PGC)细胞经体外分离、抑制分化培养获得的多潜能细胞。ES细胞具有发育分化的多潜能性和无限的自我更新能力，能在体外长期培养并具有向机体各种组织细胞分化的潜能。由于ES细胞的全能性，在体外可以分化出包括3个胚层在内的所有细胞，     

小鼠ES细胞条件培养基对绵羊类胚胎干细胞克隆、传代的影响

本研究以无血清培养基为基础培养液,旨在探求小鼠ES细胞条件培养液(ESCCM)和2种不同饲养层对绵羊类ES细胞分离、克隆效率的影响.绵羊内细胞团从胚胎中分离得到后,分别以小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)和绵羊胎儿成纤维细胞(SEF)为饲养层进行培养.结果在MEF饲养层上,绵羊类ES细胞在ESCCM新培养系统中可稳定传至第10代,而使用基础培养液最多传至5代.而在SEF饲养层上,绵羊类ES细胞在ESCCM新培养系统中仅能传至3代.表明使用ESCCM和MEF能促进绵羊类ES细胞的分离和克隆.对类ES细胞进行核型分析、AKP染色及体外分化能力检测,证实所分离的类ES细胞符合ES细胞的主要特征,而且发现这些类ES细胞可以表达胚胎干细胞关键转录因子Nanog.结果表明,ESCCM可显著提高绵羊类ES细胞的分离克隆效率,原因可能是小鼠ES细胞在生长过程中可能分泌某些重要的细胞因子,从而达到促进绵羊ES细胞增殖的作用.且MEF比SEF更适合于绵羊类ES细胞的分离和传代.     

山羊类ES细胞的培养

将187枚山羊胚胎按如下方式培养在GEF饲养层上:①桑椹胚直接培养;②囊胚直接培养;③囊胚去透明带后培养;④囊胚去透明带并被撕裂成碎片后培养;⑤囊胚去透明带后胰蛋白酶消化成小细胞团培养。将上述培养所获取的18个内细胞团(ICM)均分为2组,第1组始终从生长物中挑取较为浓密的类ES细胞团传代,第2组始终让培养物生长到铺满培养皿(瓶)底再传代。结果显示:①桑椹胚、囊胚直接培养以及囊胚被消化成小细胞团后培养,均未获得ICM;囊胚去透明带后培养,获得ICM的数量占参试囊胚数的30%;囊胚去透明带并被撕裂成碎片后培养,获得ICM的数量占参试囊胚数的60%。②始终从培养物中挑取类ES细胞团进行传代,传至第4代后已无细胞可传;而将培养物培养至长满培养皿(瓶)底后再一起传代,细胞可传11代以上,且其中的类ES细胞团呈大量扩增趋势。     

胚胎干细胞分离和克隆影响因素的研究进展

胚胎干细胞ES是从早期胚胎或原始生殖细胞中分离出来的能够在体外进行传代培养,而不分化的全能性细胞,ES细胞最主要的生物学特征是具有发育的全能性或多能性,ES细胞能在体外培养、增殖、传代、冻存和诱导分化,是研究生物发育、行为和建立人体疾病模型的理想工具,本文重点论述了影响胚胎干细胞分离和克隆的因素。并展望了胚胎干细胞的应用前景。     

胚胎干细胞研究进展

胚胎干细胞（Embryonic stem cells,ES细胞）是一种从早期胚胎的囊胚内细胞团（Inner Cell Mass,ICM）细胞或胎儿原始生殖细胞（primordial germ cells,PGCs）经分离、     

动物胚胎干细胞的研究概况

胚胎干细胞（ES细胞）是从早期胚胎内细胞团（ICM）或原始生殖细胞（PGCs）经体外分化抑制培养分离克隆的,ES细胞在动物克隆、转基因动物生产、细胞工程、组织工程、临床克隆治疗和发育生物学等的研究应用中起着重要的作用.为此,介绍胚胎干细胞的生物学特性,国内外研究进展和研究动态,阐明建立ES细胞系的技术要点以及ES细胞的应用及发展前景.     

由体外受精囊胚获得ICR小鼠ES细胞

收集鼠卵母细胞和精子，采用体外受精技术，获得早期胚胎。体外培养胚胎至囊胚，分离内细胞团，获得ICR小鼠的ES细胞。结果不但获得了来自体外受精囊胚的ICR小鼠ES细胞，而且表明用体外受精方法获得的小鼠早期胚胎的数量明显大于常规方法，且比较稳定。ICR小鼠ES细胞的获得，为研究小鼠的ES细胞分化提供了条件。     

类ES细胞持续培养的上清液对小鼠囊胚ICM团形成的影响

胚胎干细胞是一种存在于动物早期胚胎中、具有分化全能性的细胞。维持这种细胞的分化全能性与不断扩增的前提条件是：培养环境中必须存在抑制其分化、促进其生长的因子。因此，寻找胚胎干细胞促生长与抑分化因子，是胚胎干细胞研究的重要内容之一。1988年Williams等人发现了能诱导髓样白血病细胞向正常分化的LIF，也能抑制胚胎干     

不同培养方式对昆明小鼠类ES细胞分离及培养的影响

胚胎干细胞（Embryonic stem cell,ES细胞）是从早期哺乳类动物胚胎或原始生殖细胞分离的具有全能性的细胞系。在体外分化抑制培养条件下,具有保持未分化的状态及无限增殖的能力。自Evans和Kaufman首次建立小鼠ES细胞系以来,各种动物ES细胞分离与克隆成为国际生物科学领域的热点课题之一。ES细胞可广泛应用于嵌合体的制备和克隆动物的生产。利用ES细胞遗传操作,可生产转基因动物,进行细胞基因结构与功能的关系以及细胞分化机制的研究。本研究采用不同培养方式对昆明小鼠类ES细胞进行分离及培养,供相关研究者参考。     

山羊PGCs用于分离与克隆类ES细胞

选择健康成年本地白山羊，自然发情，配种后44d取胎儿，以传统的原始生殖细胞（PGCs)分离与克隆的方法和PGCs与其胎儿生殖嵴周围组织细胞共同培养的方法获得类胚胎干细胞（类ES细胞），并对山羊类ES细胞在不同饲养层上进行培养。结果表明，采用传统方法与共培养的方法并添加细胞因子均能分离获得类ES细胞。分离获得的类ES细胞在同源（山羊）胎儿细胞饲养层上生长效果较好，可传4代或5代，而在小鼠原代成纤维细胞饲养层上类ES细胞仅传3代。另外，共培养不添加细胞因子组仅获1个ES细胞集落，传代后丢失。     

胚胎干细胞体外诱导分化的研究进展

胚胎干细胞(Embryonic stemcells,ES细胞)是从附植前胚胎的内细胞团(ICM)或附植后胎儿的原始生殖细胞(PGCs)经体外抑制分化培养、分离和克隆得到的具有发育全能性的细胞。ES细胞体外诱导分化的研究自从20世纪90年代开始到现在,一直是生命科学和医药工程领域的研究热点,并且近年来这方面的研究也取得了一些突破性的进展。本文简述了胚胎干细胞的诱导原理、方法和定向分化的一些细胞种类以及目前研究存在的问题和困难。     

某些因素对牛和小鼠类胚胎干细胞分离与培养的影响

以荷斯坦牛胚胎和小鼠胚胎为材料 ,研究了犊牛血清、饲养层、培养液、添加物和消化液对牛胚胎干细胞和小鼠胚胎干细胞克隆效率的影响。结果表明 ,在 2 4h内使小鼠胚胎贴壁率达 86 %以上的犊牛血清可用于小鼠和牛胚胎干细胞的分离 ;在 ES细胞分离与克隆中 ,以 15 %～ 2 0 %犊牛血清为宜 ,在 DMEM(L)培养基中添加 0 .1μmol/LNa2 Se O3 0 .1mmol/Lβ-巯基乙醇 10 μg/L IGF 10 0 0 IU/m L L IF,能显著提高牛 ES细胞分离与克隆效率 ;在TCM199、DMEM(高糖 )和 DMEM(低糖 ) 3种培养基中 ,低糖 DMEM更适宜于牛 ES细胞的分离 ;优秀胚胎形成的团状 ICM更适宜于分离与克隆 ES细胞 ,在 37℃用低浓度消化液处理 ICM或 ES细胞集落 ,再以机械将其离散为细胞小块 ,ES细胞克隆效率最高。     

牛体外受精胚胎衍生干细胞能力影响因素的研究

以牛卵巢卵母细胞体外受精获取囊胚期胚胎，比较体外受精牛胚胎不同获取内细胞团的方法和不同培养液对体外培养胚胎干细胞能力的影响。结果表明，囊胚期胚胎不除去透明带而直接培养产生胚胎干细胞，初次克隆率为55％；胰酶法去透明带分离的内细胞团（ICM）培养产生胚胎干细胞，初次克隆率为90％。免疫外科法去透明带分离的ICM在4种不同的培养液中，初次克隆率分别为16．4％、11．5％、21．8％、18．2％，但是其分离的ICM经传代后形成的衍生细胞不易发生分化，经过4～6代的传代，仍然保持其完整的形态，说明免疫外科法是一种理想的牛ICM分离法，培养液为D20＋LIF（40ng／mL）可用于牛胚胎干细胞培养。     

胚胎干细胞在生物技术中的研究进展

胚胎干细胞包括来自囊胚内细胞群的ES细胞和来自胚胎原始生殖嵴的EG细胞,其中ES细胞维持不分化传代培养已达80代。由于这些细胞具有高度复制能力及多向性分化潜能,近年来的研究使人们对胚胎干细胞的培养条件、诱导分化及其应用前景,以及当前研究方面存在的主要问题有了进一步的认识。     

胚胎干细胞的体外培养及应用

来自着床前的囊胚和早期胚胎的胚胎干细胞(ES细胞)是一类具有发育多能性和全能性的细胞。它在生命科学的各个领域产生非同凡响的影响。文中就ES细胞的体外培养，诱导分化及其在畜牧业、生命科学的基础学科研究和医学领域的应用简要综述。     

影响山羊类胚胎干细胞分离克隆的因素分析

将本地槐山羊胎儿的原始生殖细胞(PGCs)与其生殖嵴周围组织细胞共同分离,经传代培养后获得了具有干细胞特征的山羊类ES细胞。结果表明高糖DMEM培养基和低糖DMEM培养基相比较,低糖DMEM更适宜于山羊类ES细胞的分离与克隆;类ES细胞在山羊胎儿成纤维细胞饲养层上生长效果较好,可传4代或5代,而在小鼠成纤维细胞饲养层上,类ES细胞仅传3代;联合添加白血病抑制因子(LIF)、干细胞因子(SCF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)能显著提高山羊类ES细胞分离与克隆的效率;胎龄为30~45d的胎儿原代培养时可获得大量的细胞集落,克隆培养可传至5代,适合作山羊类ES细胞的分离培养。     

山羊类ES细胞的分离与克隆

采集山羊交配后6～8d的桑椹胚、囊胚和孵化囊胚,将桑椹胚和囊胚分别放在小鼠原代胎儿成纤维细胞(PMEF)饲养层和同源原代胎儿成纤维细胞(PGEF)饲养层上比较其脱带时间及脱带率。脱带后,将各自一半胚胎切割,把含ICM的半胚分别放在相应饲养层上进行培养,另一半整胚在各自饲养层上继续培养,而孵化囊胚直接于PGEF饲养层上培养。当ICM增殖一定程度时进行传代,以比较其类ES细胞分离与克隆的效果。结果表明,在2种不同饲养层上,囊胚的脱带时间均短于桑椹胚,囊胚的脱带率均高于桑椹胚,而饲养层的种类对胚胎的脱带时间以及脱带率影响不大。脱带切割囊胚不论在PMEF还是在PGEF饲养层上,其贴壁时间均短于脱带整胚及孵化囊胚,而贴壁率高于脱带整胚,与孵化囊胚相似。脱带整胚及脱带切割胚在PMEF饲养层上所获类ES细胞只能维持3代,而在PGEF饲养层上,脱带切割半胚和孵化囊胚所获类ES细胞传至5代。由此认为,对脱带后的胚胎进行切割处理,有利于ICM的贴壁和增殖;应用同源原代胎儿成纤维细胞饲养层培养系统,有利于类ES细胞的分离与克隆。     

动物胚胎干细胞及其研究进展

胚胎干细胞（embryonic stem cells，ES）是指从桑椹胚或附植前囊胚内细胞团分离的多潜能细胞，它具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。下面介绍几种常见的动物胚胎干细胞及它们的新近研究进展。     

胚胎干细胞的蛋白质组学研究

胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)主要来源于胚胎发育早期囊胚中的内细胞群(inner cell mass,ICM),具有无限增殖、自我更新和多向分化的特性。而蛋白质组学具有规模大和高通量等优点,在胚胎干细胞的研究中采用蛋白质组学的研究技术有助于进一步探讨胚胎干细胞的增殖、定向分化和迁移的机制。     

ES细胞在遗传育种中的应用

胚胎干细胞(embryonic stem cell．ES细胞)是从早期胚胎内细胞团(inner cell mass．ICM)或原始生殖细胞(primordial germ cells．PGGs)分离和克隆的具有全能性的细胞。ES细胞作为一种新型的实验材料,广泛应用于动物克隆、转因动物的生产、真核细胞基因的表达与调控、人类遗传病动物模型的创建,人类器官移植材料的生产以及细胞分化机制的研究等领域。ES细胞分离、克隆技术与遗传工程和胚胎工程相结合,对于阐明动物生长发育的基本规律、抢救和保护濒危动物遗传资源、建立先进的动物育种技术体系具有重大的理论意义和实践价值。本文将结合胚胎干细胞的生物学特性,综述其在动物遗传育种中的应用及在当前技术水平下存在的问题。