牛尿苷酸合酶缺乏症PCR-RFLP检测方法的建立

提取牛血液和精液DNA,进行PCR扩增、RFLP分析,建立尿苷酸合酶缺乏症(DUMPS)检测方法。对济南市6个奶牛场224头荷斯坦奶牛及53头种公牛进行了DUMPS的PCR-RFLP检测,共检测出2头杂合母牛(携带者),杂合子占检测母牛群的0.89%,在荷斯坦公牛中只检测到一种基因型,没有发现隐性突变基因的携带者。实验证明,该方法重复性好、灵敏性高、稳定性可靠。     

中国荷斯坦公牛CN和DUMPS遗传缺陷检测及系谱分析

旨在研究中国荷斯坦牛中瓜氨酸血症(Citrullinemia,CN)和尿苷酸核酶缺乏症(Deficiency of uridinemonophosphate synthase,DUMPS)2种遗传缺陷的携带者比率及系谱来源,并构建更简便的检测方法。本研究通过PCR-RFLP方法对参加我国联合青年公牛后裔测定和良种补贴项目的591头荷斯坦公牛进行了大规模CN和DUMPS的遗传缺陷检测,并构建了奶牛CN隐性有害基因的AS-PCR检测技术。结果,共发现2头CN和1头DUMPS隐性有害基因携带者公牛,携带者比例分别为0.34%和0.17%。经过系谱追溯,2头CN携带者公牛均为澳大利亚公牛Linmack Kriss King-CN后代,DUMPS携带者公牛为美国公牛Skokie sensation Ned后代。基于此,我国有必要尽快建立荷斯坦牛隐性遗传缺陷监控体系并进行系谱标注,通过青年公牛预选和选种选配,避免携带者公牛进入后裔测定和良种补贴项目,以逐步降低我国奶牛群体中隐性有害等位基因频率。     

中国荷斯坦牛BoLA-DRB3.2基因座的PCR-RFLP多态性分析

主要组织复合体(Major Histocompatibility Complex,MHC)基因在动物机体免疫系统中具有重要作用,并与多种疾病的抗性或易感性存在相关性.利用限制性内切酶HaeⅢ和RsaⅠ通过PCR-RFLP技术分析了112头中国荷斯坦牛BoLA-DRB3.2基因的多态性.结果表明:所检测牛群中BoLA-DRB3.2基因在两个酶切位点均存在多态性,HaeⅢ酶切位点存在4种等位基因,有4种基因型;RsaⅠ酶切位点存在3种等位基因,有4种基因型.经x2适合性检验,所检测牛群中BoLA-DRB3.2基因在两个酶切位点均未达到Hardy-weinberg平衡状态.     

奶牛催乳素基因多态性与产奶量的关系

通过PCR-RFLP的方法,对201头武汉荷斯坦奶牛中催乳素基因Exon3的多态性进行了分析,得到3种基因型:AA、AB和BB,基因型频率分别为81.59%、16.42%、1.99%,并时不同基因型间产奶量进行了分析。结果表明:AA、AB和BB基因型奶牛的产奶量之间没有显著差异(P>0.05);但AA基因型奶牛的产奶量最高,AB基因型奶牛的产奶量次之,BB基因型最低。     

中国荷斯坦牛BoLA-DRB3.2基因座的PCR-RFLP多态性分析

主要组织复合体(Major Histocompatibility Complex,MHC)基因在动物机体免疫系统中具有重要作用,并与多种疾病的抗性或易感性存在相关性。利用限制性内切酶HaeⅢ和RsaⅠ通过FCR-RFLP技术分析了112头中国荷斯坦牛BoLA-DRB3.2基因的多态性。结果表明:所检测牛群中BoLA-DRB3.2基因在两个酶切位点均存在多态性,HaeⅢ酶切位点存在4种等位基因,有4种基因型;RsaⅠ酶切位点存在3种等位基因,有4种基因型。经χ~2适合性检验,所检测牛群中BoLA-DRB3.2基因在两个酶切位点均未达到Hardy-weinberg平衡状态。     

天津地区荷斯坦公牛CVM、DUMPS和CN遗传缺陷检测

本文旨在研究天津地区中国荷斯坦公牛脊椎畸形综合征（Complex vertebral malformation,CVM）、尿苷酸合酶缺乏症（Deftciencv of uridine monophospham synchase,DUMPS）和瓜氨酸血症（Citrullinemia,CN）3种遗传缺陷的携带者比率及系谱来源。通过PIRA—PCR和PCR—RFLP方法分别对天津奶牛发展中心参加全国青年公牛联合后裔测定和国家良种补贴项目的110头荷斯坦公牛进行了CVM、DUMPS和CN三种遗传缺陷检测。共发现6头CVM隐性有害基因携带公牛,携带者比例为5．45％,隐性有害等位基因频率为2．72％。经过系谱分析,其中4头CVM携带者均为美国公牛Carlin—MIvanhoeBell的后代,另外2头因系谱不完整而无法查询。未检测到DuMPs和CN隐性有害基因携带者。基于此,我国有必要尽快建立荷斯坦牛隐性遗传缺陷监控体系并进行系谱标注,避免携带公牛进入后裔测定和良种补贴项目,以逐步降低我国奶牛群体中遗传缺陷隐性等位基因频率。     

奶牛催乳素基因多态性及其与产奶性状的关联分析

催乳素(PRL)基因是影响奶牛泌乳性状的重要候选基因。通过PCR-RFLP结合测序方法检测了荷斯坦奶牛PRL基因5'侧翼区调控序列的多态性,并利用最小二乘法分析其与泌乳性状的关联性。结果显示:在PRL基因5'侧翼序列的906位点处发现A/G突变。共发现AA、AG和GG三种基因型,基因型频率分别为0.239 3、0.522 8和0.177 9,A和G的等位基因频率为0.530 7和0.469 3。多态信息含量检测结果显示该位点处于中度多态,卡方检验显示该位点处于Hardy-Weinberg不平衡状态(P0.05)。关联分析结果表明,该位点多态对产奶量、乳脂率均有影响。     

IGFBP-3基因PCR-RFLP多态性与中国荷斯坦牛泌乳性状的相关分析

以胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)基因作为中国荷斯坦牛部分泌乳性状的候选基因,在对61头中国荷斯坦牛进行PC R-R FLP分析的基础上,对中国荷斯坦牛群体中IGFBP-3基因座多态性与泌乳性状进行相关分析。结果表明:IGFBP-3基因座对产奶量、乳蛋白率和体细胞评分的影响显著(P<0.05),IGFBP-3 BB型个体的305 d产乳量显著(P<0.05)高于AA型和AB型,BB型个体的乳蛋白率和体细胞评分显著(P<0.05)低于AB型。     

巢式PCR-RFLP法检测奶牛隐孢子虫及虫种鉴定

采进口奶牛粪样200份,收集每份样品中的卵囊液,采用巢式PCR检测隐孢子虫(Cryptosporidium)18S rRNA基因,并用RFLP进行虫种鉴定,将目的片段克隆到pEGM-T easy vector,测序并进行同源性分析以进一步佐证虫种鉴定结果。结果表明,进口奶牛隐孢子虫阳性率为3.5%(7/200),514bp的目的片段不能被EcoT14 Ⅰ酶切。测序分析表明,获得的18S rRNA基因序列与NCBI上公布的微小隐孢子虫(C.parvum)相应序列同源性高达99.4%~100%,与安氏隐孢子虫(C.andersoni)同源性仅为91.1%。说明进口牛粪样中检测出的隐孢子虫为微小隐孢子虫。     

中国荷斯坦奶牛MOET育种体系的建立与实施

与世界大多数国家一样,迄今我国采用的奶牛育种方案,被称为“人工授精育种体系”即“AI育种体系”,其主要特点是：大规模使用种公牛的冷冻精液;在牛群中实施以获得优秀种公牛后代为目的的“定向选配”有计划地通过性能测定和后裔测定等育种措施,选育优秀种公牛;在育种群和生产群中全面使用“验证公牛”。这种育种体系的实施,可以在种子公牛即“公牛父亲”和种子母牛即“公牛母亲”的选择上实现一个较高的选择强度,在牛群的产奶性状和次级性状上获得较大的选择精确性。但AI育种体系最明显的缺点是：由于大规模的后裔测定,耗费大量…     

荷斯坦奶牛CN和DUMPS遗传缺陷病的巢式PCR检测方法的建立和应用

为建立荷斯坦奶牛瓜氨酸血症和尿苷酸核酶缺乏症两种遗传缺陷病的检测方法,根据文献报道的精氨酸琥珀酸合成酶、UMPS基因核苷酸序列,设计引物,通过条件的优化,建立了巢式PCR反应体系。结合PCR产物测序,建立了检测CN和DUMPS方法。取243份临床牛血清样品用巢式PCR检测并测序,发现CN野生型238份,CN杂合子型5份,CN突变型0份;DUMPS野生型236份,DUMPS杂合子型5份,DUMPS突变型2份。所建立的巢式PCR方法灵敏、特异,还兼具高通量的特点,适合口岸对荷斯坦奶牛CN和DUMPS遗传缺陷病的大样品量检测。     

绿壳蛋鸡FM03基因多态性PCR-RFLP检测方法研究

FM03基因是影响鸡蛋品质的主要基因之一,T329S位点突变是引起该基因功能异常的主要原因.本研究根据GenBank.k.&布的鱼腥味基因全序列设计引物,采用PCR-RFLP技术对绿壳蛋鸡T329S位点突变体进行检测.结果获得了特异性良好的引物,建立了稳定的反应体系和反应条件,所建方法判型准确、清晰.     

西安荷斯坦奶牛群5个基因座位遗传多态性的PCR-RFLP分析

应用PCR-RFLP方法对西安荷斯坦牛的κ-en、β-lg、β-lg5′侧翼区、CSN1S2、IGFBP-3共5个基因座位进行了多态性分析。结果表明，在西安荷斯坦牛群中，没有发现携带CSN1S2^P等位基因的个体，其多态信息含量为0。κ-en基因座位呈现低度多态(PIC=0．2366)，β-lg、β-lg5′侧翼区、IGFBP-3基因座位的多态信息含量分别为0．3168、0．3689、0．4439，均呈现中度多态。κ-en、β-lg、β-lg5′侧翼区、IGFBP-3、CSNIS2基因座位的杂合度和DNA多态度分别为0．2742、0．3947、0．4879、0．4891、0和0．0255、0．0116、0．0333、0．0112、0。而且，在西安荷斯坦牛群中，κ-en、β-lg、β-lg5′侧翼区、IGFBP-3共4个基因座位均处于Hardy-Weinberg平衡状态，CSN1S2基因座位处于纯合状态。     

荷斯坦牛瓜氨酸血症焦磷酸测序检测方法的建立与应用

为建立一种快速高通量的荷斯坦牛瓜氨酸血症(Citrullinemia,CN)分子检测方法,依据CN是由于精氨酸琥珀酸(ASS)合成酶基因编码第86位精氨酸的密码子突变为终止密码子的遗传学基础,利用Assay Design SW软件设计了1对引物和1条测序引物对三种不同基因型的基因材料进行测序分析。用建立的方法对55份进境荷斯坦牛血样进行检测,发现有1例为隐性基因携带者,将PCR产物进行常规测序,结果与焦磷酸测序检测结果一致。研究表明该方法可用于荷斯坦牛瓜氨酸血症的检测,是一种有效的新方法。     

德昌水牛Bola-DRB3基因第二外显子的PCR-RFLP多态性研究

本研究应用PCR-RFLP方法,对德昌水牛MHCⅡ类基因座位的Bola-DRB3基因第2外显子进行了遗传多态性研究。结果表明:HaeIII酶切出现7种基因型,即AA、AB、AD、BC、AC、BF和BB,共有A、B、C、D、F 5个复等位基因控制;AA型的频率最高,为优势基因型,A基因为优势基因。RsaI酶切结果出现3种基因型,即GH、GG、HH,共有G、H 2个基因控制;GG的频率最高,为优势基因型,G基因为优势基因。这表明德昌水牛在Bola-DRB3基因第2外显子上具有丰富的多态性。在RsaI酶切位点上,德昌水牛未达到Hardy-Weiberg平衡状态,显示在群体中有选择、基因突变、近交、遗传漂变等因素的一定影响,这是对保种极为不利的,应引起畜牧工作者的关注。在德昌水牛遗传资源的开发利用和保存中,作者认为应严格划定杂交改良和保种区的范围;在杂交改良区内可以进行选育、品种间杂交,充分利用杂种优势,提高其生产性能;而在保种区或群中不进行杂交,同时减少选育;使德昌水牛遗传资源的有效保存和充分利用有机的结合起来。