蚜虫传毒专化性与病毒附着蛋白的关系

用免疫荧光标记研究发现,桃蚜下颚口针有非持久性病毒ＷＭＭＶ－２和ＴＥＶ的病毒附羊位点,距口针尖端４５～６０μｍ,结合区全长约４５～５５μｍ,病毒随着蛋白含有α－Ｄ－甘露糖残基。用０．２％ＤＯＣ溶液处理１ｈ可破坏病毒附着位点。用０．２％ＤＯＣ处理蚜虫后,分别饲取ＰＡＶ和ＧＰＶ,结果禾谷缢管蚜传播ＧＰＶ和ＰＡＶ的能力显著降低,麦长管蚜和麦二叉蚜则不能传播ＧＰＶ和ＰＡＶ。从禾谷缢管蚜虫体提取的ＲＰ１和Ｒ     

承德春小麦黄矮病毒（WYDV）株系鉴定

承德春麦在历史上曾为河北省小麦黄矮病的主要流行区，近年再度严重流行。严重威胁着小麦生产。经多点取样，采用３种无毒蚜虫即麦长管蚜［Ｍａｃｒｏｓｉｐｈｕｍ（ｓｉｔｏｂｉｏｎ）ａｖｅｎａｅ（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）］（Ｍａ）。麦二叉蚜［Ｓｃｈｉｚａｐｈｉｓ（Ｔｏｘｏｐｔｅｒａ）ｇｒａｍｉｎｕｍ（Ｒｏｎｄ）］（ｓｇ）和禾缢管蚜［Ｒｈｏｐａｌｏｓｉｐｈｕｍｐａｄｉ（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）］（Ｒｐ）传毒进行生物测定和血清学酶标（ＤＡＳ—ＥＬＩＳＡ）试验，明确了河北省承德春麦黄矮病流行有２种株系类型；麦二又蚜、麦长管蚜株系（ＧＡＶ）和禾缢管蚜、麦长管蚜、麦二叉蚜株系）ＰＡＧＶ）混合发生，且ＧＡＶ株系为主流株系。蚜虫调查结果明确了造成该病害在生产上流行、传毒的主要蚜虫介体是麦长管蚜。试验结果为生产上抗病育种和治蚜防病提供了依据。     

春蚕豆花叶病毒的鉴定及防治途径

从我国甘肃等地春蚕豆区采集的蚕豆病毒病样本，经单斑分离得到病毒分离物Ｇ１７、Ｇ１２和Ｇ８。此８个分离要蚕豆均引起系统花叶症状；都能经姚蚜和豆蚜以持久性方式传播；传效率很高。经体外抗性测定，失活温度为５５－６０℃，稀释限点为１０＾－３～１０＾－４，体外存活期１－２天（２０～２５℃）。病毒粒体均为线形，大小明显的修饰作用。ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ试验证实，３个分离物与菜豆花叶病毒抗血清呈强耻性反应，反应值与     

大片吸虫分泌排泄抗原的分析

取广西牛源大片吸虫成虫制备出分泌排泄（ＥＳ）抗原，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，考马斯亮蓝染色显出７条蛋白带，免疫印迹试验（ＥＩＴＢ）测出其主要特异性免疫成分分子量为３６．３，２８．５及２５．５ｋＤ其中２８．５与２５．５ｋＤ与法国肝片吸虫ＥＳ的部分抗原成分相同，两种片形吸虫与抗血清可以交叉使用无特异性，但与日本血吸虫抗原及抗血清均无交叉反应，人工感染大片吸虫２周后的兔血清即能识别此抗原，ＥＳ抗原提取方法     

西藏大麦黄矮病病毒株系鉴定及介体蚜虫传毒能力分析

从西藏青稞发病田采集黄矮病株10份,经生物学分离并用BYDV-GAV、PAV、RPV、SGV 4种抗血清进行酶联免疫吸附(即EILSA法)测定和RT-PCR法验证。拉萨曲水6份标样与GAV抗血清有强反应,而与PAV、RPV、SGV抗血清无反应,说明拉萨曲水大麦黄矮病毒的主要株系为GAV株系。采用无毒麦无网长管蚜、麦长管蚜、禾谷缢管蚜传毒,麦长管蚜对GAV株系病毒传毒强,拉萨、山南两地的麦长管蚜传毒力无明显差异。     

黄瓜花叶病毒（CMV）高效价抗血清的制备及其在FLISA中的应用

以提纯的ＣＭＶ作为抗原，经静脉注射、肌肉注射和足垫注射等对家兔进行免疫，获得高效价的抗血清（琼脂双扩散效价为１／２５６）；在间接ＥＬＩＳＡ试验过程中，用ＰＢＳ＋０．０５％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００作为样本研磨液，用１：１６０００稀释度的ＣＭＶ抗血清或Ｚμｇ／ｍｌＣＭＶ抗血清的ＩｇＧ作为第一抗体，用１：１０００稀释度的冻干辣根过氧化物酶标记的羊抗兔的ＩｇＧ作为第二抗体，以待测样本光密度值与阴性对照光密度值之比大于或等于３作为判断待测样本为阳性反应的标准，结果表明：间接ＥＬＩＳＡ试验的灵敏度比生物检测的灵敏度要高３２～１６０倍。用间接ＥＬＩＳＡ检测矮牵牛的病毒样本３０份，ＣＭＶ占７０％。     

大麦黄矮病毒(BYDV-GPV)的循回传播机理

对植物组织中蚜虫口针分泌的胶状唾液染色观察发现，蚜虫刺探时口针穿行在细胞间隙，仅在吸食时下颚口针进入细胞内。禾谷缢蚜饲毒１２ｈ时ＲＴ－ＰＣＲ方法在后肠、血淋巴液和附唾液腺中检测到ＧＰＶ；而非介体麦长管蚜在ＧＰＶ毒源上吸食２４ｈ时，仅在后肠组织中检测到ＧＰＶ；当继续取食４８ｈ时，在后肠及血淋巴液中也发现了ＧＰＶ，但仍无能力进入附唾液腺，说明蚜虫后肠和附唾液腺对病毒均有专化选择作用，禾谷缢管蚜传播ＢＹＤＶ－ＧＰＶ时存在吸食、获毒和传毒三个阶段。     

大麦黄矮病毒（BYDV—GPV）的循回传播机理

对植物组织中蚜虫口针分泌的胶状唾液染色观察发现，蚜虫刺探时口针穿行在细胞间隙，仅在吸食时下颚口针进入细胞内。禾谷缢蚜饲毒１２ｈ时的ＲＴ－ＰＣＲ方法在后肠，血淋巴液和附唾液腺中检测到ＧＰＶ；而非介体麦长管蚜在ＧＰＶ毒源上吸食２４ｈ时，仅在后肠组织中检测到ＧＰＶ；当继续取食４８ｈ时，在后肠及血淋巴液中也发现了ＰＧＶ，但仍无能力进入附唾液腺，说明蚜虫后肠对病毒均有专化选择作用，禾谷缢管蚜传播ＢＹＤＶ－Ｇ     

黄瓜花叶病毒（CMV）高效价抗血清的制备及其在ELISA中的应用

以提纯的ＣＭＶ作为抗原，经静脉注射，肌肉注射和足垫注射等对家兔进行免疫，获得高效价的抗血清（琼脂双扩散效价为１／２５６），在间接ＥＬＩＳＡ试验过程中，用ＰＢＳ＋０．０５％，ＴｒｉｔｏｎＸ－１００作为样本研磨液，用１：１６０００稀释度的ＣＭＶ抗血清或２μｇ／ｍｌＣＭＶ抗血清的ＩｇＧ作为第一抗体，用１：１０００稀释度的冻干辣根过氧化物酶标记的羊抗兔的ＩｇＧ作为第二抗体，以待测样本光密度值与阴性对照光密     

山东省侵染西瓜的西瓜花叶病毒（WMV－2）和黄瓜花叶病毒（CMV）的研究

从采自平度、临沂两地的西瓜病叶中得到两个病毒分离物Ｗ—ＰＤ和Ｗ—ＬＹ。Ｗ—ＰＤ可侵染３科８种植物，可由桃蚜以非持久性方式传播。钝化温度６５℃，稀释限点１０￣（－４）～１０￣（－５），体外存活期２０～２５ｄ。提纯病毒呈典型的核蛋白吸收，最大吸收峰为２６０ｎｍ，最小吸收峰为２４６ｎｍ。Ａ２６０／Ａ２８０＝１．２４。病毒外壳蛋白分子量为３３．３４ＫＤ。Ｗ—ＰＤ的粒子线状，长度为６００～７５０ｎｍ。在病组织超薄切片中可以看到风轮状和环状内含体。Ｗ—ＰＤ与ＷＭＶ—２的抗血清有明显的沉淀反应。以上结果表明，Ｗ—ＰＤ为ＷＭＶ—２的一个分离物。Ｗ—ＬＹ可侵染５科１３种植物。钝化温度７０℃，稀释限点１０￣（－３）～１０￣（－４），体外存活期３～５ｄ，可由桃蚜以非持久方式传播，与ＣＭＶ的抗血清有明显的沉淀反应。Ｗ—ＬＹ应为ＣＭＶ的一个分离物。ＷＭＶ—２是我省西瓜病毒病的主要毒原，其分出率为７５％，ＣＭＶ的分出率为１６．３５％。     

抗小鹅瘟病毒中和性单克隆抗体研制及实验防治效果

用淋巴细胞杂交瘤技术研制出１１株抗小鹅瘟病毒（ＧＰＶ）单克隆抗体。这些单抗仅与ＧＰＶ反应，与其它细小病毒（ＣＰＶ、ＦＰＶ、ＰＰＶ）和其它禽病毒（ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＤＨＶ、ＤＰＶ）均不反应。腹水单抗的ＥＬＩＳＡ效价达１０－５～１０－７，琼扩沉淀效价达１∶２０～１∶５１２，鹅胚中和效价达１∶３０～１∶１２２，鹅体中和效价为１∶５４～１∶９６。ＧＰＡ１和ＧＰＣ５２株单抗对人工感染ＧＰＶ的雏鹅具有良好防治效果。     

侵染绿花椰菜的黄瓜花叶病毒（CMV）研究

从杭州市郊菜园表现严重花叶、矮化症状的绿花椰菜病株上获得一病毒分离物Ｃ－９３１。汁液摩擦接种６科２１种植物，Ｃ－９３１可侵染其中的６科１９种；体外抗性测定表明Ｃ－９３１的稀释限点（ＤＥＰ）为１０￣（－２），致死温度（ＴＩＰ）为５５－６０℃，２５℃体外存活期（ＬＩＶ）为４ｄ；提纯病毒粒体球形，平均直径２８ｎｍ；在琼脂双扩散反应中Ｃ－９３１能与ＣＭＶ抗血清呈阳性反应；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得其衣壳蛋白亚基分子量为２９ｋＤ；用ＣＦ－１１纤维素柱提取受侵植物组织中ｄｓＲＮＡ，电泳鉴定表明共有５个核酸组分，长度（ｋｂ）分别为３．３，３．０，２．２，０．９和０．３５．根据上述性状，Ｃ９３１被鉴定为黄瓜花叶病毒，且该分离物含卫星ＲＮＡ。     

甘蔗花叶病毒的提纯及抗血清制备

以ＳｃＭＶ－Ａ为材料,采用ＰＥＧ沉淀结合差速离心技术,经１０－４０％蔗糖密度梯度离心后再经浓缩后即为提纯病毒制剂。该提纯病毒具有典型的核蛋白吸收曲线,最大紫外吸收值在２５７ｎｍ处,最小紫外吸收值为２４０ｎｍ,Ａ２６０／２８０＝１．６８,病毒产量可达１．２５－１．３７ｍｇ／ｋｇ。将提纯病毒免疫家兔制备抗血清,所制备的抗血清经Ａ蛋白酶联免疫吸附法测定,其效价为１／１０２４,且可用于检测甘蔗花叶病毒。     

麦蚜循回传毒过程的超微结构研究

对禾谷缢管蚜和麦长管蚜传播小麦矮病毒ＧＰＶ株系的超微结构观察发现：禾谷管蚜取食８ｈ时,病毒进入蚜虫后肠肠腔中,１２－２４ｈ后进入后肠细胞质,ＧＰＶ与肠内壁顶端细胞膜接触,接触部位细胞膜逐渐下陷,形成小穴,向内凹陷发育为管状泡囊,而后进入血淋巴液,当病毒被附唾液腺吸收后蚜虫将病毒排吐进入唾液管中。     

一串红花叶病及其病原研究

１９８９─１９９２年间对杭州等地一串红（Ｓａｌｖｉａｓｐｌｅｎｄｅｎｓ）花叶病的发生及其病原进行了系统研究，从病株上分离得到的１７个病毒分离物，经生物学和血清学反应测定均符合黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）的特点。病毒分离物Ｍ－２２不能经由桃蚜传播使黄苗榆等供试寄主发病。用０．５ｍｏｌ／Ｌ磷酸钾盐缓冲液对Ｍ－２２进行提纯，提纯病毒经醋酸铀负染，测定其粒子大小为３０．２ｎｍ。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测定Ｍ－２２的外壳蛋白分子量约为２８ｋＤ，经琼脂双扩散测定，Ｍ－２２与几个已知ＣＭＶ抗血清均有强阳性反应，Ｍ－２２与一个番茄不孕病毒（ＴＡＶ）抗血清有阳性反应，但其抗血清与供试ＴＡＶ抗原无阳性反应。ＥＬＩｓＡ反应测定结果表明，Ｍ－２２与一个来自于十字花科大白菜上的ＣＭＶ分离物和一个来自于前科烟草上的ＣＭＶ分离物，在血清学关系上有明显差异。根据实验结果，作者认为目前在杭州等地侵染一串红的病原病毒主要是ＣＭＶ，侵染一串红的ＣＭＶ分离物Ｍ－２２可能是一个独立的血清型．     

水稻簇矮病毒：植物呼肠孤病毒属的一个新成员

水稻簇矮病毒（ＲＢＳＶ）是由黑尾叶蝉（Ｎｅｐｈｏｔｅｔｉｘｃｉｎｃｔｉｃｅｐｓ）和二点黑尾叶蝉（Ｎ．ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ）传播的持久性病毒，但不经卵传递；病害表现有奇特的多蘖症或节枝症，且其病株汁液与水稻矮缩病毒（ＲＤＶ）抗血清不起免疫反应．采用差速离心和蔗糖密度梯度离心，可获得ＲＢＳＶ提纯制剂，提纯制剂经紫外扫描，呈典型的核蛋白吸收曲线，Ａ２６０／２８０＝１．６４．在电镜下观察提纯病毒，可见大量比较均一的球状粒体，直径为６０．０ｎｍ．病毒粒体有双层衣壳，蛋白亚基清晰可辨．通过免疫扩散和免疫电镜试验，病毒粒体与ＲＢＳＶ抗血清有明显的血清学反应，而这种抗血清与ＲＤＶ、水稻瘤矮病毒（ＲＧＤＶ）不起反应．提纯ＲＢＳＶ制剂以苯酚－甲基苯酚－ＳＤＳ方法提取核酸．将其注射到昆虫介体内，具有侵染性．核酸制品有典型的核酸紫外吸收曲线，Ａ２６０／２８０＝２．０２．根据核酸在不同离子强度下对ＲＮａｓｅ的稳定性等的测定，表明其核酸属双链ＲＮＡ．根据紫外吸收测定，ＲＮＡ在ＲＢＳＶ粒体中的含量为１７．５％．用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定，其ＲＮＡ的总分子质量为１６．６６×１０６．各组分相对分子质量分别为２．７０×１０６、２．３０×１０６、１?     

Genus BIOBLAPSIS Foerster

ＧｅｎｕｓＢＩＯＢＬＡＰＳＩＳＦｏｅｒｓｔｅｒ,１８６９．ＢｉｏｂｌａｐｓｉｓＦｏｅｒｓｔｅｒ,Ｄ．１８６９（１８６８）．Ｖｅｒｈ．Ｎａｔｕｒｈ．Ｖｅｒ．Ｐｒｅｓ．Ｒｈｅｉｎｌａｎｄｅ２５：１６２．Ｇｅｎｏｔｙｐｅ：ＢａｓｕｓｆｌａｖｉｐｅｓＨｏｌｍ...     

家蚕微孢子虫Nosemabombycis抗体蛋白非特异性结合的去除研究

Ｎｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓ（Ｎ．ｂ）抗血清常受非特异性干扰而难于实用，本试验通过硫酸铵盐析，透析袋及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５柱层析脱盐，ＤＥＡＥ纤维素柱层析，组织粉吸收等一系列纯化过程，并经ＰＡＧＥ电泳检查表明所获得的高纯度抗体蛋白成分具有很强的特异性。用以制成致敏炭素检液，对Ｎｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓ发生阳性反应，对ＳＣＭ６，ＳＣＭ７均不发生阳性凝集反应，经万余张原种实用性试验，证明其灵敏度     

分泌抗BVDV McAb杂交瘤细胞株的建立

用牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）感染ＭＤＢＫ细胞,将感染细胞培养物冻融后离心取上汪经ＰＥＧ沉淀浓缩抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取血清抗体效价高遥免疫鼠的脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在ＰＥＧ作用下融合,产生杂交瘤细胞,用间接ＥＬＩＳＡ法检测杂交瘤细胞生长孔上清,筛选阳性杂交瘤细胞株。以有限稀法克隆２－３次,得到８ 泌抗ＢＶＤＶ的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株。８株ＭｃＡｂ对ＢＶＤＶ,猪瘟均呈阳性反应。杂交     

兔出血症病毒主要结构多肽的纯化及免疫保护性试验

人工感染ＲＨＤＶ－ＮＪ株病死兔肝经－５０℃反复冻融,氯仿处理,ＰＥＧ沉淀、差速离心,Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ柱层析得纯化病毒,纯化ＲＨＤＶ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＣｕＣｌ２负染色后,切取主要结构多肽ＶＰ１（６４．５ＫＤ）凝胶带,除去ＣｕＣｌ２和ＳＤＳ获得ＶＰ１,高效液相色谱鉴定只有一个蛋白峰,Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔｔｉｎｇ,ＨＡ和ＨＩ结果显示纯化ＶＰ１具有良好的抗原表位稳定性。无母源抗体的３月龄兔１