蛋白酶抑制剂E-64对猪卵母细胞体外成熟的影响

为了研究猪卵母细胞成熟过程中在成熟液中添加蛋白酶抑制剂E-64对猪卵母细胞体外成熟的影响,试验采用在成熟液中添加不同浓度的E-64进行体外培养44 h后统计成熟率,计算卵母细胞的成熟率,确定最佳浓度为10μmol/L。将10μmol/L组、未添加组的卵母细胞进行固定、染色,鉴定卵母细胞核成熟情况。结果表明:在猪卵母细胞成熟液中添加10μmol/L的E-64,成熟率和核成熟率显著高于未添加组,并能显著提高猪孤雌卵母细胞的分裂率和囊胚发育率。     

雌激素对奶牛乳腺上皮细胞中酪蛋白和甘油三酯表达的影响

为探讨雌激素对乳腺上皮细胞中酪蛋白及甘油三酯表达的影响,试验于2018年2月至2018年4月在新疆肉乳用草食动物营养实验室进行,实验选取扩增生长状态良好的乳腺上皮细胞,添加0、50、100、200μmol/l雌激素孵育乳腺上皮细胞后,分别在12、24、48、72 h后检测各组细胞酪蛋白及甘油三酯表达的情况。结果显示,在12 h时,添加50μmol/l雌激素组CSN1的表达量极显著高于对照组(P<0.01),添加50μmol/l雌激素组TG表达量极显著高于对照组(P<0.01);50μmol/l雌激素添加组CSN1表达量显著高于200μmol/l雌激素添加组(P<0.05),且极显著高于100μmol/l雌激素添加组(P<0.01),100μmol/l雌激素添加组CSN2表达量显著高于200μmol/l雌激素添加组(P<0.05),50μmol/l雌激素添加组TG表达量极显著高于100、200μmol/l雌激素添加组(P<0.01);添加50μmol/l雌激素时,12、48、72 h的CSN1表达量显著高于24 h(P<0.05),在72 hCSN2表达量显著高于其他各时间点(P<0.05),24、72 h时TG表达量显著高于12、48 h(P<0.05)。结果发现,添加雌激素可以促进乳腺上皮细胞中CSN1、CSN2及TG的表达。200μmol/l在一定条件下促进CSN1的表达效果最好;100、200μmol/l雌激素添加组均能够促进CSN2的表达,且100μmol/l促进CSN2的表达效果最好,尤其是在12、24 h;50、200μmol/l雌激素添加组可以促进TG的表达,但100μmol/l雌激素添加组能够抑制TG的表达。     

碱性蛋白酶和木聚糖酶对玉米-豆粕型日粮干物质和粗蛋白质的体外酶解效果研究

本试验旨在通过透析袋体外酶解法研究碱性蛋白酶和木聚糖酶对玉米-豆粕型日粮还原糖生成量、干物质和粗蛋白质体外酶解效果的影响。试验采用单因子试验设计,碱性蛋白酶的添加浓度分别为20、40、60、80、100 U/g,木聚糖酶的添加浓度分别为10、20、30、40、50 U/g,每个添加水平分别设5个重复。结果表明:碱性蛋白酶添加浓度由20 U/g提高至100 U/g时,可显著提高日粮还原糖生成量和干物质酶解效率(二次,P<0.05);木聚糖酶添加浓度由10 U/g提高至50 U/g时,显著提高日粮干物质酶解效率(二次,P<0.05)。以干物质消化率为评价指标时,根据二次曲线方程计算得出碱性蛋白酶和木聚糖酶的适宜添加浓度分别为65 U/g和33 U/g。     

人工分子伴侣系统辅助鸡IL-18重组蛋白复性过程中研究的影响因素

将重组原核表达质粒pGEX-mChIL-18转化宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG于37℃诱导培养获得表达.表达的包涵体经超声波破碎、洗涤后以6 mol/L的盐酸胍溶解,使蛋白彻底变性.然后按照试验设计,考察不同浓度组成的人工分子伴侣体系对不同浓度鸡IL-18重组蛋白复性率的影响.试验结果表明,利用人工分子伴侣系统辅助鸡IL-18重组蛋白的复性存在最佳的条件,优化该条件能够提高该融合蛋白的复性率,且产物都具有良好的生物学活性,为鸡IL-18重组蛋白的进一步应用研究奠定了基础.     

木聚糖酶和果胶酶对小麦-玉米-豆粕型日粮的体外酶解研究

该试验旨在通过透析袋体外酶解的方法,研究木聚糖酶和果胶酶对小麦-玉米-豆粕型日粮还原糖生成量、干物质和粗蛋白体外酶解效果的影响。试验采用单因子试验设计,木聚糖酶的添加浓度分别为10、30、50、70、90 U/g,果胶酶的添加浓度分别为3、6、9、12、15 U/g,每个添加水平分别设5个重复。试验结果表明:当木聚糖酶添加量为50、70、90 U/g时,还原糖生成量显著高于对照组和其它低剂量添加组(P0.05);果胶酶添加量为12 U/g时,还原糖生成量显著高于对照组和3 U/g添加组(P0.05);木聚糖酶添加浓度由10 U/g提高至90 U/g时,提高了还原糖生成量(线性和二次,P0.05)和粗蛋白质酶解率(线性和二次,P0.05);果胶酶添加浓度由3 U/g提高至15 U/g时,提高了还原糖生成量(二次,P0.05)。     

E-64对绵羊卵母细胞成熟及胚胎发育能力的影响

为了研究E-64对绵羊卵母细胞体外成熟及胚胎发育能力的影响,试验在体外成熟基础液中分别添加0,1,5,10μmol/L的E-64。结果表明:与0μmol/L E-64相比,1μmol/L的E-64能显著提高绵羊卵母细胞囊胚率(P0.05),5,10μmol/L的E-64能极显著提高其囊胚率(P0.01),但各浓度E-64对绵羊卵母细胞体外成熟率、卵裂率及囊胚细胞数均无显著影响(P0.05)。     

海藻糖对人脑型肌酸激酶热变性的保护作用

肌酸激酶(creatine kinase,CK)是研究蛋白质折叠和稳定性的一个理想的模型蛋白。热失活研究结果显示海藻糖能有效防止人脑型肌酸激酶(human brain-type creatine kinase,hBBCK)的热失活和热变性。1.0mol/L海藻糖使hBBCK热失活的半失活温度(T_m)升高4.6℃,活化能由原来的29.7 kJ/mol升高到41.1 kJ/mol。内源荧光光谱研究结果显示在海藻糖浓度分别为0、0.6、0.8和1.2mol/L时,hBBCK热变性的表观转变温度(T_1/2)相应的从43.0℃上升到46.5、47.7和49.9℃。内源荧光和ANS外源荧光光谱研究结果表明海藻糖的疏水作用可能对hBBCK的热稳定性起了重要作用。hBBCK复性动力学试验结果表明海藻糖能有效抑制hBBCK复性过程中聚集体的形成。     

鸡β-防御素在大肠杆菌中的高效表达及复性

鸡β-防御素(gallinacin-3,Gal3)是鸡体内重要的防御因子,本试验研究了鸡Gal3融合蛋白在大肠杆菌中高效表达的规律,并探索了重组蛋白质的复性工艺.结果表明,加入诱导剂后1h,开始有可检出量的重组蛋白质表达,2h的表达水平已接近最大量;化学诱导剂IPTG 0.2～1.2mol/L对重组蛋白的产量没有明显影响.经Lablmage软件分析,融合蛋白的产量可达菌体总蛋白的35%以上,且主要以包涵体形式存在.将所获包涵体用8mol/L尿素溶解后,分步稀释于含有氧化型谷胱甘肽和还原型谷胱甘肽的复性系统中,重组蛋白得到完全复性.12mg/L复性的重组鸡Gal3能抑制肠炎沙门氏菌的生长,24mg/L能抑制肠致病型大肠杆菌的生长.     

小麦型饲粮中添加酸性木聚糖酶对肉鸡消化道食糜黏度的影响

本试验旨在对比研究酸性和中性木聚糖酶的酶学性质及其在小麦型饲粮中的降黏效果。饲养试验检测2种木聚糖酶（酸性和中性木聚糖酶）对胃肠液的耐受性;pH 3.5条件下测试2种木聚糖酶的相对活性;选用木聚糖纯品和谷物检测2种木聚糖酶的降黏效果;选取512只1日龄的817白羽肉公鸡,随机分为4组（每组8个重复,每个重复16只）,对照组饲喂小麦型基础饲粮,试验组在小麦型基础饲粮中分别添加4 U/g中性木聚糖酶、2和4 U/g酸性木聚糖酶,试验期42 d。结果显示：1）相比中性木聚糖酶,酸性木聚糖酶对肉鸡胃肠液有更好的耐受性。2）在pH 3.5条件下,酸性木聚糖酶的相对活性比中性木聚糖酶高64.1%。3）对于高黏（黑麦）阿拉伯木聚糖,相比中性木聚糖酶,酸性木聚糖酶的降黏效果提升了42.9%。4）在小麦型饲粮中添加木聚糖酶提高了肉鸡的生长性能,其中4 U/g酸性木聚糖酶对生长性能的提高效果优于4 U/g中性木聚糖酶。5）对于饲喂小麦型饲粮的肉鸡,4 U/g酸性木聚糖酶组粗蛋白质表观消化率分别比2 U/g酸性木聚糖酶组、4 U/g中性木聚糖酶组和对照组提高了3.5%(P<0.05)、7.4%(P&l...     

植酸酶和木聚糖酶对断奶仔猪生长性能及蛋白质利用率的影响

本试验研究了在饲粮中添加植酸酶和木聚糖酶对断奶仔猪生长性能及蛋白质利用率的影响。采用完全随机设计．将90头35日龄的断奶仔猪分为5组．每组3个重复．每个重复6头。5个处理组分别为：（1）玉米-豆粕基础日粮（正对照组．PC），（2）基础日粮-75％磷酸氢钙（负对照组．NC）．（3）负对照组＋植酸酶（植酸酶组，phy），（4）负对照组＋木聚糖酶（木聚糖酶组，xy），（5）负对照组＋植酸酶＋木聚糖酶（植酸酶-木聚糖酶组，phy—xy）．植酸酶的添加量为750U／kg，木聚糖酶的添加量为4000U／kg。结果表明：低磷饲粮添加植酸酶或木聚糖酶后．平均日增重和平均日采食量都得到了明显改善（P〈0．05）．植酸酶和木聚糖酶同时添加对仔猪平均日增重的改善极显著（P〈0．01）。在低磷口粮组单独添加植酸酶或同时添加植酸酶和木聚糖酶极显著提高了蛋白质生物学价值（P〈0．01）。饲粮加酶后，血清尿素氮浓度显著降低（P〈0．05）．添加植酸酶或同时添加植酸酶和木聚糖酶后．血清总蛋白浓度显著升高（P〈0．05）．但添加酶对蛋白质表观消化率无显著影响．总之．在断奶仔猪低P日粮中添加植酸酶或木聚糖酶都不同程度地改善了仔猪生长性能．促进了蛋白质的利用．二酶同时添加对仔猪的平均日增重有显著的协同效应．     

小麦基础日粮中添加植酸酶-木聚糖酶对肥育猪能量代谢的影响

本试验研究了日粮中蛋白和磷含量、植酸酶和/或木聚糖酶的添加对生长肥育猪生长性能、养分消化率以及能量代谢的影响。减少日粮蛋白质含量可提高养分的消化率、猪的生长性能以及日粮净能。降低磷水平可以提高试验猪的产热,并且对所有参数具有负面影响的趋势。添加植酸酶可提高日增重和日粮能量代谢率。添加木聚糖酶可提高养分和能量的消化率,但对日粮净能没有影响。同时添加植酸酶和木聚糖酶并没叠加效应。     

牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)核蛋白基因原核表达载体的构建及其重组蛋白的纯化与鉴定

利用RT-PCR方法扩增出牛呼吸道合胞体病毒(BRV)核蛋白基因(N)中1 176bp的特异性片段,将目的片段定向克隆到pET-32a(+)原核表达载体,转化BL21(DE3)表达菌;经IPTG进行诱导,并探讨IPTG浓度、诱导时间对重组蛋白的影响。表达的大肠杆菌超声破碎后,沉淀物用含有1%TritonX-100的PBS溶液洗去膜碎片和膜蛋白。在尿素变性条件下,用镍柱亲和层析法纯化NP包涵体,并通过梯度透析方法进行透析复性,Western blot检测目的蛋白的反应原性。结果显示,酶切和测序成功构建阳性重组质粒,将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导后发现该重组蛋白主要以包涵体形式存在于细菌中,大小约为60 000,最佳诱导条件为0.000 8 mol/L IPTG诱导4h。通过BCA法测定镍柱纯化的N蛋白质量浓度为0.534g/L,复性后质量浓度为0.397g/L。Western blot检测表明N蛋白具有反应原性。结果表明,在大肠杆菌中成功表达并纯化出N蛋白,并通过复性获得具有反应原性的N蛋白,为N蛋白下一步的应用奠定基础。     

小麦型日粮中添加木聚糖酶对肉鸭生产性能的影响

本试验在小麦型基础日粮中分别添加木聚糖酶0、50、100、150、200g/t饲料(5000U/g酶)饲喂12日龄樱桃谷肉鸭,观察木聚糖酶对肉鸭生产性能的影响。结果表明:添加木聚糖酶对肉鸭生产性能影响不显著(P0.05),单位增重饲料成本以添加量50 g/t(即每1 kg饲料含250 U木聚糖酶)的有效含量为佳。     

正交设计优化星星草ISSR-PCR反应体系研究

采用正交设计法优化适合于星星草的ISSR体系,对影响ISSR-PCR的多个因素,包括引物浓度、Taq酶的用量、Mg2 和dNTP浓度进行了比较、优化;同时又对DNA模板浓度,PCR扩增程序中的退火温度及循环次数进行了筛选.结果确定了星星草ISSR PCR反应体系的最佳方案为:PCR扩增程序,94℃预变性5min;进行40个循环的94℃变性45s,55℃复性45 s,72℃延伸2 min;72℃延伸10 min,4℃保存.20μl反应体系包括10%buffer 2μl、模板DNA60ng、dNTP 100μmol/L、TaqDNA聚合酶1.5U、引物0.8mmol/L、Mg2 2.0mmol/L.     

复合木聚糖酶和纤维素酶对43～65日龄广西麻鸡生产性能及屠宰性能的影响

试验旨在研究复合木聚糖酶和纤维素酶对饲喂低能量水平非常规日粮中的43~65日龄广西麻鸡生产性能及屠宰性能的影响。试验选取43日龄的广西麻鸡肉公鸡800只,随机分成5个试验组。正对照组(PC组)饲喂正常能量水平的基础饲粮;负对照组(NC组)饲喂在PC组饲粮的基础上降低1.04 MJ/kg能量水平的饲粮;3个复合木聚糖酶和纤维素酶组饲喂在NC组饲粮中分别添加复合木聚糖酶和纤维素酶l、复合木聚糖酶和纤维素酶2、复合木聚糖酶和纤维素酶3的饲粮,每组10个重复,每个重复16只鸡。结果表明:(1)与负对照组相比,正对照组与添加复合木聚糖酶和纤维素酶处理1~3组试验末重和料重比均显著增加(P<0.05)。与正对照组相比,添加复合木聚糖酶和纤维素酶处理3组日增重显著降低(P<0.05),添加复合木聚糖酶和纤维素酶处理1组和2组与正对照组相比,日增重与日采食量差异均不显著;(2)与负对照组相比,正对照组和酶制剂2、3组全净膛率显著增加(P<0.05)。试验结果表明,43~65日龄广西麻鸡饲喂非常规日粮中添加NSP酶(纤维素酶和木聚糖酶)能够替代饲料1.04 MJ/kg的代谢能。     

水貂生长激素的原核表达及特异性抗血清制备

本研究旨在建立水貂生长激素(mink growth hormone,mGH)的原核高效表达体系,探索mGH蛋白规模化生产方法,利用获得的目的蛋白制备特异抗血清。将已构建的原核表达载体pET28b-mGH转化大肠杆菌Rosetta(DE3)TMpLysS感受态细胞,经IPTG诱导表达,超声破碎菌体后离心获得包涵体蛋白,利用8mol/L尿素对其进行溶解和复性,经Ni-NTA树脂亲和层析纯化获得重组蛋白。通过Western blotting检测及MALDI-TOFMS质谱分析对获得的蛋白进行鉴定。用SDS-PAGE电泳法检测蛋白纯度,用BCA法测定其浓度。复性mGH蛋白与完全弗氏佐剂或不完全弗氏佐剂乳化制备免疫抗原,采用皮下多点注射法免疫3只新西兰大白兔,首次免疫剂量为600μg/只,二免剂量为600μg/只,三免剂量为400μg/只。三免10d后分离制备血清,Western blotting法检测其特异性,间接ELISA法检测其效价。结果表明,原核表达的包涵体经Ni-NTA柱纯化后所得蛋白鉴定为mGH融合蛋白;SDS-PAGE电泳鉴定复性mGH蛋白条带单一,纯度达90%以上,BCA法计算蛋白浓度为669μg/mL,均达到了免疫动物的要求;制备的抗血清经Western blotting检测具有良好的结合特异性,间接ELISA法测定其抗体效价达1∶256 000以上。上述结果表明,原核表达载体pET28b-mGH可在大肠杆菌Rosetta(DE3)TMpLysS细胞中高效表达mGH融合蛋白,表达蛋白经变性、复性和纯化后免疫新西兰大白兔,可制备高效价特异性抗血清。     

血红素蛋白和水解珠蛋白对断奶仔猪生长性能和血液指标的影响

试验旨在通过在教槽料和保育料中添加血红素蛋白和水解珠蛋白,研究其在断奶仔猪上的补血效果和对仔猪生长的影响,评价其应用前景。选用(22±1)日龄(杜×长×大)断奶仔猪432头,随机分为四个组,其中A组为对照组,B、C、D为试验组,每组6个重复,每个重复18头猪。A组为玉米-豆粕型基础日粮,B、C、D组分别在基础日粮的基础上添加0.5 g/kg血红素蛋白、1.0 g/kg血红素蛋白、1.0 g/kg血红素蛋白+10.0 g/kg水解珠蛋白。试验分教槽期(10 d)和保育期(28 d)、过渡期(5 d),共43 d。结果表明,在教槽阶段,不同处理组对仔猪的生长状况和补血无明显影响。在保育阶段,1.0 g/kg血红素蛋白+10.0 g/kg水解珠蛋白组显著提高了仔猪平均日采食量和平均日增重(P0.05)。添加血红素蛋白可提高血液中血红蛋白的浓度,与对照组76.28 g/l相比,B组和D组血红蛋白浓度显著上升至86.39 g/l和90.14 g/l(P0.05)。因此日粮中添加血红素蛋白可有效预防保育猪贫血,其和水解珠蛋白的组合使用还可以显著改善仔猪的生长性能,有较好的应用前景。     

水貂生长激素的原核表达及特异性抗血清制备

本研究旨在建立水貂生长激素（mink growth hormone,mGH）的原核高效表达体系,探索mGH蛋白规模化生产方法,利用获得的目的蛋白制备特异抗血清。将已构建的原核表达载体pET28b-mGH转化大肠杆菌Rosetta（DE3）^TM pLysS感受态细胞,经IPTG诱导表达,超声破碎菌体后离心获得包涵体蛋白,利用8 mol/L尿素对其进行溶解和复性,经Ni-NTA树脂亲和层析纯化获得重组蛋白。通过Western blotting检测及MALDI-TOF-MS质谱分析对获得的蛋白进行鉴定。用SDS-PAGE电泳法检测蛋白纯度,用BCA法测定其浓度。复性mGH蛋白与完全弗氏佐剂或不完全弗氏佐剂乳化制备免疫抗原,采用皮下多点注射法免疫3只新西兰大白兔,首次免疫剂量为600 μg/只,二免剂量为600 μg/只,三免剂量为400 μg/只。三免10 d后分离制备血清,Western blotting法检测其特异性,间接ELISA法检测其效价。结果表明,原核表达的包涵体经Ni-NTA柱纯化后所得蛋白鉴定为mGH融合蛋白;SDS-PAGE电泳鉴定复性mGH蛋白条带单一,纯度达90%以上,BCA法计算蛋白浓度为669 μg/mL,均达到了免疫动物的要求;制备的抗血清经Western blotting检测具有良好的结合特异性,间接ELISA法测定其抗体效价达1：256 000以上。上述结果表明,原核表达载体pET28b-mGH可在大肠杆菌Rosetta（DE3）^TM pLysS细胞中高效表达mGH融合蛋白,表达蛋白经变性、复性和纯化后免疫新西兰大白兔,可制备高效价特异性抗血清。     

麦芽糖诱导耐碱性木聚糖酶基因在枯草芽孢杆菌中的表达

文章目的是考察麦芽糖诱导木聚糖酶基因在枯草芽孢杆菌WB700中的表达。以麦芽糖为诱导剂,对诱导浓度、诱导时机、诱导温度和麦芽糖的添加方式等主要因素进行了分析比较。当菌体生长至发酵液吸光值OD600达到1.3时加入终浓度为4.5%麦芽糖,37℃,持续诱导10h,木聚糖酶活力达到最高,为56.32U/mL,通过SDS-PAGE检测对比显示:经麦芽糖诱导表达的木聚糖酶比不加麦芽糖诱导的木聚糖酶表达量高,表达效果更明显。结果表明麦芽糖在最佳的诱导条件下,对木聚糖酶的酶活有明显的提高作用。     

铜对体外仔猪软骨细胞增殖和自分泌IGF-Ⅰ、IGFBP3的影响

体外分离、培养仔猪关节软骨细胞,然后在细胞培养液中分别添加0、7.8、15.6、31.2、62.5μmol/L铜.结果表明,软骨细胞在4种浓度的铜中可存活并增殖,而且能增加胰岛素样生长因子(IGF-Ⅰ)、胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP3)的分泌量.但随铜浓度的增加,其存活率、增殖率、3H-TdR掺入率及IGF-Ⅰ、IGFBP3的分泌量有明显的差异.且以培养液中添加31.2μmol/L铜对软骨细胞的增殖作用最强,增殖率、3H-TdR掺入数、IGF-Ⅰ、IGFBP3的分泌量显著高于对照组(P＜0.01).表明31.2μmol/L铜浓度是促进体外软骨细胞增殖和自分泌IGF-Ⅰ、IGFBP3的最适浓度.